本文關(guān)鍵詞：雌激素受體β亞型在乳腺癌內(nèi)分泌治療耐藥中的作用

  更多相關(guān)文章： ERβ TAM IFN-γ 耐藥基因 Akt ERK

【摘要】：目的:探討在乳腺癌中,雌激素受體α亞型(Estrogen Receptorα,ERα)和β亞型(Estrogen Receptorβ,ERβ)的表達(dá),以及與內(nèi)分泌治療耐藥的關(guān)系和機(jī)制。方法:1、以人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231作為研究對(duì)象,采用半定量RT-PCR法和Western Blot法檢測(cè)這兩種細(xì)胞株ERα和ERβ的表達(dá);在培養(yǎng)24h、48h、72h、96h后,采用MTT法檢測(cè)各自的增殖情況。2、以人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和ERα/ERβ不同表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7[M/siα(ERαlow/ERβhigh)、M/siβ(ERαhigh/ERβlow)、M/HK(陰性對(duì)照)]作為研究對(duì)象,單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用不同終濃度的TAM(0.1、0.5、1、5、10μmol/L)和人重組IFN-γ(rh IFN-γ)(0.5,100 ng/m L)處理細(xì)胞,MTT法分析藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響;半定量RT-PCR法和Western Blot法檢測(cè)rh IFN-γ(0.5 ng/m L)對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中ERβ表達(dá)的影響。3、以MCF-7、M/siα、M/siβ、M/HK作為研究對(duì)象,半定量RT-PCR法檢測(cè)其耐藥基因MDR1、TOPOII、LRP和GST-π的m RNA表達(dá)水平;Western Blot法檢測(cè)其耐藥相關(guān)信號(hào)通路MAPK、PI3K/Akt中p-ERK、p-Akt的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1、半定量RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示,MCF-7細(xì)胞中ERα的m RNA表達(dá)水平顯著高于MDA-MB-231[(0.191±0.005)vs(0.153±0.003),P0.05],ERβ的m RNA表達(dá)水平低于MDA-MB-231[(0.462±0.001)vs(0.587±0.004),P0.05];Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,MCF-7細(xì)胞中ERα的蛋白水平明顯高于MDA-MB-231[(0.796±0.002)vs(0.041±0.008),P0.05],ERβ的蛋白水平略低于MDA-MB-231[(0.57±0.011)vs(0.98±0.009),P0.05];MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,經(jīng)過(guò)24h、48h、72h培養(yǎng),MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖水平無(wú)顯著性差異[(1.121±0.002)vs(1.201±0.062),(1.232±0.012)vs(1.287±0.054),(1.376±0.028)vs(1.401±0.033),P0.05],經(jīng)過(guò)96h培養(yǎng),MCF-7細(xì)胞的增殖率明顯高于MDA-MB-231[(2.215±0.07)vs(1.469±0.011),P0.05]。2、MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,用不同濃度的TAM處理細(xì)胞24h,與對(duì)照組MCF細(xì)胞相比,ERβ高表達(dá)可促進(jìn)高濃度TAM(1、5、10μmol/L)對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用[(45.788±1.641)%vs(24.288±1.170)%,(57.899±1.583)%vs(31.499±1.978)%,(59.853±1.648)%vs(38.039±1.482)%,均P0.05)],并且該抑制作用與TAM濃度呈劑量依賴(lài)關(guān)系;用rh IFN-γ(0.5,100ng/m L)預(yù)先處理72h,然后用10μmol/L TAM再處理24h,與對(duì)照組TAM組相比,rh IFN-γ(0.5,100 ng/m L)增加TAM對(duì)MCF-7、M/siα、M/siβ細(xì)胞增殖的抑制作用[(29.901±1.775)%,(40.209±1.083)%vs(25.066±1.122)%;(49.088±1.504)%,(52.254±2.223)%vs(46.088±1.288)%;(34.443±2.002)%,(50.125±1.554)%vs(20.977±1.724)%,P0.05],并且該抑制作用與rh IFN-γ濃度呈劑量依賴(lài)關(guān)系;半定量RT-PCR和Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,rh IFN-γ(0.5 ng/m L)明顯增加MCF-7細(xì)胞中ERβm RNA的表達(dá)(0.248±0.0002 vs 0.184±0.0006,P0.05)和蛋白的表達(dá)(0.521±0.003 vs 0.356±0.019,P0.05)。3、半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,ERβ高表達(dá)可顯著抑制MCF-7細(xì)胞耐藥基因MDR1、TOPOII、LRP的m RNA表達(dá)水平(0.431±0.032 vs 0.932±0.083,0.234±0.008 vs 0.391±0.002,0.47±0.028 vs 0.586±0.036;均P0.05);Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示,ERβ高表達(dá)可顯著下調(diào)其Akt和ERK蛋白的磷酸化水平(0.224±0.006 vs 0.437±0.007,0.367±0.015 vs 0.756±0.039;均P0.05)。結(jié)論:1、人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231在培養(yǎng)96h以后,MCF-7的增殖水平要明顯高于MDA-MB-231,這可能與乳腺癌細(xì)胞中不同ER亞型的表達(dá)有關(guān),即ERα高表達(dá)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖,ERβ高表達(dá)抑制細(xì)胞的增殖。2、ERβ可增加TAM對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用;rh IFN-γ增加乳腺癌細(xì)胞內(nèi)ERβ的表達(dá),并促進(jìn)TAM對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖抑制作用。3、ERβ的表達(dá)水平可影響乳腺癌細(xì)胞MCF-7對(duì)TAM的耐藥性,這可能與降低乳腺癌細(xì)胞中相關(guān)耐藥基因(MDR1、TOPOII、LRP)的表達(dá),以及抑制MAPK與PI3K/Akt信號(hào)通路活化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：ERβ TAM IFN-γ 耐藥基因 Akt ERK
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語(yǔ)12-14
• 前言14-19
• 研究現(xiàn)狀、成果14-18
• 研究目的、方法18-19
• 一、雌激素受體亞型對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響19-34
• 1.1 對(duì)象和方法19-29
• 1.1.1 細(xì)胞19
• 1.1.2 主要試劑19
• 1.1.3 主要儀器和設(shè)備19-20
• 1.1.4 試劑的配制20-24
• 1.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)24-25
• 1.1.6 半定量RT-PCR法檢測(cè)MCF-7 和MDA-MB-231細(xì)胞中ERα 和ERβ的表達(dá)25-26
• 1.1.7 Western blot法檢測(cè)MCF-7 和MDA-MB-231細(xì)胞中ERα 和ERβ的表達(dá)蛋白的表達(dá)26-29
• 1.1.8 MTT法檢測(cè)MCF-7 和MDA-MB-231細(xì)胞增殖狀況29
• 1.1.9.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29
• 1.2 結(jié)果29-31
• 1.2.1 MCF-7 和MDA-MB-231細(xì)胞中ERα 和ERβ mRNA水平的表達(dá)29-30
• 1.2.2 MCF-7 和MDA-MB-231細(xì)胞中ERα 和ERβ 蛋白的表達(dá)30
• 1.2.3 ERα 和ERβ 影響MCF-7 和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖30-31
• 1.3 討論31-32
• 1.4 小結(jié)32-34
• 二、TAM單獨(dú)或聯(lián)合人重組IFN-γ 對(duì)表達(dá)不同ER亞型的乳腺癌細(xì)胞增殖影響34-43
• 2.1 對(duì)象和方法34-36
• 2.1.1 細(xì)胞34
• 2.1.2 主要試劑34
• 2.1.3 主要儀器和設(shè)備34
• 2.1.4 主要試劑的配制34
• 2.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)34
• 2.1.6 MTT法檢測(cè)各乳腺癌細(xì)胞株對(duì)TAM的敏感性34-35
• 2.1.7 MTT法檢測(cè)rhIFN-γ 對(duì)乳腺癌細(xì)胞株TAM耐藥的影響35
• 2.1.8 半定量RT-PCR法檢測(cè)人重組IFN-γ 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7 ERβ 表達(dá)的影響35-36
• 2.1.9 Western Blot法檢測(cè)人重組IFN-γ 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7 ERβ 表達(dá)的影響36
• 2.1.10.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法36
• 2.2 結(jié)果36-40
• 2.2.1 MTT法檢測(cè)ERβ 不同表達(dá)的各乳腺癌細(xì)胞株對(duì)TAM的敏感性36-37
• 2.2.2 rhIFN-γ 對(duì)ERβ 不同表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7 TAM的耐藥性的影響37-39
• 2.2.3 rhIFN-γ 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7 ERβ mRNA水平表達(dá)的影響39-40
• 2.2.4 rhIFN-γ 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7 ERβ 蛋白水平表達(dá)的影響40
• 2.3 討論40-42
• 2.4 小結(jié)42-43
• 三、ERβ通過(guò)介導(dǎo)耐藥基因的表達(dá)及信號(hào)通路PI3K/Akt和MAPK來(lái)調(diào)控TAM對(duì)乳腺癌細(xì)胞影響43-50
• 3.1 對(duì)象和方法43-44
• 3.1.1 細(xì)胞43
• 3.1.2 主要試劑43
• 3.1.3 主要儀器和設(shè)備43
• 3.1.4 主要試劑的配制43
• 3.1.5 半定量RT-PCR法檢測(cè)耐藥相關(guān)基因MDR1、TOPOII、LRP和GST-π的mRNA表達(dá)水平43-44
• 3.1.6 Western Blot法檢測(cè)耐藥相關(guān)信號(hào)通路MAPK、PI3K/Akt的p-ERK、p-Akt蛋白表達(dá)水平44
• 3.1.7.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法44
• 3.2 結(jié)果44-47
• 3.2.1 ER亞型對(duì)乳腺癌MCF-7 細(xì)胞耐藥相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的影響44-45
• 3.2.2 ER 亞型對(duì)乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞 p-Akt 的蛋白表達(dá)水平的影響45-46
• 3.2.3 ER亞型對(duì)乳腺癌MCF-7 細(xì)胞p-ERK的蛋白表達(dá)水平的影響46-47
• 3.3 討論47-49
• 3.4 小結(jié)49-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明56-57
• 在學(xué)期間發(fā)表論文情況56-57
• 綜述 雌激素受體β對(duì)乳腺癌耐藥機(jī)制的影響57-69
• 綜述參考文獻(xiàn)63-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2011版)[J];中國(guó)癌癥雜志;2011年05期

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本文編號(hào)：527199