本文關(guān)鍵詞：Mcl-1參與NSCLC細(xì)胞對EGFR和ALK抑制劑敏感性調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：Mcl-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是Bcl-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)抗凋亡蛋白家族成員,參與調(diào)控細(xì)胞的凋亡與存活。Mcl-1在許多正常組織中廣泛表達(dá),對維持多種細(xì)胞的成熟與分化具有重要的意義。Mcl-1表達(dá)的上調(diào)提示了腫瘤的發(fā)生,而在多種人類癌組織中,Mcl-1確實(shí)存在過表達(dá)現(xiàn)象。此外,Mcl-1的過表達(dá)還可以誘導(dǎo)細(xì)胞對一些治療藥物產(chǎn)生耐受作用。由此可見,作為癌癥靶向新型位點(diǎn),Mcl-1在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等抗腫瘤方面可能發(fā)揮重要的作用。本實(shí)驗(yàn)以含EGFR突變的PC-9細(xì)胞系以及含EML4-ALK基因融合的H3122細(xì)胞系為研究對象,觀察Mcl-1調(diào)控NSCLC細(xì)胞對EGFR和ALK抑制劑敏感性的作用及相關(guān)機(jī)制。第一部分:通過Western blot方法,檢測EGFR抑制劑和ALK抑制劑誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞凋亡信號通路以及凋亡過程中起關(guān)鍵作用的調(diào)控分子。結(jié)果顯示:EGFR和ALK抑制劑通過調(diào)控Bcl-2家族蛋白的表達(dá),活化Caspase-3信號途徑,進(jìn)而誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞凋亡,Mcl-1則作為參與此凋亡信號通路的一個關(guān)鍵分子。第二部分:觀察Mcl-1調(diào)控NSCLC細(xì)胞對EGFR和ALK抑制劑敏感性的作用。實(shí)時定量PCR、Western blot以及免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)等檢測Mcl-1的表達(dá),結(jié)果顯示EGFR和ALK抑制劑并非在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)Mcl-1,而是在蛋白降解水平下調(diào)Mcl-1。通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測到臨床上還有一些EGFR野生型病人對Gefitinib敏感,而對這些Gefitinib敏感型細(xì)胞給予Gefitinib處理后Mcl-1表達(dá)下調(diào)。Western blot檢測對Gefitinib敏感細(xì)胞及耐藥細(xì)胞給予Gefitinib處理后中Mcl-1的表達(dá)及細(xì)胞的凋亡情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增大,敏感細(xì)胞株凋亡片段增多,Mcl-1表達(dá)減少;而耐藥細(xì)胞株未出現(xiàn)明顯的凋亡片段,Mcl-1的表達(dá)無明顯減少。特異性敲除耐藥細(xì)胞中Mcl-1基因,流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞,結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡明顯增多。第三部分:探討Mcl-1調(diào)控EGFR突變細(xì)胞對EGFR抑制劑敏感性的相關(guān)機(jī)制。Western blot檢測分別給予Gefitinib、Akt抑制劑以及Erk抑制劑處理后,PC-9細(xì)胞內(nèi)Mcl-1的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):EGFR抑制劑通過下調(diào)p Akt來抑制pGSK3β的表達(dá),使Mcl-1磷酸化水平增加,進(jìn)而被泛素修飾,并經(jīng)泛素化途徑降解。通過免疫共沉淀以及Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:FBW7是介導(dǎo)Mcl-1泛素化修飾的泛素連接酶,下調(diào)FBW7的表達(dá)可以抑制Mcl-1蛋白的降解。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 Mcl-1 凋亡 吉非替尼
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 文獻(xiàn)回顧11-20
• 第一部分 EGFR和ALK抑制劑誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究20-35
• 1 材料20-24
• 2 方法24-27
• 3 結(jié)果27-32
• 4 討論32-35
• 第二部分 MCL-1 參與EGFR和ALK抑制劑敏感性調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究35-54
• 1 材料35-39
• 2 方法39-43
• 3 結(jié)果43-51
• 4 討論51-54
• 第三部分 MCL-1 調(diào)控EGFR突變細(xì)胞對EGFR抑制劑敏感性的分子機(jī)制研究54-63
• 1 材料54-56
• 2 方法56-58
• 3 結(jié)果58-61
• 4 討論61-63
• 小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-74
• 個人簡歷和研究成果74-75
• 致謝75

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本文編號：526419