本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)PPAR-gamma基因?qū)ρ芰鰜碓吹拈g充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)成脂肪分化的影響

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【摘要】：目的 嬰幼兒血管瘤的消退過程中伴隨脂肪形成現(xiàn)象。前期研究已經(jīng)證實血管瘤組織中的MSCs是脂肪形成的細(xì)胞基礎(chǔ),PPAR-gamma基因在體內(nèi)和體外均能促進(jìn)Hem-MSCs的成脂肪分化。本研究觀察升高PPAR-gamma基因表達(dá)水平對Hem-MSCs的體內(nèi)成脂肪分化的影響,探討經(jīng)PPAR-gamma信號通路對嬰幼兒血管瘤進(jìn)行靶向治療的可能性。方法 (1)實驗分組：采用貼壁篩選法從增生期血管瘤組織中分離得到間充質(zhì)干細(xì)胞,將Hem-MSCs與Matrigel混合后注射到裸鼠背部皮下,建立Hem-MSCs的體內(nèi)分化研究模型。以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的Hem-MSCs與Matrigel混合后注射到裸鼠背部皮下作為空白對照組(A組)。用只加載了GFP基因的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,以此作為陰性病毒對照組(B組)。構(gòu)建并包裝加載GFP基因,同時過表達(dá)PPAR-gamma基因的慢病毒顆粒。通過慢病毒轉(zhuǎn)染Hem-MSCs,上調(diào)其PPAR-gamma基因的表達(dá)；將被轉(zhuǎn)染的Hem-MSCs與Matrigel混合后注射到裸鼠背部皮下,以此作為PPAR-gamma上調(diào)表達(dá)組(C組)。移植后2周、4周、8周取出裸鼠背部移植細(xì)胞團(tuán),觀察此三組的移植塊中脂肪形成的差異。(2)觀察指標(biāo)：①H-E染色和免疫組化染色(PerilipinA,GFP)觀察移植塊中的脂肪形成情況及其種屬來源；②熒光免疫組化共染色(PerilipinA和GFP)進(jìn)一步確認(rèn)移植塊中脂肪細(xì)胞的種屬來源；③實時定量PCR檢測移植塊中脂肪分化相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果 (1)HE染色顯示,三組移植塊中均有脂肪細(xì)胞形成：免疫組化染色顯示移植塊中的脂肪細(xì)胞表達(dá)Perilipin A。半定量分析顯示,移植后2周,C組移植塊中脂肪細(xì)胞密度明顯高于A和B組,A組和B組之間無明顯差異；移植后4周,三組移植塊中的脂肪細(xì)胞密度相似,無明顯差異。(2)免疫組化染色結(jié)果顯示,A組移植塊中的細(xì)胞不表達(dá)GFP, B組和C組移植塊中的細(xì)胞大部分表達(dá)GFP,提示B組和C組移植塊中的大部分細(xì)胞來源于注射的Hem-MSCs。(3)熒光免疫組化染色顯示C組移植塊中PerilipinA和GFP共表達(dá)于脂肪細(xì)胞,提示這些脂肪細(xì)胞是由Hem-MSCs分化而來。(4)實時定量PCR顯示,移植后2周,C組的PPAR-gamma、LPL、ADD1、CEBPA基因表達(dá)水平高于A組和B組,A組和B組之間無明顯差異。移植后4周,C組的PPAR-gamma、LPL、ADD1、CEBPA的表達(dá)水平低于該組移植后2周的表達(dá)水平,整體呈下降趨勢。但A組和B組的PPAR-gamma、 LPL、ADD1、CEBPA的表達(dá)水平高于該兩組第二周時的表達(dá)水平,整體呈上升趨勢。移植后8周,A組的PPAR-gamma、ADD1、CEBPA的表達(dá)水平均低于該組移植后4周的表達(dá)水平, LPL的表達(dá)水平與移植后4周相似,結(jié)果提示A組各基因的表達(dá)整體上呈先上升后下降的趨勢。因B組和C組裸鼠在移植后不足8周即死亡,故該兩組缺乏移植后8周的基因檢測數(shù)據(jù)。結(jié)論過表達(dá)PPAR-gamma基因能增強、加速Hem-MSCs的體內(nèi)成脂肪分化過程,伴隨成脂肪分化相關(guān)基因表達(dá)的變化。本研究結(jié)果為經(jīng)PPAR-gamma信號通路對嬰幼兒血管瘤進(jìn)行靶向治療提供了實驗依據(jù)
【關(guān)鍵詞】：嬰幼兒血管瘤 Hem-MSCs PPAR-gamma信號通路 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R732.2
【目錄】：

• 縮略詞表7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-16
• 參考文獻(xiàn)13-16
• 材料與方法16-35
• 1. 材料16-22
• 2. 實驗方法22-34
• 3. 統(tǒng)計學(xué)分析34-35
• 實驗結(jié)果35-49
• 1. 過表達(dá)慢病毒成功構(gòu)建所得病毒滴度檢測35-36
• 2. 過表達(dá)慢病毒上調(diào)Hem-MSCs的PPAR-gamma基因的表達(dá)36-38
• 3. 上調(diào)PPAR-gamm基因表達(dá)對Hem-MSCs體內(nèi)成脂肪分化的影響38-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 綜述55-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-69

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本文編號：514101