本文關(guān)鍵詞：腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1（MTA1）在食管癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的促進作用 干細胞培養(yǎng)基成球培養(yǎng)法篩選宮頸癌干細胞的生物學(xué)特性鑒定

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【摘要】：目的探討MTA1基因?qū)κ彻馨┘毎掀らg質(zhì)化(EMT)過程的影響及分子機制。方法采用慢病毒感染方法建立MTA1敲降的食管癌細胞系LV3-shMTA1-KYSE410及MTA1過表達食管癌細胞系LV5-MTA1-KYSE450;通過Western Blot方法檢測上述食管癌細胞系中MTA1蛋白及EMT相關(guān)蛋白的表達水平；進而采用免疫熒光實驗檢測上述食管癌細胞系中EMT相關(guān)蛋白分子標志物E-cadherin和Vimentin的定位以及表達水平的變化；應(yīng)用劃痕實驗明確MTA1表達水平改變后對食管癌細胞遷移能力的影響；在LV3-shMTA1-KYSE410細胞中過表達SOX2觀察對敲降MTA1的KYSE410細胞EMT的影響；采用免疫組織化學(xué)方法檢測食管癌組織中MTA1和SOX2的表達情況,分別統(tǒng)計分析二者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性,并探討MTA1和SOX2分子表達的相關(guān)性。結(jié)果食管癌KYSE450細胞系過表達MTA1后,EMT相關(guān)蛋白標志物中的E-cadherin表達水平降低而Vimentin表達水平升高,遷移能力增強；食管癌KYSE410細胞系敲降MTA1后,E-cadherin表達水平升高而Vimentin表達水平降低,遷移能力降低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)=LV3-shMTA1-KYSE410細胞過表達SOX2后能夠恢復(fù)由于MTA1的敲降所引起的E-cadherin表達水平的升高、Vimentin表達水平的降低以及遷移能力的減弱。通過免疫組化結(jié)果分析得出,MTAl和SOX2在腫瘤組織中的表達強度均高于正常組織(p0.05)。MTA1和SOX2的表達強度均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(p0.05)。MTA1陽性、SOX2陽性及二者共同陽性表達的患者的生存時間均短于陰性表達的患者(p0.05)。SOX2的表達與MTA1存在相關(guān)性(p0.05)。結(jié)論敲降MTAl可抑制食管癌細胞的間質(zhì)化、降低食管癌細胞的遷移能力,這可能與SOX2表達的降低有關(guān)。MTA1和SOX2在食管癌中的過表達提示食管癌預(yù)后的不良。目的 識別和描述CaSki細胞中的腫瘤干細胞群特征。方法 使用干細胞培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法篩選和培養(yǎng)腫瘤干細胞樣細胞球。利用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)腫瘤干細胞球,觀察其分化情況。鑒定已知的干性標志性分子標志物：OCT4、SOX2。應(yīng)用Target Region Amplified Polymorphism-Polymerase Chain Reaction (TRAP-PCR)實驗檢測宮頸癌干細胞的端粒酶活性。通過Western Blot實驗檢測多藥轉(zhuǎn)運蛋白ABCG2的表達以及藥物殺傷實驗驗證宮頸癌干細胞的耐藥性。通過Transwell實驗檢測宮頸癌干細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果干細胞培養(yǎng)基懸浮細胞培養(yǎng)法能夠成功富集到腫瘤干細胞球,這些腫瘤細胞球可被認為是宮頸癌癌細胞中的腫瘤干細胞。通過檢測腫瘤干細胞球與貼壁的干性標志分子物的表達發(fā)現(xiàn),宮頸癌干細胞球高表達干性標志性分子標志物OCT4和SOX2。通過檢測宮頸癌干細胞球與貼壁細胞的端粒酶活性發(fā)現(xiàn),宮頸癌干細胞球的端粒酶活性高于貼壁細胞的端粒酶活性。通過檢測宮頸癌干細胞球和貼壁細胞的ABCG2的表達發(fā)現(xiàn),宮頸癌干細胞球高表達多藥轉(zhuǎn)運蛋白ABCG2。通過藥物殺傷實驗證實宮頸癌干細胞球相對于貼壁細胞具有更強的耐藥性。通過Transwell實驗證實宮頸癌干細胞球比貼壁細胞具有更強的侵襲轉(zhuǎn)移能力。結(jié)論懸浮細胞球培養(yǎng)法富集的腫瘤干細胞具有更強的增殖、侵襲和耐藥性。
【關(guān)鍵詞】：MTA1 SOX2 食管癌 EMT 腫瘤干細胞 宮頸癌 腫瘤轉(zhuǎn)移 細胞凋亡 腫瘤耐藥
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照7-8
• 第一部分8-59
• 中文摘要9-10
• 英文摘要10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-30
• 結(jié)果30-51
• 討論51-55
• 小結(jié)55-56
• 參考文獻56-59
• 第二部分59-79
• 中文摘要60-61
• 英文摘要61-62
• 前言62-63
• 材料與方法63-69
• 結(jié)果69-74
• 討論74-76
• 小結(jié)76-77
• 參考文獻77-79
• 基金資助79-80
• 已發(fā)表文章80-81
• 文獻綜述81-89
• 參考文獻85-89
• 致謝89-90

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：526390