本文關鍵詞：PI3KCA、PI3KCB與大腸癌耐藥機制及靶向治療的相關性研究

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【摘要】：目的檢測大腸癌組織中PIK3CA、PIK3CB與多藥耐藥基因MDR-1、GST-7π、LRP、 Topo II的表達,并分析與臨床病理因素及大腸癌多藥耐藥性(muhidrug resistance,MDR)之間的相關性及其臨床意義；以大腸癌耐藥細胞HCT/ FU為研究對象,應用RNA干擾(RNAinterference, RNAi)技術研究PIK3CA、CB與耐藥的相關性,探討PI3KCA、PI3KCB對大腸癌靶點治療及其化療的協(xié)同影響作用,為判斷預后及臨床篩選合理有效的化療藥物提供理論依據(jù)。材料與方法收集濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科2005年01月至2009年01月間存檔的結直腸癌蠟塊共316例,所選病例均為首次發(fā)現(xiàn),術前未行任何放化療,術后均進行了聯(lián)合化療,通過回訪中心和電話隨訪所有病例。采用免疫組織化學方法檢測PIK3CA、CB基因和多藥耐藥蛋白在大腸癌中的表達,χ2檢驗分析各項指標與臨床病理參數(shù)之間的相關性；運用Kaplan-Meier法和Cox比例風險回歸模型分析大腸癌患者預后的影響因素。選用人結腸癌氟尿嘧啶耐藥細胞株(HCT-8/FU)作為研究對象,利用攜帶PIK3CA shRNA、PIK3CB shRNA的慢病毒進行轉(zhuǎn)染,沉默PIK3CA、PIK3CB的表達,應用Real time PCR及Western印跡法鑒定轉(zhuǎn)染效率；Real time PCR及Western印跡法在mRNA和蛋白水平檢測各組細胞多藥耐藥蛋白(MDR-1)的表達；細胞計數(shù)試劑盒8(CCK-8)法檢測細胞增殖；平板克隆實驗及transwell實驗檢測細胞生物學行為的差異。應用靶向藥物吉非替尼及常規(guī)化療藥物5-FU干預各組細胞,CCK-8檢測耐藥細胞對吉非替尼及5-FU的敏感性。結果316例大腸癌中,PIK3CA、PIK3CB的表達與腫瘤的分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移成正相關,其相關系數(shù)分別為0.136、0.168。MDR基因在大腸癌組織中的陽性表達率分別為：MDR-1為72.78%(230/316)、LRP為70.89%(224/316)、TopoⅡ為77.53%(45/316)GST-π為76.58%(242/316)。經(jīng)Spearman相關性分析,PIK3CA、PIK3CB的表達與多藥耐藥蛋白MDR-1、LRP、GST-π的表達均成正相關,相關系數(shù)分別為0.288、0.128、0.197。316例大腸癌病例的中位生存期為60個月,五年生存率為47.5%, Kaplan-Meier分析結果顯示,PIK3CA與PIK3CB同時高表達、淋巴結轉(zhuǎn)移、MDR-1陽性、GST-π陽性患者術后5年生存率明顯降低。Cox比例風險模型顯示,PIK3CA (+) PIK3CB (+)、淋巴結轉(zhuǎn)移、MDR-1、GST-π是影響大腸癌患者預后的獨立影響因素。耐藥細胞沉默PIK3CA、PIK3CB后,MDR-1表達明顯降低(P0.05)；耐藥細胞的增殖明顯降低；transwell實驗顯示,沉默PIK3CA、PIK3CB,耐藥細胞侵襲能力較空白組明顯降低(P0.05)；平板克隆實驗結果顯示,沉默PIK3CA. PIK3CB,腫瘤細胞的克隆能力明顯降低(P0.05),CCK-8藥物敏感實驗發(fā)現(xiàn),大腸癌細胞敲除突變的PIK3CA、PIK3CB基因后,腫瘤細胞對吉非替尼、5-FU的耐藥能力均明顯減弱。結論1、PIK3CA、PIK3CB、淋巴結轉(zhuǎn)移、MDR-1、GST-π是影響大腸癌患者預后的獨立因素,檢測PIK3CA、PIK3CB對臨床合理地選擇化療藥物、初步判斷預后具有重要意義。2、PIK3CA、PIK3CB在大腸癌組織中表達升高,且與大腸癌的多藥耐藥密切相關。3、沉默大腸癌耐藥細胞中的PIK3CA、PIK3CB,其增殖明顯降低、凋亡明顯增多,并可抑制其侵襲和克隆能力,PIK3CA、PIK3CB可能成為抑制腫瘤的新靶點。4、沉默PIK3CA、PIK3CB可提高大腸癌耐藥細胞株對吉非替尼及5-FU的敏感性,減少藥物濃度,達到最好治療效果,推測PIK3CA、PIK3CB可成為逆轉(zhuǎn)大腸癌耐藥和靶向治療的新靶點。
【關鍵詞】：大腸癌 PIK3CA PIK3CB 多藥耐藥 預后 靶向治療
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮略詞表9-11
• 引言11-13
• 第一部分：大腸癌組織中PIK3CA、CB的表達與多藥耐藥性的相關性及意義13-26
• 材料與方法13-17
• 結果17-19
• 討論19-22
• 附圖22-24
• 參考文獻24-26
• 第二部分：PIK3CA、CB與大腸癌耐藥機制及靶向治療的相關性研究26-49
• 材料與方法26-35
• 結果35-39
• 討論39-42
• 附圖42-47
• 參考文獻47-49
• 結論49
• 本研究創(chuàng)新性自我評價49-50
• 綜述50-59
• 參考文獻55-59
• 在讀期間發(fā)表文章59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：517530