本文關鍵詞：AFP單抗修飾的載DCN PLGA納米粒對HepG2細胞遷移和侵襲影響的實驗研究

  更多相關文章： AFPmAb-PLGA-rhDCN納米粒 遷移 侵襲 AFP RhoC

【摘要】：目的:探討AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒對肝癌細胞株Hep G2細胞遷移和侵襲能力的影響及其相關分子機制。方法:將培養(yǎng)的Hep G2細胞隨機分為A、B、C、D、E五個組,其中A組為未予任何處理的Hep G2細胞對照組(未處理組),B組為用含空質粒的PLGA納米粒處理的對照組(空白組),C、D和E組分別為用5μg/ml(低濃度)、10μg/ml(中濃度)和15μg/ml(高濃度)AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒處理的實驗組。1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒對Hep G2細胞遷移和侵襲的影響1.1采用細胞劃痕實驗檢測不同濃度AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒處理Hep G2細胞后對其遷移能力的效應作用。1.2采用Transwell小室實驗檢測不同濃度AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒處理Hep G2細胞后對其侵襲能力的效應作用。2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒抑制Hep G2細胞遷移和侵襲分子機制的初步研究2.1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒處理Hep G2細胞24h后,利用RT-PCR方法檢測AFP和Rho C分子m RNA轉錄情況。2.2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒處理Hep G2細胞24h后,利用ELISA法檢測AFP和Rho C蛋白水平表達情況,用Western Blot法檢測Rho C蛋白水平表達情況。結果:1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒對Hep G2細胞遷移和侵襲的影響1.1劃痕實驗結果表明,未處理組與空白組細胞在劃痕24h后,劃痕寬度分別為308.62±5.89μm和298.28±5.74μm,兩者之間差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組細胞經(jīng)不同濃度AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒作用后的劃痕寬度值明顯高于對照組(實驗組納米粒濃度由低到高其劃痕寬度值分別為383.47±6.87μm、401.01±4.25μm、415.29±11.93μm),差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.001)。提示AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒對Hep G2細胞遷移能力有抑制作用。1.2 Transwell小室實驗結果表明,未處理組與空白組細胞在Transwell小室中穿透膜的細胞數(shù)分別為70.67±1.16/視野和66.67±2.08/視野,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。而實驗組與未處理組和空白組相比,穿透膜的細胞數(shù)(納米粒濃度由低到高穿透膜的細胞數(shù)分別為62.00±3.61/視野、59.33±1.53/視野和53.33±2.08/視野),經(jīng)統(tǒng)計學處理,差異有高度顯著性(P0.001)。表明AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒對Hep G2細胞侵襲能力有抑制作用。2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒抑制Hep G2細胞遷移和侵襲分子機制的初步研究2.1 AFP和Rho C分子m RNA轉錄水平2.1.1 AFP分子m RNA轉錄水平經(jīng)灰度分析結果顯示,未處理組和空白組Hep G2細胞AFP m RNA灰度值分別為1.00±0.03和1.05±0.08,二者比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組(納米粒濃度由低到高)細胞AFP m RNA灰度值低于對照組(分別為0.93±0.07、0.68±0.04和0.57±0.03),低濃度組與對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),中、高濃度組與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.1.2 Rho C分子m RNA轉錄水平經(jīng)灰度分析結果顯示,未處理組和空白組細胞Rho C m RNA灰度值分別為1.02±0.04、1.03±0.07,二者比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組(納米粒濃度由低到高)細胞Rho C m RNA灰度值明顯低于對照組(分別為0.42±0.04、0.38±0.02和0.38±0.02),差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.001)。2.2 AFP和Rho C的蛋白表達2.2.1 ELISA檢測AFP結果顯示,未處理組與空白組細胞AFP的蛋白濃度分別為2.40±0.25、2.51±0.31,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組(納米粒濃度由低到高)細胞AFP蛋白濃度值低于對照組(分別為2.01±0.21 ng/ml、1.01±0.11 ng/ml、0.49±0.07ng/ml),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2.2 ELISA檢測Rho C結果顯示,未處理組與空白組細胞Rho C的蛋白濃度分別為98.76±3.04pg/ml、100.75±4.19pg/ml,二者差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組(納米粒濃度由低到高)細胞Rho C蛋白濃度值顯著低于對照組(分別為86.63±2.60pg/ml、47.37±2.51 pg/ml、39.78±2.47 pg/ml),差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.001)。2.2.3 Western Blot檢測Rho C結果顯示,未處理組與空白組細胞Rho C灰度值分別為1.02±0.05、1.02±0.03,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組(納米粒濃度由低到高)細胞Rho C灰度值低于對照組(分別為0.85±0.01、0.70±0.02、0.62±0.02),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒對Hep G2細胞的遷移和侵襲能力有抑制作用。該AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒可下調AFP和Rho C分子的表達。
【關鍵詞】：AFPmAb-PLGA-rhDCN納米粒 遷移 侵襲 AFP RhoC
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-13
• 前言13-15
• 第一部分 AFPmAb-PLGA-rhDCN納米粒對HepG2 細胞遷移和侵襲力的影響15-21
• 1 材料與方法15-18
• 1.1 細胞、納米粒15
• 1.2 主要實驗試劑15-16
• 1.3 主要儀器與設備16
• 1.4 細胞培養(yǎng)16
• 1.5 實驗分組16
• 1.6 細胞劃痕實驗16
• 1.7 bTranswell小室侵襲實驗16-17
• 1.8 統(tǒng)計學方法17-18
• 2 結果18-21
• 2.1 bAFPmAb-PLGA-rhDCN納米粒對HepG2 細胞遷移能力的影響18-19
• 2.2 bAFPmAb-PLGA-rhDCN納米粒對HepG2 細胞侵襲能力的影響19-21
• 第二部分 AFPmAb-PLGA-rh DCN納米粒抑制HepG2 細胞遷移和侵襲分子機制的初步研究21-37
• 1 材料與方法21-32
• 1.1 細胞、納米粒21
• 1.2 主要實驗試劑21-24
• 1.3 主要儀器與設備24
• 1.4 細胞培養(yǎng)24-25
• 1.5 實驗分組25
• 1.6 AFP與RhoC mRNA轉錄水平的測定25-29
• 1.7 AFP與RhoC蛋白表達水平的測定29
• 1.8 RhoC蛋白表達水平的westernblot分析29-31
• 1.9 統(tǒng)計學方法31-32
• 2 結果32-37
• 2.1 各實驗組的mRNA轉錄水平32-33
• 2.2 AFP和RhoC的蛋白表達33-37
• 討論37-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-43
• 綜述43-48
• 參考文獻46-48
• 致謝48-49
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

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本文編號：527998