本文關(guān)鍵詞：NCOA5在結(jié)直腸癌中的表達、功能及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測結(jié)直腸癌標(biāo)本中NCOA5的表達,分析NCOA5表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系;在結(jié)直腸癌細胞系SW480和SW620中沉默及過表達NCOA5,研究NCOA5對結(jié)直腸癌細胞增殖、侵襲遷移、細胞周期的影響及其相關(guān)機制。方法:收集臨床結(jié)直腸癌組織標(biāo)本,免疫組化及Western blot檢測NCOA5的表達。篩選結(jié)腸癌細胞株,得到NCOA5高表達細胞株SW620及NCOA5低表達細胞株SW480;構(gòu)建三條特異性的干擾NCOA5表達序列及一條隨機序列的慢病毒表達載體感染SW620細胞株;Western blot、CCK-8法、流式細胞、細胞劃痕及Transwell實驗分別檢測干擾后NCOA5的表達、細胞生長增殖、細胞周期分布、細胞遷移的影響;Western blot檢測PI3K/AKT/MMP9信號通路和PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信號通路相關(guān)蛋白的表達。同時設(shè)計構(gòu)建過表達NCOA5慢病毒載體感染SW480細胞株,Western blot檢測PI3K/AKT/MMP9信號通路和PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信號通路相關(guān)蛋白的表達。Western blot檢測PI3K抑制劑LY294002作用于過表達NCOA5的SW480細胞株后下游相關(guān)信號蛋白的表達。結(jié)果:分析結(jié)直腸癌標(biāo)本的免疫組化及臨床資料結(jié)果顯示,NCOA5在癌組織中高表達(78.6%),NCOA5陽性表達率升高與腫瘤大小(P0.001)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.005)、腫瘤TMN分期(P=0.018)有關(guān);Western Blot顯示結(jié)直腸癌組織中NCOA5表達較癌旁組織顯著增高,表達率約為75%。體外成功構(gòu)建慢病毒干擾載體;感染結(jié)直腸癌細胞株SW620后,Western Blot結(jié)果顯示NCOA5表達下調(diào),CCK-8法結(jié)果表明沉默NCOA5后細胞增殖能力下降(P0.05),流式細胞儀結(jié)果顯示干擾細胞G0/G1期比例增加,細胞劃痕及Transwell實驗表明沉默NCOA5后細胞遷移能力下降,P-AKT、MMP9和Cyclin D1表達下降,AKT表達基本不變,P27表達升高。慢病毒過表達載體感染結(jié)直腸癌細胞株SW480后,P-AKT、MMP9和Cyclin D1表達升高,AKT表達基本不變,P27表達下降。LY294002作用于過表達NCOA5的SW480細胞株后P-AKT、MMP9和Cyclin D1表達下降,AKT表達基本不變,P27表達升高,與干擾結(jié)果一致。結(jié)論:1.發(fā)現(xiàn)NCOA5在結(jié)直腸癌組織中存在高表達,其表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān),具有作為腫瘤標(biāo)志物的潛在價值;2.下調(diào)NCOA5表達后,結(jié)直腸癌細胞株SW620增殖能力顯著下降的,細胞周期被阻滯在G0/G1期;3.下調(diào)NCOA5表達后,結(jié)直腸癌細胞株SW620的侵襲、轉(zhuǎn)移能力顯著下降;4.發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信號通路在NCOA5誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌中細胞周期阻滯發(fā)揮著重要的作用;5.發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT/MMP9信號通路在NCOA5誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 NCOA5 免疫組化 AKT
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 NCOA5 在結(jié)直腸癌組織中的表達情況以及其與患者病理特征之間的關(guān)系的研究11-19
• 一、材料與方法11-14
• 二、結(jié)果14-18
• 三、討論18-19
• 第二部分 NCOA5 對結(jié)直腸癌細胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面的影響19-32
• 一、材料與方法19-25
• 二、結(jié)果25-30
• 三、討論30-32
• 第三部分 NCOA5 參與信號通路初步研究32-39
• 一、材料與方法32-33
• 二、結(jié)果33-37
• 三、討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-42
• 綜述42-49
• 參考文獻47-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文49-50
• 致謝50-51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫文靖;馬琳琳;韓菲菲;任聰;傅松濱;傅松濱;;小鼠H_2B-GFP真核表達載體的構(gòu)建與鑒定[J];國際遺傳學(xué)雜志;2006年01期

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本文編號：487679