發(fā)布時間：2017-07-04 10:25

  本文關(guān)鍵詞：miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡以及侵襲、遷移能力的影響

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【摘要】：背景:原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular Carcinoma,HCC)是世界范圍內(nèi)常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,在我國尤為高發(fā),目前手術(shù)切除仍是主要的治療手段,但手術(shù)切除風(fēng)險高、有效率低,且肝癌對放療不敏感,全身化療總體有效率也不足10%,因此,發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)志物和治療靶點已經(jīng)成為探索肝癌治療和預(yù)后的關(guān)鍵。多項研究均證實了微小RNA(micro RNA,mi RNAs)的異常表達(dá)與原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可見深入研究mi RNAs在HCC中的功能及相關(guān)作用機制可能在一定程度上為HCC的治療提供新的思路。本課題組在前期研究中應(yīng)用mi RNAs芯片技術(shù)對Hep G2細(xì)胞進(jìn)行mi RNAs表達(dá)譜分析,結(jié)果表明,與正常肝臟細(xì)胞相比,Hep G2細(xì)胞中mi R-98的表達(dá)水平顯著下調(diào)。本研究在此基礎(chǔ)上,通過轉(zhuǎn)染改變Hep G2細(xì)胞中mi R-98的表達(dá)水平,觀察mi R-98對肝癌Hep G2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,初步探討mi R-98在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用,為尋找新的分子靶向治療靶點奠定理論基礎(chǔ)。目的:研究mi R-98對肝癌Hep G2細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲、遷移能力的影響及其可能機制。方法:1.將Lipofectamine 3000與mi R-98 mimics按照不同的比例進(jìn)行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染24 h后,運用Taqman探針實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測定轉(zhuǎn)染效率。2.應(yīng)用Lipofectamine 3000將mi R-98 mimics,mi R-98 inhibitor轉(zhuǎn)染入Hep G2細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24 h后,運用Taqman探針實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測定轉(zhuǎn)染效率。3.MTT法檢測mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC對Hep G2細(xì)胞增殖的影響。4.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC對Hep G2細(xì)胞凋亡的影響。5.應(yīng)用Transwell小室遷移實驗檢測mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC對Hep G2細(xì)胞遷移能力的影響。6.應(yīng)用Transwell小室侵襲實驗檢測mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC對Hep G2細(xì)胞侵襲能力的影響。7.應(yīng)用Western blot法觀察轉(zhuǎn)染mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC后Hep G2細(xì)胞中凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)情況。結(jié)果:1.mi RNAs mimics:Lipo3000=1:5組細(xì)胞內(nèi)mi R-98的表達(dá)水平上調(diào)幅度最大,是對照組的33.36573倍。2.q RT-PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染24 h后,mi R-98 mimics組細(xì)胞內(nèi)mi R-98的表達(dá)量約為空白對照組的(34.81±4.80)倍,而mi R-98 inhibitor組細(xì)胞內(nèi)mi R-98的表達(dá)量約為空白對照組的(0.33±0.03)倍。3.MTT結(jié)果顯示,mi R-98 mimics組細(xì)胞存活率低于空白對照組及mimics-NC組(P0.05);而mi R-98 inhibitor組細(xì)胞存活率則高于空白對照組、inhibitor-NC組(P0.05)。4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,mi R-98 mimics組細(xì)胞凋亡率顯著高于空白對照組、mimics-NC組(P0.05);mi R-98 inhibitor組細(xì)胞凋亡率則低于空白對照組以及inhibitor-NC組(P0.05)。5.Transwell小室遷移實驗結(jié)果表明,mi R-98 mimics組的Hep G2細(xì)胞穿入到下層小室的數(shù)目少于空白對照組、mimics-NC組(P0.05),而mi R-98 inhibitor穿入到下層小室的Hep G2細(xì)胞數(shù)目明顯多于空白對照組以及inhibitor-NC組(P0.05)。6.Transwell小室侵襲實驗顯示,mi R-98 mimics組細(xì)胞進(jìn)入到下層小室的數(shù)目少于空白對照組、mimics-NC組(P0.05);mi R-98 inhibitor組進(jìn)入到下層小室的細(xì)胞數(shù)目明顯多于空白對照組以及inhibitor-NC組(P0.05)。7.Western blot法檢測顯示,轉(zhuǎn)染48 h后,mi R-98 mimics組Bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯低于空白對照組、mimics-NC組(P0.05)。mi R-98 inhibitor組Bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯高于空白對照組以及inhibitor-NC組(P0.05)。結(jié)論:1.轉(zhuǎn)染mi R-98 mimics可有效上調(diào)Hep G2細(xì)胞內(nèi)mi R-98的表達(dá)水平,而轉(zhuǎn)染mi R-98 inhibitor則能有效下調(diào)mi R-98的表達(dá)。2.上調(diào)mi R-98的表達(dá)水平能夠抑制Hep G2細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,減弱細(xì)胞的侵襲、遷移能力。3.下調(diào)mi R-98的表達(dá)能夠相對促進(jìn)Hep G2細(xì)胞增殖,減少細(xì)胞凋亡,增強細(xì)胞的侵襲、遷移能力。4.mi R-98可能通過下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá),促進(jìn)肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：miR-98 HepG2 增殖 凋亡 侵襲遷移
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 英文縮略詞6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 1 前言15-18
• 2 實驗材料18-20
• 2.1 細(xì)胞株18
• 2.2 實驗耗材及試劑18-19
• 2.3 儀器與設(shè)備19
• 2.4 主要溶液及試劑的配制19-20
• 3 實驗方法20-30
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNAs minics條件優(yōu)化21-24
• 3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染24-25
• 3.4 運用Taqman探針實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測定轉(zhuǎn)染效率25
• 3.5 細(xì)胞增殖檢測25-26
• 3.6 細(xì)胞凋亡檢測26
• 3.7 Transwell小室遷移、侵襲實驗26-28
• 3.8 Western blot法觀察轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2 的表達(dá)28-30
• 3.9 統(tǒng)計學(xué)分析30
• 4 結(jié)果30-38
• 4.1 預(yù)轉(zhuǎn)染minics后相對定量結(jié)果30-31
• 4.2 轉(zhuǎn)染后HepG2細(xì)胞內(nèi)miR-98表達(dá)水平的變化31-32
• 4.3 miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響32-33
• 4.4 miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的影響33-35
• 4.5 Transwell小室遷移實驗35-36
• 4.6 Transwell小室侵襲實驗36-37
• 4.7 凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2 的表達(dá)水平37-38
• 5 討論38-43
• 6 結(jié)論43-44
• 7 參考文獻(xiàn)44-49
• 8 附錄49-50
• 9 致謝50-51
• 10 綜述51-66
• 參考文獻(xiàn)62-66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李擴(kuò);許秋然;劉欣;劉青光;王茂德;;miR-204通過下調(diào)Bcl-2和Sirt1表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞生長[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2015年02期

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本文編號：517443