本文關(guān)鍵詞：免疫促凋亡scFv-Fdt-tBid基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞的雙靶向治療前列腺癌的研究

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【摘要】：當(dāng)前,在世界范圍內(nèi)前列腺癌發(fā)病率已躍居男性所有惡性腫瘤的第二位,且其在發(fā)展中國(guó)家中的發(fā)病率越來越高。目前雖然對(duì)前列腺癌有多種治療方法,但是對(duì)于轉(zhuǎn)移性及去勢(shì)抵抗性的前列腺癌目前仍然沒有有效的治療措施。本實(shí)驗(yàn)組著眼于前列腺癌靶向治療策略的建立,曾成功構(gòu)建了抗前列腺特異性抗原(prostate specific antigen PSA)的特異性單克隆抗體的單鏈抗體基因。在此基礎(chǔ)上我們此次成功構(gòu)建了免疫源性低、滲透性強(qiáng)的PSA靶向重組免疫殺傷分子scFv-Fdt-tBid,該分子由三部分構(gòu)成,分別為特異性針對(duì)PSA的單鏈抗體scFv基因、白喉外毒素膜轉(zhuǎn)位功能肽Fdt編碼序列及凋亡誘導(dǎo)片段截短型Bid基因t Bid序列。然而,如果單純的將重組分子導(dǎo)入機(jī)體內(nèi)會(huì)存在許多問題影響重組靶向分子的作用效果如:重組分子需經(jīng)過血液循環(huán)后才能聚集于腫瘤局部,作用距離長(zhǎng)容易被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除外還難以在腫瘤局部保證靶向殺傷分子的作用濃度,此外實(shí)體瘤內(nèi)壓力大導(dǎo)致重組分子難以進(jìn)入腫瘤內(nèi)部亦影響其作用效果。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell MSC)是一種在大量人體組織中存在的成體干細(xì)胞,由于其特異性的腫瘤趨向性、自體移植的可行性及基因修飾的穩(wěn)定性使其成為了一種絕佳的介導(dǎo)基因治療的細(xì)胞載體。同時(shí)他們?nèi)〔娜菀�、體外擴(kuò)增迅速及旁分泌能力強(qiáng)大同樣顯示著其作為細(xì)胞載體遞送免疫促凋亡分子的潛能。因此,我們?cè)O(shè)想利用MSC作為細(xì)胞載體,用重組基因sc Fv-Fdt-tBid對(duì)其進(jìn)行修飾,通過尾靜脈注射的方式使其進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng),趨向富集于腫瘤組織局部并持續(xù)分泌表達(dá)scFv-Fdt-tBid,從而在腫瘤局部建立高濃度、近距離、長(zhǎng)時(shí)程靶向結(jié)合殺死PSA陽性前列腺癌細(xì)胞的雙重靶向治療模式。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,scFv-Fdt-tBid能在MSC細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)并分泌,并能有效下調(diào)PSA陽性的LNCaP細(xì)胞、C4-2細(xì)胞、22RV1前列腺癌細(xì)胞的存活率。重組分子的表達(dá)對(duì)于MSC的增殖能力、分化能力等無明顯影響。在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,MSC.scFv-Fdt-tBid能有效地、特異地誘導(dǎo)PSA陽性前列腺癌細(xì)胞凋亡。在腫瘤趨向性檢測(cè)中,體外Transwell實(shí)驗(yàn)顯示前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清能有效地誘導(dǎo)MSC.scFv-Fdt-tBid的遷移。在體內(nèi)試驗(yàn)中,小動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)顯示MSC.scFv-Fdt-tBid-LUC細(xì)胞通過尾靜脈注射后能有效趨向于腫瘤部位并大量聚集,且間接免疫熒光染色顯示在肝、心、脾、肺、腎組織內(nèi)很少檢測(cè)到重組分子表達(dá),而在腫瘤部位重組分子高表達(dá)。體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MSC.scFv-Fdt-tBid能明顯抑制22RV1皮下腫瘤的生長(zhǎng),且腫瘤組織中檢測(cè)到明顯的凋亡發(fā)生,而通過對(duì)血液相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)及內(nèi)臟組織HE染色檢測(cè)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建前列腺癌雙重靶向殺傷模式能有效的誘導(dǎo)基因修飾的MSC在腫瘤部位聚集,并持續(xù)釋放重組靶向殺傷分子對(duì)腫瘤實(shí)現(xiàn)有力的抑制作用。這種雙靶向的治療策略的提出是對(duì)前列腺癌傳統(tǒng)治療策略的一種有力的補(bǔ)充,并且對(duì)于臨床靶向治療的完善提供了理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 間充質(zhì)干細(xì)胞 靶向治療 免疫促凋亡分子
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 文獻(xiàn)回顧15-26
• 實(shí)驗(yàn)一 免疫促凋亡分子SCFV-FDT-TBID的構(gòu)建、表達(dá)及體外活性檢測(cè)26-41
• 1 材料26-30
• 2 方法30-34
• 3 結(jié)果34-38
• 4 討論38-41
• 實(shí)驗(yàn)二 SCFV-FDT-TBID基因修飾MSC的建立及體外抗腫瘤活性鑒定41-55
• 1 材料41-42
• 2 方法42-45
• 3 結(jié)果45-52
• 4 討論52-55
• 實(shí)驗(yàn)三 SCFV-FDT-TBID基因修飾MSC細(xì)胞腫瘤趨向性檢測(cè)55-63
• 1 材料55-56
• 2 方法56-58
• 3 結(jié)果58-61
• 4 討論61-63
• 實(shí)驗(yàn)四 SCFV-FDT-TBID基因修飾MSC體內(nèi)抗腫瘤活性及安全性檢測(cè)63-71
• 1 材料63-64
• 2 方法64-65
• 3 結(jié)果65-69
• 4 討論69-71
• 小結(jié)71-72
• 參考文獻(xiàn)72-84
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果84-85
• 致謝85

【相似文獻(xiàn)】

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1 嚴(yán)奉奇;免疫促凋亡scFv-Fdt-tBid基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞的雙靶向治療前列腺癌的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：527962