本文關鍵詞：NCOA5在結直腸癌中的表達、功能及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測結直腸癌標本中NCOA5的表達,分析NCOA5表達與結直腸癌患者臨床病理特征之間的關系;在結直腸癌細胞系SW480和SW620中沉默及過表達NCOA5,研究NCOA5對結直腸癌細胞增殖、侵襲遷移、細胞周期的影響及其相關機制。方法:收集臨床結直腸癌組織標本,免疫組化及Western blot檢測NCOA5的表達。篩選結腸癌細胞株,得到NCOA5高表達細胞株SW620及NCOA5低表達細胞株SW480;構建三條特異性的干擾NCOA5表達序列及一條隨機序列的慢病毒表達載體感染SW620細胞株;Western blot、CCK-8法、流式細胞、細胞劃痕及Transwell實驗分別檢測干擾后NCOA5的表達、細胞生長增殖、細胞周期分布、細胞遷移的影響;Western blot檢測PI3K/AKT/MMP9信號通路和PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信號通路相關蛋白的表達。同時設計構建過表達NCOA5慢病毒載體感染SW480細胞株,Western blot檢測PI3K/AKT/MMP9信號通路和PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信號通路相關蛋白的表達。Western blot檢測PI3K抑制劑LY294002作用于過表達NCOA5的SW480細胞株后下游相關信號蛋白的表達。結果:分析結直腸癌標本的免疫組化及臨床資料結果顯示,NCOA5在癌組織中高表達(78.6%),NCOA5陽性表達率升高與腫瘤大小(P0.001)、區(qū)域淋巴結轉移(P=0.005)、腫瘤TMN分期(P=0.018)有關;Western Blot顯示結直腸癌組織中NCOA5表達較癌旁組織顯著增高,表達率約為75%。體外成功構建慢病毒干擾載體;感染結直腸癌細胞株SW620后,Western Blot結果顯示NCOA5表達下調,CCK-8法結果表明沉默NCOA5后細胞增殖能力下降(P0.05),流式細胞儀結果顯示干擾細胞G0/G1期比例增加,細胞劃痕及Transwell實驗表明沉默NCOA5后細胞遷移能力下降,P-AKT、MMP9和Cyclin D1表達下降,AKT表達基本不變,P27表達升高。慢病毒過表達載體感染結直腸癌細胞株SW480后,P-AKT、MMP9和Cyclin D1表達升高,AKT表達基本不變,P27表達下降。LY294002作用于過表達NCOA5的SW480細胞株后P-AKT、MMP9和Cyclin D1表達下降,AKT表達基本不變,P27表達升高,與干擾結果一致。結論:1.發(fā)現(xiàn)NCOA5在結直腸癌組織中存在高表達,其表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期相關,具有作為腫瘤標志物的潛在價值;2.下調NCOA5表達后,結直腸癌細胞株SW620增殖能力顯著下降的,細胞周期被阻滯在G0/G1期;3.下調NCOA5表達后,結直腸癌細胞株SW620的侵襲、轉移能力顯著下降;4.發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信號通路在NCOA5誘導的結直腸癌中細胞周期阻滯發(fā)揮著重要的作用;5.發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT/MMP9信號通路在NCOA5誘導的結直腸癌侵襲轉移中發(fā)揮著重要的作用。
【關鍵詞】：結直腸癌 NCOA5 免疫組化 AKT
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 NCOA5 在結直腸癌組織中的表達情況以及其與患者病理特征之間的關系的研究11-19
• 一、材料與方法11-14
• 二、結果14-18
• 三、討論18-19
• 第二部分 NCOA5 對結直腸癌細胞的增殖、侵襲、轉移等方面的影響19-32
• 一、材料與方法19-25
• 二、結果25-30
• 三、討論30-32
• 第三部分 NCOA5 參與信號通路初步研究32-39
• 一、材料與方法32-33
• 二、結果33-37
• 三、討論37-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-42
• 綜述42-49
• 參考文獻47-49
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文49-50
• 致謝50-51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前1條

1 孫文靖;馬琳琳;韓菲菲;任聰;傅松濱;傅松濱;;小鼠H_2B-GFP真核表達載體的構建與鑒定[J];國際遺傳學雜志;2006年01期

  本文關鍵詞：NCOA5在結直腸癌中的表達、功能及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：487679