本文關(guān)鍵詞：AMPK對小鼠乳腺上皮細(xì)胞增殖和乳腺發(fā)育的影響

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【摘要】：目的:5’單磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)是真核生物中被公認(rèn)的能量調(diào)節(jié)感受器。本研究旨在構(gòu)建AMPK dominant negative轉(zhuǎn)基因小鼠,觀察AMPK活性抑制后對乳腺上皮細(xì)胞增殖及乳腺發(fā)育的影響,觀察AMPK激活劑二甲雙胍對乳腺發(fā)育的作用,探究是否有惡性化腫瘤的形成。方法:1.利用外源性α-flag修飾AMPK突變片段構(gòu)建AMPK dominant negative轉(zhuǎn)基因鼠(以下簡稱DN),采用PCR及免疫組化的方法檢測靶基因和蛋白的表達(dá)以檢測轉(zhuǎn)基因鼠的構(gòu)建成功。2.采用Whole Mount的方法,觀察比較4~30不同周齡、妊娠期5 d/10 d/17d及哺乳期2 d DN和WT雌鼠乳腺全組織形態(tài)的變化情況;并通過HE以及PCNA染色進(jìn)一步觀察AMPK活性降低對小鼠乳腺上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)及增殖的影響。3.用5 mg/ml濃度二甲雙胍腹腔注射4周齡、妊娠期5天和10天WT小鼠7天,Whole mount觀察青春期導(dǎo)管的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果:1.RT-PCR鑒定AMPK DN基因型,目的條帶為500bp。利用Q-PCR檢測α-flag片段在小鼠乳腺中基因RNA水平的表達(dá),顯示W(wǎng)T中并無表達(dá)。另外,免疫組化進(jìn)一步證實(shí)α-flag蛋白在DN小鼠上皮細(xì)胞中表達(dá),且p-AMPK表達(dá)下降,提示轉(zhuǎn)基因鼠的構(gòu)建成功。2.青春期,AMPK活性降低對小鼠乳腺導(dǎo)管的延伸和擴(kuò)展進(jìn)程無顯著變化,然而,5w DN小鼠中導(dǎo)管終端TEB逐漸增多,較WT小鼠差異有統(tǒng)計意義;5w、6w時,TEB面積均較WT組大,p0.05,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;同時,HE及PCNA顯示促進(jìn)成熟導(dǎo)管上皮的細(xì)胞增殖及增厚。妊娠期,DN和WT組乳腺發(fā)育無明顯區(qū)別,哺乳期DN小鼠腺泡內(nèi)腔大于WT小鼠,p0.05,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.形態(tài)學(xué)上,二甲雙胍能抑制妊娠期初期乳腺導(dǎo)管發(fā)育。結(jié)論:AMPK dominant negative(DN)轉(zhuǎn)基因鼠成功構(gòu)建;小鼠乳腺上皮AMPK活性降低促進(jìn)青春期小鼠導(dǎo)管上皮細(xì)胞的增殖,促進(jìn)TEBs的發(fā)育,對妊娠期乳腺發(fā)育無明顯變化,二甲雙胍抑制妊娠期初期導(dǎo)管發(fā)育;AMPK活性變化能影響小鼠乳腺的階段發(fā)育。
【關(guān)鍵詞】：AMPK 乳腺上皮細(xì)胞 增殖 乳腺發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞對照表9-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法15-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2.1.1 小鼠15
• 2.1.2 主要試劑15-17
• 2.1.3 主要抗體17
• 2.1.4 引物17
• 2.1.5 主要儀器17
• 2.1.6 主要溶液的配制17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-27
• 2.2.1 小鼠編號18-19
• 2.2.2 小鼠組織DNA提取及基因型檢測19-20
• 2.2.3 RNA提取，RT-PCR及Q-PCR20-23
• 2.2.4 乳腺組織的全組織染色（Whole Mount）23
• 2.2.5 組織切片的HE染色23-24
• 2.2.6 組織切片的免疫組化24-26
• 2.2.7 實(shí)驗(yàn)測量指標(biāo)26
• 2.2.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析26-27
• 第3章 AMPK乳腺特異性突變小鼠的構(gòu)建及鑒定27-29
• 3.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 3.2.1 AMPK DN在小鼠組織DNA中的表達(dá)及α-flag mRNA在小鼠乳腺中的表達(dá)27-28
• 3.2.2 α-flag及p-AMPK蛋白在小鼠乳腺中的定位及表達(dá)28-29
• 第4章 AMPK DN對小鼠乳腺生長發(fā)育的影響29-34
• 4.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>29
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-34
• 4.2.1 AMPK DN對小鼠乳腺生長發(fā)育的影響29-31
• 4.2.2 AMPK DN對青春期乳腺上皮細(xì)胞組織排列的影響31-33
• 4.2.3 AMPK DN對青春期乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響33-34
• 第5章 AMPK DN對小鼠妊娠期乳腺發(fā)育的影響34-38
• 5.1 研究目的34
• 5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-38
• 5.2.1 AMPK DN對小鼠妊娠期腺泡形成的影響34-36
• 5.2.2 AMPK DN對腺泡上皮細(xì)胞增殖的影響36
• 5.2.3 AMPK DN小鼠反復(fù)妊娠對乳腺成瘤的影響36-38
• 第6章 Metformin對WT小鼠青春期及妊娠期乳腺發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究38-40
• 6.1 研究目的38
• 6.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-40
• 6.2.1 Metformin對WT小鼠青春期乳腺生長發(fā)育的影響38
• 6.2.2 Metformin對WT小鼠妊娠期乳腺發(fā)育的影響38-40
• 第7章 討論40-43
• 7.1 AMPK DN轉(zhuǎn)基因鼠的構(gòu)建40
• 7.2 AMPK調(diào)節(jié)乳腺發(fā)育40-42
• 7.3 二甲雙胍、乳腺發(fā)育及腫瘤形成42-43
• 第8章 結(jié)論43-44
• 附錄44-46
• 致謝46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 攻讀學(xué)位期間的科研成果50-51
• 綜述51-67
• References60-65
• 附圖65-67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 Albert J Czaja;;Hepatic inflammation and progressive liver fibrosis in chronic liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年10期

2 湯麗霞;楊光;譚家駒;;Smad7抑制肝星狀細(xì)胞膠原蛋白表達(dá)[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年10期

3 談智,王庭槐;雌激素作用分子機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國病理生理雜志;2003年10期

4 康白,韓慧蓉,李廣宙,冷萍,高爾;二甲雙胍對小鼠血清雌二醇、孕酮含量的影響[J];中國藥理學(xué)通報;2003年02期

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本文編號：523832