本文關鍵詞：肺癌中調節(jié)性B細胞對免疫的抑制作用及其機制

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【摘要】：目的:分析肺癌病人外周血中CD19~+CD20~-B細胞表型特點,為其免疫抑制功能提供理論依據(jù)。通過肺癌細胞上清誘導B細胞,檢測對T細胞增殖的抑制效應,驗證肺癌中抑制性B細胞的存在。內容和方法:收集26例肺癌初治患者及11例健康人外周血,所有患者均經(jīng)術后病理證實為肺癌。用流式細胞術檢測肺癌患者和健康人外周血中CD19~+B細胞及其亞群CD19~+CD20~-B細胞比例,并比較患者和健康人之間的差異。分析26例肺癌患者外周血B細胞中CD19~+CD20~-B細胞的比例,結合臨床病理資料分析CD19~+CD20~-B細胞比例和淋巴結轉移、遠處轉移及肺癌分期等臨床指標的關系。通過多色流式分析的方法檢測肺癌患者外周血CD19~+B細胞中CD19~+CD20~-及CD19~+CD20~+B細胞亞群的表型分子特點,分析抑制性分子PD-1、CTLA-4和Tim-1在兩群細胞上的不同表達水平。分析兩者之間CD62L、CCR6、CD27、C24以及CD38表達的差異;收集肺癌組織及癌旁組織標本,檢測并比較癌和癌旁組織浸潤淋巴細胞的密度。將分選的外周血B細胞分別在加入刺激因子TNF家族B細胞活化因子(B cell-activating factor belonging to the TNF family,BAFF)的培養(yǎng)液及加入腫瘤細胞系NCI-H1299、NCI-520培養(yǎng)上清的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng),比較三種方案培養(yǎng)后B細胞表型分子的變化,同時比較不同上清刺激后的B細胞對CD4~+及CD8~+T細胞增殖抑制程度的差異。結果:流式分析結果顯示,與健康人相比,肺癌患者外周血中CD19~+B細胞比例顯著下降(p=0.0013)。CD19~+CD20~-B細胞在肺癌患者比例高于健康人(p=0.0379)。進一步將肺癌患者分成轉移組(包括淋巴結轉移和遠處轉移)和非轉移組,發(fā)現(xiàn)轉移組CD19~+CD20~-B細胞顯著高于非轉移組(p=0.0341),但是未能發(fā)現(xiàn)CD19~+CD20~-B細胞比例與肺癌患者的其他臨床病理特征(性別、年齡、腫瘤大小、臨床分期等)有關。多色流式分析結果顯示在人外周血CD19~+B細胞亞群中,與CD19~+CD20~+B細胞相比,CD19~+CD20~-B細胞中高表達抑制性分子PD-1(p0.0001)、CTLA-4(p0.0001)和Tim-1(p0.0001),說明CD19~+D20~-B細胞代表一群具有免疫抑制作用的B細胞亞群;同時低表達CD62L,說明CD19~+CD20~-B細胞無法到達脾臟、淋巴結等次級淋巴器官,接受抗原刺激而發(fā)育成為成熟的漿細胞;而低表達CCR6則說明其不能有效地啟動體液免疫應答。CD19~+CD20~-B細胞較CD19~+CD20~+B細胞高表達CD38(p0.0001),高表達CD27(p0.0001),低表達CD24(p0.0001),說明肺癌中CD19~+CD20~-B細胞與免疫相關性疾病中調節(jié)性B細胞(regulatory B cell,Breg)有所差異。與癌旁組織相比,癌組織浸潤較多的CD19~+B細胞(p=0.0070)和CD19~+CD20~-B細胞(p=0.0120)。功能實驗顯示,與BAFF刺激組相比,肺癌細胞系NCI-H1299上清刺激后的B細胞可以誘導產(chǎn)生一群表型為CD19~+CD20~-B細胞,而NCI-H520肺癌細胞上清刺激組則未誘導產(chǎn)生該群細胞。將三組B細胞分別與CD3~+T細胞進行共培養(yǎng),檢測CD3~+T細胞中CD4~+及CD8~+T細胞的增殖情況,體外實驗結果顯示,NCI-H1299上清培養(yǎng)后的B細胞對CD4~+及CD8~+T細胞增殖均具有明顯的抑制效應。結論:肺癌病人外周血CD19~+CD20~-B在肺癌轉移患者高于未轉移患者;表型分子分析結果顯示這群B細胞高表達抑制性分子;但是存在歸巢障礙,可能不能到達刺激淋巴器官,有效啟動體液免疫應答。體外實驗顯示肺癌細胞系NCI-H1299上清可以體外誘導產(chǎn)生抑制性B細胞;誘導產(chǎn)生的抑制性B細胞對T細胞增殖具有抑制作用。
【關鍵詞】：肺癌 調節(jié)性B細胞 表型分子 免疫抑制 腫瘤逃逸
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 對象和方法17-24
• 1.1 研究對象17
• 1.2 研究材料17-18
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)試劑及耗材17
• 1.2.2 流式分析試劑17-18
• 1.2.3 磁珠分選試劑18
• 1.2.4 其他18
• 1.3 研究儀器18
• 1.4 研究方法18-24
• 1.4.1 PBMCs的分離18-19
• 1.4.2 細胞表面，胞內流式抗體的標記19-20
• 1.4.3 流式細胞儀檢測20
• 1.4.4 免疫磁珠分選CD19~+B細胞和CD3~+T細胞20-21
• 1.4.5 腫瘤上清誘導后B細胞表型的檢測21
• 1.4.6 T/B細胞共育實驗21-22
• 1.4.7 T細胞增殖檢測22-23
• 1.4.8 統(tǒng)計學方法23-24
• 結果24-34
• 2.1 健康人及肺癌患者外周血中，，B細胞的比例及表型差異24-27
• 2.1.1 肺癌患者與健康人外周血B細胞占淋巴細胞的比例差異24-25
• 2.1.2 肺癌患者與健康人外周血CD19~+CD20~-B細胞比例差異25
• 2.1.3 與健康人相比，肺癌患者外周血CD19~+CD20~-B細胞高表達CTLA-4、低表達CD62L25-27
• 2.2 肺癌患者外周血中，傳統(tǒng)CD19~+CD20~+B細胞與CD19~+CD20~-B細胞表型差異27-31
• 2.2.1 肺癌患者CD19~+CD20~- B細胞高表達免疫抑制相關分子27-28
• 2.2.2 肺癌患者CD19~+CD20~-B細胞低表達歸巢相關分子和趨化因子受體分子28-30
• 2.2.3 肺癌患者CD19~+CD20~-B細胞表面的其他表型分子表達情況30-31
• 2.3 肺癌病人癌組織及無瘤肺組織浸潤淋巴細胞及其亞群的比較31-32
• 2.4 肺癌細胞系上清誘導的B細胞表型及功能特點32-34
• 討論34-44
• 3.1 腫瘤患者體內的免疫抑制微環(huán)境35
• 3.2 Breg的表型特點35-40
• 3.2.1 小鼠及人類中Breg的表型35-37
• 3.2.2 肺癌微環(huán)境中CD19~+CD20~- B細胞表型分子表達的分析37-40
• 3.3 腫瘤浸潤B細胞40-41
• 3.4 Breg的來源41-42
• 3.5 Breg的作用機制42-44
• 結論44-45
• 參考文獻45-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 調節(jié)性B細胞的研究現(xiàn)狀57-73
• 綜述參考文獻65-73
• 致謝73-74
• 個人簡歷74

  本文關鍵詞：肺癌中調節(jié)性B細胞對免疫的抑制作用及其機制

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本文編號：514030