本文關(guān)鍵詞：氯化兩面針堿對(duì)垂體腺瘤GH3細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：垂體腺瘤是顱內(nèi)常見的良性腫瘤,發(fā)病率約占顱內(nèi)腫瘤的10%,且近年呈增多趨勢(shì)。目前外科手術(shù)治療是垂體腺瘤最常見的治療方式,但仍有部分腫瘤類型如巨大腺瘤及侵襲性垂體腺瘤在臨床上無法全切。當(dāng)前治療垂體腺瘤的藥物品種少且不良反應(yīng)較多,垂體腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)率較高,因此尋找高效、安全且毒副反應(yīng)小的垂體腺瘤治療藥物當(dāng)前是研究熱點(diǎn)。氯化兩面針堿是從中藥植物兩面針根中提純的一種生物堿,前期研究表明,氯化兩面針堿對(duì)多種腫瘤如肝癌、乳腺癌、腎癌等在體內(nèi)、外均能夠發(fā)揮抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用。目前氯化兩面針堿在垂體腺瘤中的作用及機(jī)制的研究較少。研究目的：探討氯化兩面針堿對(duì)垂體腺瘤GH3細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期及凋亡的影響并分析其具體機(jī)制,研究氯化兩面針堿對(duì)垂體腺瘤GH3細(xì)胞通路的影響,進(jìn)而探討氯化兩面針堿作為垂體腺瘤治療藥物的可能性。研究方法：1.細(xì)胞分組：依照氯化兩面針堿不同的給藥濃度將GH3細(xì)胞分為0μmol/l組、1μmol/l組、2μmol/l組、4μmol/l組和8μmol/l組,其中0μmol/l組為空白對(duì)照組。2.細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)：氯化兩面針堿處理后CCK-8法檢測(cè)各組GH3細(xì)胞不同時(shí)間的存活率。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率：氯化兩面針堿處理細(xì)胞24h后, Annexin V/PI凋亡試劑盒染色后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組GH3細(xì)胞凋亡率。4.流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析：氯化兩面針堿處理細(xì)胞12 h后,采用PI染色法用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析。5.RT-PCR法檢測(cè)目的基因mRNA表達(dá)：不同濃度氯化兩面針堿處理的細(xì)胞使用TRIzol法提取總RNA, Real-time RT-PCR法檢測(cè)不同處理后凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2和細(xì)胞周期相關(guān)基因Cyclin B1、CDK1、p21和p27的mRNA表達(dá)水平的改變。6.Western bloting法檢測(cè)目的蛋白表達(dá)：不同濃度氯化兩面針堿處理的細(xì)胞使用Western及IP細(xì)胞裂解液裂解,用BCA試劑盒測(cè)蛋白濃度。全細(xì)胞裂解液使用SDS-PAGE或Tricine-SDS-PAGE膠進(jìn)行凝膠電泳,免疫印跡檢測(cè)Bax、Bcl-2、 Cyclin B1、CDK1蛋白以及AKT和ERK信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件,所得數(shù)據(jù)用x±s來表示,組間差異采用t檢驗(yàn)。p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果：1.氯化兩面針堿對(duì)GH3細(xì)胞增殖的影響氯化兩面針堿對(duì)GH3細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,且與劑量、時(shí)間呈正相關(guān)。2.氯化兩面針堿對(duì)GH3細(xì)胞凋亡的影響 氯化兩面針堿明顯增加了GH3細(xì)胞的凋亡率,且與劑量正相關(guān)；氯化兩面針堿處理后GH3細(xì)胞促凋亡分子Bax的mRNA表達(dá)水平明顯增加,而抗凋亡分子Bcl-2的mRNA表達(dá)水平明顯降低,Bax/Bcl-2的比值明顯增加。3.氯化兩面針堿對(duì)GH3細(xì)胞周期的影響 氯化兩面針堿使GH3細(xì)胞G2/M期比例增加；氯化兩面針堿處理后,GH3細(xì)胞Cyclin B1和CDK1的表達(dá)明顯降低,p21和p27表達(dá)明顯增加。4.氯化兩面針堿對(duì)GH3細(xì)胞通路激活的影響氯化兩面針堿可降低GH3細(xì)胞AKT和ERK的磷酸化水平,抑制AKT和ERK信號(hào)通路的激活。結(jié)論：1.氯化兩面針堿可抑制垂體腺瘤GH3細(xì)胞的增殖及促進(jìn)GH3細(xì)胞的凋亡。2.氯化兩面針堿對(duì)GH3細(xì)胞增殖及凋亡的作用是通過影響細(xì)胞周期和抑制AKT和ERK信號(hào)通路的激活導(dǎo)致的。3.氯化兩面針堿可作為治療垂體腺瘤的潛在藥物,進(jìn)一步研究可成為治療垂體腺瘤的有效治療方案。
【關(guān)鍵詞】：氯化兩面針堿 垂體腺瘤 凋亡 細(xì)胞周期阻滯 絲氨酸/蘇氨酸激酶 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R736.4
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 符號(hào)說明12-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-31
• 結(jié)果31-33
• 討論33-39
• 結(jié)論39-40
• 附圖40-43
• 附表43-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49-50
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 安寧;朱文;;人參皂苷Rg3抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2008年04期

2 郝文慧;趙文文;陳修平;;丹參酮類抗腫瘤作用與機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2014年08期

  本文關(guān)鍵詞：氯化兩面針堿對(duì)垂體腺瘤GH3細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：482530