本文關(guān)鍵詞：溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A對肺癌細胞抑制作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近些年來，肺癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈持續(xù)上升的趨勢，甚至已經(jīng)成為第一高發(fā)惡性腫瘤。面對傳統(tǒng)肺癌的治療方法，手術(shù)、放療和化療，已經(jīng)不能有效的控制全球肺癌蔓延的趨勢。隨著分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)和病毒學(xué)的發(fā)展，基因治療已成為癌癥治療的另一有利武器，其中腺病毒載體癌癥治療表現(xiàn)出了巨大的優(yōu)勢，，且腺病毒載體聯(lián)合化療在癌癥臨床上受到了廣泛關(guān)注。 目前，全世界僅有兩種腫瘤基因治療藥物，一種為上海三維生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的重組人5型腺病毒（安柯瑞），其刪除抗凋亡基因E1B和促進病毒粒子釋放的基因E3，而發(fā)揮抗腫瘤作用；另一種為深圳市賽百諾基因技術(shù)有限公司生產(chǎn)的重組人p53腺病毒（今又生），是以5型腺病毒為載體，攜帶p53抑癌基因發(fā)揮抗腫瘤作用。 腺病毒載體對基因轉(zhuǎn)導(dǎo)是一種有效的工具，因此成為最常用的腺病毒載體。但安全性和有效性是評價溶瘤腺病毒的重要指標(biāo)。第一代腺病毒載體由于病毒衣殼蛋白影響而會誘發(fā)機體明顯的免疫反應(yīng)，以及刪除復(fù)制必需基因E1A，而影響病毒復(fù)制，這樣便不利于腺病毒的持續(xù)作用。本課題組基于RAPAD.I系統(tǒng)，由巨細胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）啟動子驅(qū)動特異性抑癌基因Apoptin，人端粒末端轉(zhuǎn)移酶（hTERT）啟動子驅(qū)動腺病毒復(fù)制必需基因E1A，從而構(gòu)建了同時具有腫瘤特異性復(fù)制和腫瘤特異性殺傷能力的雙特異性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A（ATV），并構(gòu)建了對照病毒Ad-ΔE1B55K-ΔE3（rAd5）、Ad-p53和Ad-CMV-EGFP（Ad-EGFP）。 MTS法用于檢測重組腺病毒單獨使用或聯(lián)合順鉑對A549細胞生長抑制作用，結(jié)果表明ATV單獨或聯(lián)合順鉑對A549細胞殺傷抑制作用均具有一定的劑效關(guān)系和時效關(guān)系，ATV抑制率明顯高于rAd5和Ad-p53，ATV聯(lián)合組顯著強于rAd5聯(lián)合組和Ad-p53聯(lián)合組，且順鉑可增強ATV對A549細胞的抑制作用；AO/EB染色、DAPI染色和Annexin V檢測用于探討重組腺病毒對A549細胞的抑制方式，結(jié)果表明ATV和Ad-p53主要是通過誘導(dǎo)A549細胞凋亡而達到抑制目的，而rAd5則主要是通過細胞溶脹作用致使細胞死亡；Transwell遷移實驗和Transwell侵襲實驗用于探討A549細胞因ATV或ATV聯(lián)合順鉑的抑制作用而對其遷移和侵襲能力的影響，結(jié)果表明ATV感染的A549細胞的遷移與侵襲能力受到顯著影響，并具有一定的劑效和時效關(guān)系，ATV對A549細胞的影響要大于其他對照病毒，且ATV聯(lián)合組要優(yōu)于ATV單獨組。 建立A549皮下移植瘤裸鼠模型，通過測定腫瘤生長趨勢和平均生存期指標(biāo)，旨在探討溶瘤腺病毒ATV及其聯(lián)合順鉑對肺癌的體內(nèi)抑制效果，結(jié)果表明，相比ATV單獨治療，ATV聯(lián)合低劑量順鉑可以有效抑制移植瘤的生長及延長裸鼠平均生存期。各項實驗結(jié)果揭示溶瘤腺病毒ATV及ATV聯(lián)合順鉑在治療肺癌方面具有潛在研究價值，及為臨床治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：基因治療 溶瘤腺病毒 人端粒末端轉(zhuǎn)移酶 凋亡素基因 化療
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞10-11
• 緒論11-13
• 第一篇 文獻綜述13-29
• 1 溶瘤腺病毒及化療的研究進展13-20
• 1.1 腺病毒載體概述13-14
• 1.2 溶瘤腺病毒當(dāng)前情況14-15
• 1.3 溶瘤腺病毒在臨床中的限制性15-16
• 1.4 提高癌癥細胞感染有效性的方法16-18
• 1.5 提高溶瘤腺病毒復(fù)制特異性的策略18-20
• 2 溶瘤腺病毒與化療聯(lián)合在抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用20-29
• 2.1 化療概述20-21
• 2.2 溶瘤腺病毒與標(biāo)準(zhǔn)化療藥聯(lián)合21-24
• 2.3 溶瘤腺病毒與靶向化療藥聯(lián)合24-27
• 2.4 展望27-29
• 第二篇 研究內(nèi)容29-79
• 第一章 重組腺病毒對肺癌細胞 A549 的體外抑制研究29-53
• 1.1 材料與方法29-35
• 1.2 結(jié)果35-49
• 1.3 討論49-52
• 1.4 小結(jié)52-53
• 第二章 重組腺病毒對肺癌細胞 A549 抑制而對遷移和侵襲能力的影響53-69
• 2.1 材料與方法53-56
• 2.2 結(jié)果56-64
• 2.3 討論64-67
• 2.4 小結(jié)67-69
• 第三章 重組腺病毒對肺癌細胞 A549 的體內(nèi)抑制研究69-79
• 3.1 材料與方法69-71
• 3.2 結(jié)果71-76
• 3.3 討論76-78
• 3.4 小結(jié)78-79
• 結(jié)論79-80
• 參考文獻80-93
• 導(dǎo)師與作者介紹93-94
• 攻讀學(xué)位期間所取得的科研成果94-95
• 致謝95

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 高衛(wèi)棟;王紅兵;吳澤志;楊本艷姿;林雨;;腫瘤細胞遷移特性及細胞遷移能力表征[J];細胞生物學(xué)雜志;2008年04期

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  本文關(guān)鍵詞：溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A對肺癌細胞抑制作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：501860