本文關(guān)鍵詞：沉默DNA甲基轉(zhuǎn)移酶上調(diào)NDRG1表達(dá)對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

  更多相關(guān)文章： NDRG1 DNA甲基化 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 RNA干擾 前列腺癌

【摘要】：目的通過(guò)沉默DNA甲基轉(zhuǎn)移酶上調(diào)NDRG1基因,探討其對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法1.收集天津市泌尿外科研究所保存的12例行根治性前列腺切除術(shù)患者的前列腺癌組織及12例行根治性膀胱切除術(shù)或經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)患者的良性前列腺增生組織標(biāo)本,通過(guò)免疫組織化學(xué)染色及RT-q PCR方法檢測(cè)組織中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表達(dá)情況,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.體外培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞系DU145、PC-3及人正常前列腺上皮細(xì)胞系RWPE-1,通過(guò)RT-q PCR、Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞系中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表達(dá)情況,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3.參照相關(guān)資料設(shè)計(jì)DNMT1-si RNA、DNMT3b-si RNA及其陰性對(duì)照序列(negative control,NC),分別轉(zhuǎn)染DNMT1-si RNA、DNMT3b-si RNA、DNMT1-si RNA+DNMT3b-si RNA至DU145細(xì)胞,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照(NC control)及空白對(duì)照(Control)。通過(guò)RT-q PCR、Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞中DNMT1、DNMT3b和NDRG1基因表達(dá)改變。通過(guò)CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,Muse細(xì)胞狀態(tài)分析儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。篩選出NDRG1表達(dá)提升及細(xì)胞生物學(xué)行為改變最顯著組DU145細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。4.參照相關(guān)資料設(shè)計(jì)NDRG1-si RNA及其陰性對(duì)照序列,將NDRG1-si RNA轉(zhuǎn)染至上述NDRG1表達(dá)提升最顯著組的DU145細(xì)胞,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照及空白對(duì)照。通過(guò)RT-q PCR、Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞中NDRG1基因表達(dá)改變,并進(jìn)行細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞凋亡情況、細(xì)胞遷移及侵襲能力檢測(cè),最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1.免疫組化及RT-q PCR結(jié)果顯示,DNMT1、DNMT3b在前列腺癌組織中的表達(dá)高于前列腺增生組織(P0.05),NDRG1在前列腺增生組織中的表達(dá)高于前列腺癌組織(P0.05)。2.通過(guò)RT-q PCR及Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),DNMT1、DNMT3b在DU145、PC-3細(xì)胞系中的表達(dá)高于RWPE-1細(xì)胞系(P0.05),且DNMT1、DNMT3b在DU145細(xì)胞系中的表達(dá)高于PC-3細(xì)胞系(P0.05);NDRG1在RWPE-1細(xì)胞系中的表達(dá)高于DU145、PC-3細(xì)胞系(P0.05)。3.將DU145細(xì)胞分為5組進(jìn)行轉(zhuǎn)染后,通過(guò)RT-q PCR、Western blot、CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Muse細(xì)胞狀態(tài)分析儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)發(fā)現(xiàn),DNMT1-si RNA、DNMT3b-si RNA可顯著抑制DNMT1、DNMT3b的m RNA和蛋白表達(dá)(P0.05),顯著提升NDRG1的m RNA和蛋白表達(dá)(P0.05),顯著抑制細(xì)胞增殖(P0.05),促進(jìn)細(xì)胞凋亡(P0.05),減弱細(xì)胞的遷移和侵襲能力(P0.05)。其中DNMT1-si RNA組效果最顯著,共轉(zhuǎn)染未見(jiàn)顯著協(xié)同效應(yīng)(P0.05)。4.轉(zhuǎn)染DNMT1-si RNA至DU145細(xì)胞24h后,將這些細(xì)胞分為3組再次進(jìn)行轉(zhuǎn)染。通過(guò)RT-q PCR、Western blot、CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Muse細(xì)胞狀態(tài)分析儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)發(fā)現(xiàn),NDRG1-si RNA可顯著抑制NDRG1的m RNA和蛋白表達(dá)(P0.05),顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖(P0.05),減少細(xì)胞凋亡(P0.05),增強(qiáng)細(xì)胞的遷移和侵襲能力(P0.05)。結(jié)論1.DNMT1、DNMT3b在前列腺癌細(xì)胞中高表達(dá),在正常前列腺細(xì)胞中低表達(dá);NDRG1在前列腺癌細(xì)胞中低表達(dá),在正常前列腺細(xì)胞中高表達(dá)。2.NDRG1在前列腺癌細(xì)胞中發(fā)揮抑癌基因的作用,可以抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲。3.DNMT1、DNMT3b可以通過(guò)增加NDRG1的DNA甲基化修飾降低其在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲,其中DNMT1發(fā)揮主要作用。4.抑制DNMT1、DNMT3b可以部分恢復(fù)NDRG1在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá),進(jìn)而抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：NDRG1 DNA甲基化 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 RNA干擾 前列腺癌
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-19
• 研究現(xiàn)狀、成果12-17
• 研究目的、方法17-19
• 一、檢測(cè)正常前列腺及前列腺癌中DNMT1、DNMT3b、NDRG1的表達(dá)情況19-41
• 1.1 材料和方法19-34
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料19-25
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法25-33
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理33-34
• 1.2 結(jié)果34-37
• 1.2.1 免疫組化檢測(cè)前列腺增生組織和前列腺癌組織中DNMT1、DNMT3b、NDRG1蛋白的表達(dá)34-35
• 1.2.2 RT-qPCR檢測(cè)前列腺增生組織和前列腺癌組織中DNMT1、DNMT3b、NDRG1 m RNA的表達(dá)35-36
• 1.2.3 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1蛋白的表達(dá)36
• 1.2.4 RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1 mRNA的表達(dá)36-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 小結(jié)39-41
• 二、轉(zhuǎn)染siRNA后，，檢測(cè)DU145細(xì)胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1的表達(dá)情況及細(xì)胞生物學(xué)行為的改變41-58
• 2.1 材料和方法41-48
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料41-44
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法44-48
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理48
• 2.2 結(jié)果48-55
• 2.2.1 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1蛋白的表達(dá)48-49
• 2.2.2 RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1 mRNA的表達(dá)49-51
• 2.2.3 CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖情況51
• 2.2.4 Muse細(xì)胞狀態(tài)分析儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況51-52
• 2.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移情況52-54
• 2.2.6 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲情況54-55
• 2.3 討論55-57
• 2.4 小結(jié)57-58
• 三、沉默NDRG1后，檢測(cè)DU145細(xì)胞生物學(xué)行為的改變58-67
• 3.1 材料和方法58-60
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料58
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法58-60
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理60
• 3.2 結(jié)果60-65
• 3.2.1 Western blot檢測(cè)DU145細(xì)胞中NDRG1蛋白的表達(dá)60-61
• 3.2.2 RT-qPCR檢測(cè)DU145細(xì)胞中NDRG1 mRNA的表達(dá)61-62
• 3.2.3 CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖情況62-63
• 3.2.4 Muse細(xì)胞狀態(tài)分析儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況63
• 3.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移情況63-65
• 3.2.6 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲情況65
• 3.3 討論65-66
• 3.4 小結(jié)66-67
• 結(jié)論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明71-72
• 綜述 DNA異常甲基化與前列腺癌72-87
• 綜述參考文獻(xiàn)80-87
• 致謝87-89
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷89

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 佟紅艷,林茂芳;DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在骨髓增生異常綜合征與白血病細(xì)胞中的表達(dá)[J];中華血液學(xué)雜志;2003年06期

2 吳慶;周志俊;大迫誠(chéng)一郎;;環(huán)境污染物對(duì)著床前小鼠胚胎的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的影響[J];衛(wèi)生研究;2006年01期

3 李旭;林方才;周紅;鄭建紅;劉麗娟;李秋陽(yáng);;DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 凋亡抑制蛋白在肺癌組織中的表達(dá)及意義[J];山西醫(yī)藥雜志;2011年10期

4 王亮,吳e

本文編號(hào)：520836