槲皮素對(duì)裸鼠肝癌切除術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制
本文關(guān)鍵詞:槲皮素對(duì)裸鼠肝癌切除術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:[目的]通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究槲皮素能否抑制裸鼠肝癌切除術(shù)后的腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,并研究其抑制復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移可能的分子機(jī)制。[方法](一) HCCLM6細(xì)胞培養(yǎng):HCCLM6細(xì)胞用含15%新生胎牛血清的高糖DMEM完全培養(yǎng)于37℃、5%CO2、混合氣體的孵箱(95%飽和濕度)內(nèi)培養(yǎng)。每2天換液一次。細(xì)胞單層貼壁生長(zhǎng),待長(zhǎng)滿瓶底時(shí),用胰蛋白消化液消化成單個(gè)細(xì)胞,傳代培養(yǎng)。(二)模擬人肝癌切除術(shù)后腫瘤高轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)裸鼠模型的建立:取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的HCCLM6細(xì)胞接種于裸鼠右側(cè)腋下,約10d成瘤;30d切除腋下腫瘤制成1mm3大小,開腹原位接種于裸鼠左肝;接種后10d開腹在裸鼠左肝根部結(jié)扎后切除左肝。(三)造模后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為對(duì)照組(灌胃生理鹽水)、槲皮素組(灌胃槲皮素75mg/kg · d)兩組,每周連續(xù)給藥5天后停藥2天,給藥30d。(四)給藥30d后脫頸處死裸鼠,觀察各組裸鼠復(fù)發(fā)灶體積、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移數(shù)目,肝臟復(fù)發(fā)腫瘤切片HE染色觀察腫瘤細(xì)胞形態(tài)。(五)取復(fù)發(fā)腫瘤組織做western-blot檢測(cè)P65、MMP-2、E-Cadherin蛋白的表達(dá).[結(jié)果]給藥30天后處死所有裸鼠,槲皮素組和生理鹽水組裸鼠肝臟腫瘤復(fù)發(fā)率100%。對(duì)照組和槲皮素組復(fù)發(fā)腫瘤的體積分別是49.75mm3和25.49mm3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明槲皮素能夠抑制裸鼠肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)。對(duì)裸鼠肝臟進(jìn)行逐層切片,計(jì)數(shù)和測(cè)量肝內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移灶,對(duì)照組5只裸鼠肝內(nèi)轉(zhuǎn)移率100%,槲皮素組5只裸鼠有4只肝內(nèi)有轉(zhuǎn)移灶,對(duì)照組肝內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移數(shù)為2.20±0.84,而槲皮素組肝內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移數(shù)為1.00±0.71,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明槲皮素能夠減少裸鼠肝癌切除術(shù)后腫瘤的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移數(shù)目。采用western blot檢測(cè)各組裸鼠肝臟復(fù)發(fā)腫瘤P65、MMP-2、E-Cadherin蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示:槲皮素組和對(duì)照組裸鼠肝臟復(fù)發(fā)腫瘤灶表達(dá)的P65蛋白灰度值分別是156.26±8.60和170.07±6.61,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),槲皮素組P65蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯降低,表明槲皮素能夠抑制裸鼠肝癌組織P65蛋白的表達(dá)。對(duì)照組和槲皮素組裸鼠肝臟復(fù)發(fā)腫瘤表達(dá)的MMP-2蛋白灰度值分別是169.21±5.32和158.17±4.80,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組裸鼠肝臟腫瘤組織MMP-2蛋白表達(dá)有差異,槲皮素組表達(dá)較對(duì)照組低。對(duì)照組和槲皮素組裸鼠肝臟復(fù)發(fā)腫瘤表達(dá)的E-Cadherin蛋白灰度值分別是136.24±3.03和144.70±5.02,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組裸鼠肝臟復(fù)發(fā)腫瘤組織E-Cadherin的表達(dá)有差異,槲皮素組表達(dá)較對(duì)照組高。結(jié)果表明:槲皮素能夠上調(diào)E-Cadherin的表達(dá)。[結(jié)論]槲皮素能夠抑制裸鼠肝癌切除術(shù)后肝臟復(fù)發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)和減少肝內(nèi)腫瘤播散數(shù)目;槲皮素能夠抑制P65蛋白的表達(dá),上調(diào)E-Cadherin的表達(dá),下調(diào)MMP-2蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】:槲皮素 肝癌切除術(shù) 復(fù)發(fā) 轉(zhuǎn)移 P65
【學(xué)位授予單位】:昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R735.7
【目錄】:
- 縮略詞表5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-10
- 前言10-13
- 材料與方法13-25
- 結(jié)果25-32
- 討論32-37
- 結(jié)論37-38
- 參考文獻(xiàn)38-41
- 綜述41-49
- 參考文獻(xiàn)46-49
- 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果49-50
- 致謝50
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本文編號(hào):501360
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