本文關(guān)鍵詞：腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1（MTA1）在食管癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的促進(jìn)作用 干細(xì)胞培養(yǎng)基成球培養(yǎng)法篩選宮頸癌干細(xì)胞的生物學(xué)特性鑒定

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【摘要】：目的探討MTA1基因?qū)κ彻馨┘?xì)胞上皮間質(zhì)化(EMT)過(guò)程的影響及分子機(jī)制。方法采用慢病毒感染方法建立MTA1敲降的食管癌細(xì)胞系LV3-shMTA1-KYSE410及MTA1過(guò)表達(dá)食管癌細(xì)胞系LV5-MTA1-KYSE450;通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)上述食管癌細(xì)胞系中MTA1蛋白及EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)水平；進(jìn)而采用免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上述食管癌細(xì)胞系中EMT相關(guān)蛋白分子標(biāo)志物E-cadherin和Vimentin的定位以及表達(dá)水平的變化；應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)明確MTA1表達(dá)水平改變后對(duì)食管癌細(xì)胞遷移能力的影響；在LV3-shMTA1-KYSE410細(xì)胞中過(guò)表達(dá)SOX2觀察對(duì)敲降MTA1的KYSE410細(xì)胞EMT的影響；采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)食管癌組織中MTA1和SOX2的表達(dá)情況,分別統(tǒng)計(jì)分析二者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性,并探討MTA1和SOX2分子表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果食管癌KYSE450細(xì)胞系過(guò)表達(dá)MTA1后,EMT相關(guān)蛋白標(biāo)志物中的E-cadherin表達(dá)水平降低而Vimentin表達(dá)水平升高,遷移能力增強(qiáng)；食管癌KYSE410細(xì)胞系敲降MTA1后,E-cadherin表達(dá)水平升高而Vimentin表達(dá)水平降低,遷移能力降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)=LV3-shMTA1-KYSE410細(xì)胞過(guò)表達(dá)SOX2后能夠恢復(fù)由于MTA1的敲降所引起的E-cadherin表達(dá)水平的升高、Vimentin表達(dá)水平的降低以及遷移能力的減弱。通過(guò)免疫組化結(jié)果分析得出,MTAl和SOX2在腫瘤組織中的表達(dá)強(qiáng)度均高于正常組織(p0.05)。MTA1和SOX2的表達(dá)強(qiáng)度均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(p0.05)。MTA1陽(yáng)性、SOX2陽(yáng)性及二者共同陽(yáng)性表達(dá)的患者的生存時(shí)間均短于陰性表達(dá)的患者(p0.05)。SOX2的表達(dá)與MTA1存在相關(guān)性(p0.05)。結(jié)論敲降MTAl可抑制食管癌細(xì)胞的間質(zhì)化、降低食管癌細(xì)胞的遷移能力,這可能與SOX2表達(dá)的降低有關(guān)。MTA1和SOX2在食管癌中的過(guò)表達(dá)提示食管癌預(yù)后的不良。目的 識(shí)別和描述CaSki細(xì)胞中的腫瘤干細(xì)胞群特征。方法 使用干細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法篩選和培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞球。利用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞球,觀察其分化情況。鑒定已知的干性標(biāo)志性分子標(biāo)志物：OCT4、SOX2。應(yīng)用Target Region Amplified Polymorphism-Polymerase Chain Reaction (TRAP-PCR)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)宮頸癌干細(xì)胞的端粒酶活性。通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)多藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2的表達(dá)以及藥物殺傷實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證宮頸癌干細(xì)胞的耐藥性。通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)宮頸癌干細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果干細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法能夠成功富集到腫瘤干細(xì)胞球,這些腫瘤細(xì)胞球可被認(rèn)為是宮頸癌癌細(xì)胞中的腫瘤干細(xì)胞。通過(guò)檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞球與貼壁的干性標(biāo)志分子物的表達(dá)發(fā)現(xiàn),宮頸癌干細(xì)胞球高表達(dá)干性標(biāo)志性分子標(biāo)志物OCT4和SOX2。通過(guò)檢測(cè)宮頸癌干細(xì)胞球與貼壁細(xì)胞的端粒酶活性發(fā)現(xiàn),宮頸癌干細(xì)胞球的端粒酶活性高于貼壁細(xì)胞的端粒酶活性。通過(guò)檢測(cè)宮頸癌干細(xì)胞球和貼壁細(xì)胞的ABCG2的表達(dá)發(fā)現(xiàn),宮頸癌干細(xì)胞球高表達(dá)多藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2。通過(guò)藥物殺傷實(shí)驗(yàn)證實(shí)宮頸癌干細(xì)胞球相對(duì)于貼壁細(xì)胞具有更強(qiáng)的耐藥性。通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)宮頸癌干細(xì)胞球比貼壁細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。結(jié)論懸浮細(xì)胞球培養(yǎng)法富集的腫瘤干細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、侵襲和耐藥性。
【關(guān)鍵詞】：MTA1 SOX2 食管癌 EMT 腫瘤干細(xì)胞 宮頸癌 腫瘤轉(zhuǎn)移 細(xì)胞凋亡 腫瘤耐藥
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照7-8
• 第一部分8-59
• 中文摘要9-10
• 英文摘要10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-30
• 結(jié)果30-51
• 討論51-55
• 小結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 第二部分59-79
• 中文摘要60-61
• 英文摘要61-62
• 前言62-63
• 材料與方法63-69
• 結(jié)果69-74
• 討論74-76
• 小結(jié)76-77
• 參考文獻(xiàn)77-79
• 基金資助79-80
• 已發(fā)表文章80-81
• 文獻(xiàn)綜述81-89
• 參考文獻(xiàn)85-89
• 致謝89-90

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈忠英,沈健,陳銘華,蔡維佳,陳彩云;氧化砷誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡的研究(英文)[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

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3 謝仰民;謝劍君;周飛;侯健;曹君君;許麗艷;李恩民;;激活轉(zhuǎn)錄因子3的過(guò)表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用[J];癌變.畸變.突變;2009年04期

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本文編號(hào)：526390