本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖的研究

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【摘要】：研究背景及目的:干細(xì)胞和腫瘤關(guān)系的研究是目前生物學(xué)領(lǐng)域里的研究熱點(diǎn)之一。本課題在體外分離、培養(yǎng)、鑒定了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSCs),研究了UC-MSCs對(duì)前列腺癌細(xì)胞系PC3增殖作用的影響和機(jī)理,具有一定的理論和實(shí)踐意義。研究材料和方法:經(jīng)過(guò)知情同意后,我們從吉林大學(xué)第二醫(yī)院取得了臍帶,通過(guò)組織塊貼壁法分離得到UC-MSCs,以成骨誘導(dǎo)、成脂誘導(dǎo)等方法對(duì)其進(jìn)行鑒定。在UC-MSCs與腫瘤間關(guān)系的研究實(shí)驗(yàn)中,我們主要使用了UC-MSCs條件培養(yǎng)液(CM)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用對(duì)應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)液(DMEM/RAPI-1640)作為對(duì)照。首先以CM和對(duì)應(yīng)培養(yǎng)液對(duì)8種不同種類的腫瘤細(xì)胞系細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),由于CM對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞活力影響最為明顯,我們選擇PC3細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,并進(jìn)一步確定了CM對(duì)PC3細(xì)胞的促增殖作用。通過(guò)閱讀文獻(xiàn),我們初步認(rèn)為骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)可能是上述促增殖作用的關(guān)鍵因子之一。為了驗(yàn)證我們的假說(shuō),我們首先檢測(cè)了UC-MSCs、PC3細(xì)胞與另外兩種正常體細(xì)胞的OPG在m RNA水平的表達(dá)量,并做了OPG對(duì)8種腫瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)影響的濃度梯度曲線;同時(shí)采取了抑制OPG的方法:分別在CM和1640培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下,加入不同濃度的OPG抗體,檢測(cè)PC3細(xì)胞活力。在機(jī)制方面,我們研究了促增殖作用與p-Erk/Erk間的關(guān)系:分別在CM和1640培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下,檢測(cè)PC3細(xì)胞的p-Erk/Erk的表達(dá);向培養(yǎng)液中加入MAPKK抑制劑(可抑制Erk1/2的激活),檢測(cè)兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下PC3細(xì)胞的活力。體外檢測(cè)了PC3細(xì)胞存在的狀態(tài)下,MSCs是否有趨向性運(yùn)動(dòng)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中主要用到了流式鑒定、細(xì)胞周期測(cè)定、免疫熒光、共培養(yǎng)、RT-PCR,MTT和Western Blot、transwell等方法。研究結(jié)果:在本課題研究中我們從臍帶中成功分離得到細(xì)胞,并且鑒定確定所分離得到的細(xì)胞即為MSCs。對(duì)8種不同種類的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選后,發(fā)現(xiàn)對(duì)比于對(duì)照組,CM培養(yǎng)條件下,前列腺癌PC3細(xì)胞活力提升了2.7倍(p0.05),而其他細(xì)胞的細(xì)胞活力則沒(méi)有明顯的改變。我們發(fā)現(xiàn)在m RNA水平,UC-MSCs的OPG表達(dá)量大約是其他細(xì)胞的2.7倍(p0.05),繼而發(fā)現(xiàn),參與篩選的8種腫瘤細(xì)胞中,外加OPG時(shí),PC3細(xì)胞增殖了1.3倍(p0.05),而其他7種細(xì)胞則沒(méi)有出現(xiàn)增殖的現(xiàn)象。在封閉了PC3細(xì)胞自身分泌的OPG后,外加OPG抗體還能進(jìn)一步抑制CM對(duì)PC3細(xì)胞的促增殖作用,這表明CM中含有OPG促進(jìn)PC3細(xì)胞的增殖。在初步探究促增殖機(jī)制時(shí),發(fā)現(xiàn)CM培養(yǎng)的PC3細(xì)胞的p-Erk/Erk表達(dá)量明顯高于對(duì)照組,加入MAPKK抑制劑后能阻止一部分促增殖作用,這可能表明促增殖作用中Erk1/2起一定作用。有PC3細(xì)胞存在的情況下,發(fā)生遷移運(yùn)動(dòng)的MSCs增多。研究結(jié)論:1初步確定人UC-MSCs可以通過(guò)分泌OPG促進(jìn)PC3細(xì)胞增殖,且促增殖過(guò)程中,MAPK通路可能被激活。2體外,UC-MSCs趨向PC3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 前列腺癌PC3細(xì)胞 骨保護(hù)素 MAPK ERK
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 第1章 緒論12-24
• 1.1 干細(xì)胞簡(jiǎn)介12-14
• 1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)介14-16
• 1.2.1 間充質(zhì)干細(xì)胞優(yōu)勢(shì)及定義14-15
• 1.2.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞15-16
• 1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞治療疾病的研究16-18
• 1.4 干細(xì)胞與惡性腫瘤18-20
• 1.4.1 惡性腫瘤的現(xiàn)狀18-20
• 1.4.2 干細(xì)胞與腫瘤間關(guān)系的研究20
• 1.5 骨保護(hù)素20-22
• 1.5.1 骨保護(hù)素簡(jiǎn)介21
• 1.5.2 骨保護(hù)素與腫瘤21-22
• 1.6 MAPK通路22-24
• 第2章 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離提取鑒定24-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料24-27
• 2.1.1 主要儀器24-25
• 2.1.2 主要試劑和耗材25-26
• 2.1.3 主要試劑配制26-27
• 2.1.4 細(xì)胞來(lái)源27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 2.2.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離提取27-28
• 2.2.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代、凍存、復(fù)蘇28
• 2.2.3 臍帶組織塊的傳代28-29
• 2.2.4 成骨誘導(dǎo)及染色鑒定干細(xì)胞29
• 2.2.5 成脂誘導(dǎo)及染色鑒定干細(xì)胞29
• 2.2.6 免疫熒光鑒定干細(xì)胞29-30
• 2.2.7 流式檢測(cè)鑒定干細(xì)胞30-31
• 2.3 數(shù)據(jù)處理31
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 2.4.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離提取31-32
• 2.4.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定32-35
• 2.5 討論35-37
• 第3章 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌骨保護(hù)素（OPG）促進(jìn)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖37-58
• 3.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料37-39
• 3.1.1 主要儀器37
• 3.1.2 主要試劑和耗材37-38
• 3.1.3 主要試劑配制38-39
• 3.1.4 細(xì)胞來(lái)源39
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法39-47
• 3.2.1 條件培養(yǎng)液（CM）的獲得39
• 3.2.2 MTT法測(cè)細(xì)胞活力39-40
• 3.2.3 免疫熒光40
• 3.2.4 細(xì)胞周期測(cè)定40
• 3.2.5 共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)40
• 3.2.6 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）40-43
• 3.2.7 Western Blot43-46
• 3.2.8 Transwell實(shí)驗(yàn)46-47
• 3.3 數(shù)據(jù)處理47
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-55
• 3.4.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能特異性的促進(jìn)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖。47-48
• 3.4.2 確定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)PC3細(xì)胞的促增殖作用48-51
• 3.4.3 尋找對(duì)促增殖可能起關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子并確定其作用51-53
• 3.4.4 探究條件培養(yǎng)液的促增殖作用與MAPK通路的關(guān)系53-55
• 3.5 討論55-58
• 第4章 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)介62-63
• 致謝63

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