發(fā)布時(shí)間：2017-07-06 00:02

  本文關(guān)鍵詞：啟動(dòng)子區(qū)甲基化對(duì)肝癌細(xì)胞miRNA-214表達(dá)及細(xì)胞增殖活性的影響

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【摘要】：研究目的：研究肝癌細(xì)胞株miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)。在不同濃度下,甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對(duì)其啟動(dòng)子區(qū)甲基化及miRNA-214的影響,進(jìn)一步分析該RNA甲基化抑制對(duì)肝癌細(xì)胞系增殖的影響。研究方法：運(yùn)用生物信息學(xué)在線軟件預(yù)測(cè)miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)域及CpG位點(diǎn)；提取L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701四種肝細(xì)胞株DNA,通過(guò)亞硫酸氫鹽測(cè)序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)分析該mi-RNA CpG位點(diǎn)的甲基化;使用0umol/L,5umol/L和10umol/L三種不同濃度的甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-CdR)干擾肝細(xì)胞株啟動(dòng)子區(qū)甲基化,并通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)不同濃度處理組的miRNA-214表達(dá)；通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)以上三種濃度下抑制劑對(duì)肝細(xì)胞增殖的影響。研究結(jié)果：(1)根據(jù)BSP計(jì)算,miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)甲基化頻率,未處理組結(jié)果顯示, L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701四種肝細(xì)胞的啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度分別為51.42%、80.00%、60.00%和68.57%。與正常肝細(xì)胞(L0-2)比較,肝癌細(xì)胞(Huh7、HepG2和QSG-7701)的miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度均明顯升高,差異有明顯差異(F=25.9,p(0.001)。(2)經(jīng)PCR檢測(cè),未處理組4種肝細(xì)胞(L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701)的miRNA-214表達(dá)量分別為2.84±0.52、1.00±0.08、1.00±0.06和1.00±0.12。與正常肝細(xì)胞比較,三種肝癌細(xì)胞的miRNA-214表達(dá)水平較低,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=35.39,p0.001).在5umol/L和10umol/L兩種濃度下,處理組四種肝細(xì)胞miRNA-214表達(dá)水平分別為1.66±0.06、0.58±0.12、0.73±0.13和0.83_±0.04；1.00±0.29、0.34±0.07、0.10±0.01和0.30±0.06。隨著干擾素濃度升高,四種肝細(xì)胞的miRNA-214表達(dá)水平降低。三個(gè)遞增濃度處理組比較,miRNA-214表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.9,p0.001；F=40.5,p＜0.001;F=98.1,p＜0.001;F=61.6,p0.001)。(3)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中,未處理組4種肝細(xì)胞系(L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701)增殖水平分別為0.18±0.03、0.81±0.61、0.68±0.28和3.79±0.16;在5μmol/L和10μmol/L濃度下,處理組肝細(xì)胞(L0-2、Huh7、 HepG2和QSG-7701)增殖水平為0.17±0.07、1.14±0.76、0.42±0.18和2.70±0.107；0.16±0.04、1.55±0.87、0.37±0.19和0.45±0.37。與正常肝細(xì)胞比較,Huh7細(xì)胞經(jīng)去甲基化處理后細(xì)胞增殖活性增加(F=72.89,p0.05),HepG2細(xì)胞和QSG-7701經(jīng)去甲基化處理后細(xì)胞增殖活性略降低(F=95.36,p0.05;F=381.46,p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)論：通過(guò)BSP計(jì)算,我們發(fā)現(xiàn)3種肝癌細(xì)胞均呈現(xiàn)miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)高甲基化。經(jīng)不同濃度甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑干擾處理,肝癌細(xì)胞miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)甲基化顯著下降,miRNA-214表達(dá)水平降低,但是促進(jìn)了肝癌細(xì)胞增殖。我們的結(jié)果證實(shí),DNA甲基化可調(diào)控肝癌細(xì)胞中miRNA-214的表達(dá),進(jìn)一步影響肝癌的進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 啟動(dòng)子 甲基化 miRNA-214
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-6
• 英文縮略詞索引6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-18
• 一、材料與方法18-32
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-21
• 1.1 主要儀器設(shè)備18-19
• 1.2 細(xì)胞19
• 1.3 主要試劑19
• 1.4 常用試劑的配制19-21
• 1.5 生物信息學(xué)分析21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 2.1 啟動(dòng)子區(qū)域的生物信息學(xué)分析21-22
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 2.3 miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平檢測(cè)22-28
• 2.4 miRNA-214的定量檢測(cè)28-31
• 2.5 細(xì)胞增殖活性檢測(cè)31
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 二、結(jié)果32-36
• 1 啟動(dòng)子區(qū)域的生物信息學(xué)分析32-33
• 1.1 CpG島位置32
• 1.2 BSP引物32-33
• 1.3 基因組DNA的提取結(jié)果33
• 2 啟動(dòng)子CpG位點(diǎn)甲基化狀態(tài)分析33-34
• 3 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對(duì)啟動(dòng)子甲基化的影響34
• 4 5-Aza-CdR對(duì)不同肝細(xì)胞系miRNA-214表達(dá)水平的影響34-36
• 5 5-Aza-CdR對(duì)不同肝細(xì)胞系細(xì)胞增殖的影響36
• 三、討論36-40
• 1. 去甲基化對(duì)miRNA-214啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度的分析38-39
• 2. 去甲基化對(duì)miRNA-214表達(dá)水平的分析39
• 3. 去甲基化對(duì)細(xì)胞增殖活性的分析39-40
• 4. 問(wèn)題與展望40
• 四、結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-49
• 綜述49-65
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表及待發(fā)表的文章66

【相似文獻(xiàn)】

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1 楊益;miRNA-21、miRNA-214、miRNA-106a、miRNA-378在腎癌患者血清中的差異表達(dá)及臨床意義[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉柳;啟動(dòng)子區(qū)甲基化對(duì)肝癌細(xì)胞miRNA-214表達(dá)及細(xì)胞增殖活性的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 黃勝藍(lán);miRNA-214促進(jìn)胃癌SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥及相關(guān)機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：524028