本文關鍵詞：人肝癌組織中肝癌干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定

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【摘要】：目的體外分離及培養(yǎng)人肝癌組織中的肝癌干細胞并鑒定其生物學特性。方法收集臨床肝癌患者術后肝癌組織,用酶消化法分離肝癌細胞,將其接種于無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),并在超低粘附24孔板中觀察肝癌干細胞克隆球生長情況;用MTT比色法檢測肝癌干細胞增值能力;用肝癌干細胞表面標記物CD90、CD133抗體,采用流式細胞儀鑒定并分選CD90+細胞、CD90-細胞,CD133+細胞、CD133-細胞,將4種不同細胞組成CD90+細胞CD133+細胞、CD90-細胞CD133+細胞、CD133-細胞CD90+細胞及CD133-細胞CD90-細胞,分別接種于裸鼠皮下觀察其成瘤能力并記錄腫瘤體積;將裸鼠成瘤后的組織進行HE染色。結果在無血清培養(yǎng)基中,肝癌干細胞可以形成少量的細胞克隆球;MTT比色法檢測,在連續(xù)72小時里,肝癌干細胞克隆球始終處于持續(xù)增值狀態(tài);采用流式細胞儀檢測顯示肝癌干細胞表面標記物CD90、CD133陽性率分別是7.2%、8.8%,并成功分選出CD90+細胞、CD90-細胞、CD133+細胞、CD133-細胞,將組成的4種不同細胞組分別接種于裸鼠皮下,結果顯示,CD90+細胞CD133+細胞、CD90-細胞CD133+細胞及CD133-細胞CD90+細胞在裸鼠體內(nèi)均形成腫瘤,且CD90+細胞CD133+細胞組在最短時間內(nèi)出現(xiàn)了較高的致瘤能力。而CD133-細胞CD90-細胞在整個過程中未見腫瘤形成。將裸鼠體內(nèi)的腫瘤經(jīng)HE染色,其結果與人肝癌組織病理特點相似。結論成功建立了從人肝癌組織中分離培養(yǎng)肝癌干細胞的方法;培養(yǎng)得到的肝癌干細胞能在無血清培養(yǎng)基中形成克隆球,且具有較強的增值能力;部分細胞表達CD90+細胞和CD133+細胞,且在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤;肝癌組織中CD90+細胞和CD133+細胞具有肝癌干細胞特性,可能為肝癌干細胞。
【關鍵詞】：肝癌組織 腫瘤干細胞 CD133 CD90 裸鼠成瘤
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• 英文摘要5-7
• 符號說明7-9
• 前言9-13
• 第一部分人肝癌組織中肝癌干細胞分離培養(yǎng)與分選13-27
• 1 實驗材料13-15
• 2 實驗方法及步驟15-19
• 3 實驗結果19-22
• 4 討論22-27
• 第二部分裸鼠皮下人肝癌干細胞成瘤模型27-35
• 1 實驗材料27
• 2 實驗方法及步驟27-29
• 3 實驗結果29-31
• 4 討論31-35
• 結論35-36
• 參考文獻36-41
• 綜述41-55
• 綜述參考文獻51-55
• 致謝55-56
• 個人簡介56

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本文編號：526019