本文關(guān)鍵詞：SNX5在乳腺癌細(xì)胞增殖中的作用

  更多相關(guān)文章： SNX5 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期 細(xì)胞周期相關(guān)基因

【摘要】：研究目的:分選蛋白家族(SNXs)是含有SNX-PX結(jié)構(gòu)域(磷酸鹽同源結(jié)構(gòu)域家族的一個亞型)的一類外周蛋白。作為Retromer復(fù)合體的一部分,SNXs協(xié)助Retromer復(fù)合體將物質(zhì)從內(nèi)膜系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體,因此SNXs家族就與膜內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及分解相關(guān)。作為SNXs家族重要一員的SNX5在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá),而在肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌及卵巢癌中低表達(dá)。提示SNX5可能在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。本研究主要探討SNX5表達(dá)量與乳腺癌細(xì)胞增殖的關(guān)系,并進(jìn)一步探討SNX5表達(dá)量與細(xì)胞增殖調(diào)控之間的聯(lián)系,初步闡明SNX5在細(xì)胞周期通路中可能發(fā)揮的作用。研究內(nèi)容:分析SNX5在腫瘤組織標(biāo)本中的細(xì)胞定位情況;SNX5真核表達(dá)載體的構(gòu)建;構(gòu)建SNX5高表達(dá)腫瘤細(xì)胞系;運(yùn)用小干擾RNA構(gòu)建SNX5沉默腫瘤細(xì)胞系;流式細(xì)胞儀檢測過表達(dá)及沉默SNX5后細(xì)胞周期的變化;闡明周期相關(guān)基因與SNX5的關(guān)系。研究方法:本研究首先通過基于基因表達(dá)譜的乳腺癌預(yù)后在線預(yù)測網(wǎng)站(Gene expression-based outcome for breast cancer Online,GOBO)預(yù)測SNX5表達(dá)量與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系,然后應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)將腫瘤組織標(biāo)本中SNX5蛋白染色,通過細(xì)胞顯微鏡觀察其在胞漿、胞核中的著色情況。進(jìn)而,我們通過體外實(shí)驗(yàn)研究SNX5的具體作用機(jī)制,運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因SNX5。并通過與真核表達(dá)載體連接,構(gòu)建SNX5真核表達(dá)載體。表達(dá)質(zhì)粒利用非脂質(zhì)體Fu GENE?HD Transfection Reagent介導(dǎo)轉(zhuǎn)染SNX5過表達(dá)質(zhì)粒,即構(gòu)建SNX5高表達(dá)腫瘤細(xì)胞株。我們購買了SNX5小干擾RNA,并且通過轉(zhuǎn)染構(gòu)建了SNX5沉默的細(xì)胞株。應(yīng)用CCK-8法、平板克隆、及EDU檢測SNX5與細(xì)胞增殖之間的關(guān)系,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀觀察SNX5對細(xì)胞周期的影響。通過Double-Thymidine法,將細(xì)胞同步于G1/S期,通過流式細(xì)胞儀和Western Blot方法研究細(xì)胞周期分布和細(xì)胞周期檢測點(diǎn)蛋白表達(dá)變化。最后,應(yīng)用細(xì)胞周期相關(guān)基因檢測試劑盒檢測SNX5基因與周期相關(guān)基因之間的關(guān)系。通過我們的研究第一次探討了SNX5與乳腺癌細(xì)胞增殖的關(guān)系,研究SNX5在調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程中所發(fā)揮的作用,并且初步探討了SNX5與細(xì)胞周期相關(guān)基因之間的關(guān)系。研究結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn),SNX5蛋白在癌組織中高表達(dá),在癌周組織中低表達(dá)。在MCF-7與MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系中,應(yīng)用si RNA沉默SNX5后,細(xì)胞增殖受到明顯的抑制,而在MCF-7中高表達(dá)SNX5后,細(xì)胞增殖明顯增多,說明SNX5促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖。在MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌細(xì)胞系中,沉默SNX5后促使癌細(xì)胞阻滯在G1/S期,而過表達(dá)SNX5后會促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入S期,說明SNX5與細(xì)胞周期相關(guān)。為了進(jìn)一步證實(shí)SNX5通過雙胸苷法阻滯Hela細(xì)胞于G1/S期釋放,流式細(xì)胞術(shù)顯示沉默SNX5表達(dá)后,證實(shí)癌細(xì)胞阻滯在G2/M期。細(xì)胞周期相關(guān)基因試劑盒檢測顯示,沉默SNX5表達(dá)后,P15、P16、CDK1基因表達(dá)量上升,提示P15及P16基因在沉默SNX5表達(dá)后,可能與癌細(xì)胞阻滯相關(guān)。研究結(jié)論:SNX5與乳腺癌的增殖密切相關(guān),并且可能通過影響細(xì)胞周期來控制癌細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：SNX5 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期 細(xì)胞周期相關(guān)基因
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、SNX5在腫瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)情況15-19
• 1.1 對象和方法15-17
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟16
• 1.1.3 免疫組化結(jié)果判讀16-17
• 1.2 結(jié)果17
• 1.3 討論17-18
• 1.4 小結(jié)18-19
• 二、質(zhì)粒構(gòu)建與siRNA篩選19-35
• 2.1 對象和方法19-33
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料19-24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟24-33
• 2.2 結(jié)果33-34
• 2.3 討論34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 三、細(xì)胞增殖學(xué)實(shí)驗(yàn)35-42
• 3.1 對象和方法35-38
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟36-38
• 3.2 結(jié)果38-40
• 3.3 討論40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 四、細(xì)胞周期42-46
• 4.1 對象和方法42-43
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料42-43
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟43
• 4.2 結(jié)果43-45
• 4.3 討論45
• 4.4 小結(jié)45-46
• 五、SNX5 與細(xì)胞周期相關(guān)基因之間的關(guān)系46-51
• 5.1 對象和方法46-48
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料46
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟46-48
• 5.2 結(jié)果48-50
• 5.3 討論50
• 5.4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 綜述 分選蛋白家族56-75
• 綜述參考文獻(xiàn)65-75
• 致謝75-76
• 個人簡歷76

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本文編號：518191