本文關(guān)鍵詞：肺癌中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞對(duì)免疫的抑制作用及其機(jī)制

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【摘要】：目的:分析肺癌病人外周血中CD19~+CD20~-B細(xì)胞表型特點(diǎn),為其免疫抑制功能提供理論依據(jù)。通過肺癌細(xì)胞上清誘導(dǎo)B細(xì)胞,檢測(cè)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng),驗(yàn)證肺癌中抑制性B細(xì)胞的存在。內(nèi)容和方法:收集26例肺癌初治患者及11例健康人外周血,所有患者均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為肺癌。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺癌患者和健康人外周血中CD19~+B細(xì)胞及其亞群CD19~+CD20~-B細(xì)胞比例,并比較患者和健康人之間的差異。分析26例肺癌患者外周血B細(xì)胞中CD19~+CD20~-B細(xì)胞的比例,結(jié)合臨床病理資料分析CD19~+CD20~-B細(xì)胞比例和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及肺癌分期等臨床指標(biāo)的關(guān)系。通過多色流式分析的方法檢測(cè)肺癌患者外周血CD19~+B細(xì)胞中CD19~+CD20~-及CD19~+CD20~+B細(xì)胞亞群的表型分子特點(diǎn),分析抑制性分子PD-1、CTLA-4和Tim-1在兩群細(xì)胞上的不同表達(dá)水平。分析兩者之間CD62L、CCR6、CD27、C24以及CD38表達(dá)的差異;收集肺癌組織及癌旁組織標(biāo)本,檢測(cè)并比較癌和癌旁組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的密度。將分選的外周血B細(xì)胞分別在加入刺激因子TNF家族B細(xì)胞活化因子(B cell-activating factor belonging to the TNF family,BAFF)的培養(yǎng)液及加入腫瘤細(xì)胞系NCI-H1299、NCI-520培養(yǎng)上清的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng),比較三種方案培養(yǎng)后B細(xì)胞表型分子的變化,同時(shí)比較不同上清刺激后的B細(xì)胞對(duì)CD4~+及CD8~+T細(xì)胞增殖抑制程度的差異。結(jié)果:流式分析結(jié)果顯示,與健康人相比,肺癌患者外周血中CD19~+B細(xì)胞比例顯著下降(p=0.0013)。CD19~+CD20~-B細(xì)胞在肺癌患者比例高于健康人(p=0.0379)。進(jìn)一步將肺癌患者分成轉(zhuǎn)移組(包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)和非轉(zhuǎn)移組,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移組CD19~+CD20~-B細(xì)胞顯著高于非轉(zhuǎn)移組(p=0.0341),但是未能發(fā)現(xiàn)CD19~+CD20~-B細(xì)胞比例與肺癌患者的其他臨床病理特征(性別、年齡、腫瘤大小、臨床分期等)有關(guān)。多色流式分析結(jié)果顯示在人外周血CD19~+B細(xì)胞亞群中,與CD19~+CD20~+B細(xì)胞相比,CD19~+CD20~-B細(xì)胞中高表達(dá)抑制性分子PD-1(p0.0001)、CTLA-4(p0.0001)和Tim-1(p0.0001),說明CD19~+D20~-B細(xì)胞代表一群具有免疫抑制作用的B細(xì)胞亞群;同時(shí)低表達(dá)CD62L,說明CD19~+CD20~-B細(xì)胞無法到達(dá)脾臟、淋巴結(jié)等次級(jí)淋巴器官,接受抗原刺激而發(fā)育成為成熟的漿細(xì)胞;而低表達(dá)CCR6則說明其不能有效地啟動(dòng)體液免疫應(yīng)答。CD19~+CD20~-B細(xì)胞較CD19~+CD20~+B細(xì)胞高表達(dá)CD38(p0.0001),高表達(dá)CD27(p0.0001),低表達(dá)CD24(p0.0001),說明肺癌中CD19~+CD20~-B細(xì)胞與免疫相關(guān)性疾病中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regulatory B cell,Breg)有所差異。與癌旁組織相比,癌組織浸潤(rùn)較多的CD19~+B細(xì)胞(p=0.0070)和CD19~+CD20~-B細(xì)胞(p=0.0120)。功能實(shí)驗(yàn)顯示,與BAFF刺激組相比,肺癌細(xì)胞系NCI-H1299上清刺激后的B細(xì)胞可以誘導(dǎo)產(chǎn)生一群表型為CD19~+CD20~-B細(xì)胞,而NCI-H520肺癌細(xì)胞上清刺激組則未誘導(dǎo)產(chǎn)生該群細(xì)胞。將三組B細(xì)胞分別與CD3~+T細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),檢測(cè)CD3~+T細(xì)胞中CD4~+及CD8~+T細(xì)胞的增殖情況,體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NCI-H1299上清培養(yǎng)后的B細(xì)胞對(duì)CD4~+及CD8~+T細(xì)胞增殖均具有明顯的抑制效應(yīng)。結(jié)論:肺癌病人外周血CD19~+CD20~-B在肺癌轉(zhuǎn)移患者高于未轉(zhuǎn)移患者;表型分子分析結(jié)果顯示這群B細(xì)胞高表達(dá)抑制性分子;但是存在歸巢障礙,可能不能到達(dá)刺激淋巴器官,有效啟動(dòng)體液免疫應(yīng)答。體外實(shí)驗(yàn)顯示肺癌細(xì)胞系NCI-H1299上清可以體外誘導(dǎo)產(chǎn)生抑制性B細(xì)胞;誘導(dǎo)產(chǎn)生的抑制性B細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞增殖具有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞 表型分子 免疫抑制 腫瘤逃逸
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 對(duì)象和方法17-24
• 1.1 研究對(duì)象17
• 1.2 研究材料17-18
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)試劑及耗材17
• 1.2.2 流式分析試劑17-18
• 1.2.3 磁珠分選試劑18
• 1.2.4 其他18
• 1.3 研究?jī)x器18
• 1.4 研究方法18-24
• 1.4.1 PBMCs的分離18-19
• 1.4.2 細(xì)胞表面，胞內(nèi)流式抗體的標(biāo)記19-20
• 1.4.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)20
• 1.4.4 免疫磁珠分選CD19~+B細(xì)胞和CD3~+T細(xì)胞20-21
• 1.4.5 腫瘤上清誘導(dǎo)后B細(xì)胞表型的檢測(cè)21
• 1.4.6 T/B細(xì)胞共育實(shí)驗(yàn)21-22
• 1.4.7 T細(xì)胞增殖檢測(cè)22-23
• 1.4.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23-24
• 結(jié)果24-34
• 2.1 健康人及肺癌患者外周血中，，B細(xì)胞的比例及表型差異24-27
• 2.1.1 肺癌患者與健康人外周血B細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的比例差異24-25
• 2.1.2 肺癌患者與健康人外周血CD19~+CD20~-B細(xì)胞比例差異25
• 2.1.3 與健康人相比，肺癌患者外周血CD19~+CD20~-B細(xì)胞高表達(dá)CTLA-4、低表達(dá)CD62L25-27
• 2.2 肺癌患者外周血中，傳統(tǒng)CD19~+CD20~+B細(xì)胞與CD19~+CD20~-B細(xì)胞表型差異27-31
• 2.2.1 肺癌患者CD19~+CD20~- B細(xì)胞高表達(dá)免疫抑制相關(guān)分子27-28
• 2.2.2 肺癌患者CD19~+CD20~-B細(xì)胞低表達(dá)歸巢相關(guān)分子和趨化因子受體分子28-30
• 2.2.3 肺癌患者CD19~+CD20~-B細(xì)胞表面的其他表型分子表達(dá)情況30-31
• 2.3 肺癌病人癌組織及無瘤肺組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞及其亞群的比較31-32
• 2.4 肺癌細(xì)胞系上清誘導(dǎo)的B細(xì)胞表型及功能特點(diǎn)32-34
• 討論34-44
• 3.1 腫瘤患者體內(nèi)的免疫抑制微環(huán)境35
• 3.2 Breg的表型特點(diǎn)35-40
• 3.2.1 小鼠及人類中Breg的表型35-37
• 3.2.2 肺癌微環(huán)境中CD19~+CD20~- B細(xì)胞表型分子表達(dá)的分析37-40
• 3.3 腫瘤浸潤(rùn)B細(xì)胞40-41
• 3.4 Breg的來源41-42
• 3.5 Breg的作用機(jī)制42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的研究現(xiàn)狀57-73
• 綜述參考文獻(xiàn)65-73
• 致謝73-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74

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本文編號(hào)：514030