發(fā)布時間：2017-07-06 21:13

  本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍調(diào)節(jié)脂肪細胞對白血病細胞的化療保護作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： 急性髓系白血病 脂肪細胞 二甲雙胍 化療保護

【摘要】：目的:急性髓系白血病(AML)惡性程度高、預(yù)后差,與其骨髓微環(huán)境密切相關(guān)。脂肪細胞作為微環(huán)境中重要組分,參與白血病發(fā)生發(fā)展,但有關(guān)骨髓原位脂肪細胞的作用研究仍存在諸多盲點。二甲雙胍是廣泛應(yīng)用的口服降糖藥物,被研究證實可通過抑制脂肪生成,阻斷實體腫瘤細胞增殖與轉(zhuǎn)移,但其能否調(diào)控白血病骨髓脂肪細胞作用尚未見相關(guān)報道。本研究對初發(fā)AML及正常者骨髓活檢切片進行回顧性分析,運用計算機網(wǎng)格計點法精確定量骨髓脂肪細胞特征,初步探討骨髓原位脂肪細胞與成人AML難治間的相關(guān)性。體外誘導(dǎo)白血病患者骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)成脂分化,明確其對白血病細胞的化療保護及可能作用機制;與此同時,給予二甲雙胍干預(yù),探討二甲雙胍對脂肪細胞調(diào)控白血病細胞抵抗化療的影響,為白血病靶向治療提供新思路。方法:(1)建立自主研發(fā)計算機網(wǎng)格計點軟件,檢測61例初發(fā)AML患者與71例臨床診斷正常者骨髓脂肪細胞特征(含量及大小),比較兩組間差異;并依據(jù)預(yù)后將初發(fā)AML患者分為緩解組及難治組,分析骨髓脂肪細胞特征與AML難治性的相關(guān)性。(2)將初發(fā)AML及正常者骨髓MSC誘導(dǎo)成脂分化,油紅染色觀察脂肪細胞形態(tài),q RT-PCR檢測成脂基因(PPARγ、C/EBPα、FABP4)的表達,驗證脂肪細胞形成。(3)構(gòu)建脂肪細胞與THP-1細胞共培養(yǎng)體系,篩選阿糖胞苷(Ara-c)最佳作用濃度,研究初發(fā)AML與正常者骨髓MSC衍生脂肪細胞對白血病細胞化療敏感性的差別;蛋白芯片技術(shù)檢測AML骨髓上清上調(diào)蛋白并根據(jù)調(diào)變程度及文獻選擇脂肪因子;Western Blot結(jié)合q RT-PCR驗證兩組患者骨髓MSC衍生脂肪細胞中調(diào)變蛋白表達情況。(4)初發(fā)AML患者骨髓MSC誘導(dǎo)形成脂肪細胞,與第19天加入5mmol/L二甲雙胍進行干預(yù)48h,并設(shè)立對照組。油紅染色觀察兩組成脂率,q RT-PCR檢測成脂基因PPARγ、C/EBPα、FABP4m RNA表達水平差異;在Ara-c作用下,建立白血病細胞系(THP-1)與脂肪細胞的直接共培養(yǎng)模型,通過細胞計數(shù)比較兩組對白血病細胞系化療保護的差異,流式細胞術(shù)檢測THP-1凋亡變化。(5)收集二甲雙胍調(diào)節(jié)的脂肪細胞上清(met-CM)與未加入二甲雙胍脂肪細胞上清(control-CM),上清液與腫瘤細胞常規(guī)培養(yǎng)基按不同比例稀釋后重懸白血病細胞,同時加入化療藥物Ara-c,48h后研究各比例狀態(tài)下THP-1的存活數(shù);比較二甲雙胍處理與未處理的脂肪細胞對白血病細胞化療敏感性的影響。(6)Western Blot及q RT-PCR法檢測二甲雙胍處理前后組脂肪細胞Leptin因子蛋白及m RNA表達水平,明確Leptin在二甲雙胍調(diào)控白血病脂肪細胞化療保護中的作用。結(jié)果:(1)AML初發(fā)患者骨髓脂肪細胞較正常者含量少、體積小(P0.0001);難治組AML患者骨髓脂肪含量比非難治組減少(P0.05)。此外,骨髓脂肪含量與患者年齡正相關(guān),與骨髓原始細胞量、性別、BMI均無相關(guān)性;(2)在Ara-c的作用下,AML骨髓MSC體外誘導(dǎo)分化的脂肪細胞與THP-1共培養(yǎng),與正常組相比,THP-1細胞對化療藥敏感性明顯降低,細胞存活數(shù)顯著升高(P0.001);(3)蛋白芯片技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)AML骨髓上清高分泌脂肪因子Leptin、Resistin和Growth Hormone。而Leptin在初發(fā)AML患者骨髓MSC衍生脂肪細胞中表達明顯增高(P0.001);(4)與對照組相比較,AML骨髓MSC衍生脂肪細胞經(jīng)二甲雙胍處理后,成脂率、成脂基因表達水平無明顯改變(P0.05);但與THP-1直接或間接共培養(yǎng),均可降低THP-1化療的抵抗性,促進THP-1細胞凋亡(P0.05);(5)二甲雙胍可以降低脂肪細胞Leptin蛋白及m RNA表達水平(P0.01)。結(jié)論:1.AML患者骨髓脂肪細胞含量少,體積小,參與AML化療抵抗,與其難治性密切相關(guān);異常高分泌的脂肪因子Leptin可能是調(diào)控骨髓脂肪細胞保護白血病免受化療損傷的機制。提示骨髓脂肪細胞可作為初發(fā)AML患者預(yù)后不良的一個重要因素,深入研究其作用機制可指導(dǎo)臨床早期干預(yù)治療。2.二甲雙胍可降低AML骨髓脂肪細胞對腫瘤細胞抵抗化療的保護作用。其可能機制一方面在于降低脂肪上清中脂肪因子Leptin的分泌;另一方面在于降低了脂肪細胞對腫瘤細胞的抗凋亡作用。
【關(guān)鍵詞】：急性髓系白血病 脂肪細胞 二甲雙胍 化療保護
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 第一部分 骨髓脂肪細胞與AML難治的相關(guān)性分析及其可能機制15-49
• 引言15-16
• 材料和方法16-34
• 結(jié)果34-46
• 討論46-49
• 第二部分 二甲雙胍抑制AML骨髓脂肪細胞對白血病細胞化療保護的作用及機制研究49-72
• 引言49-50
• 材料與方法50-63
• 結(jié)果63-69
• 討論69-72
• 全文結(jié)論72-73
• 參考文獻73-78
• 致謝78-81
• 學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄81

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