本文關(guān)鍵詞：抑制脂肪酸合酶誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的脂肪酸的代謝是細(xì)胞生命活動(dòng)中的重要一環(huán),對(duì)于癌細(xì)胞來(lái)說(shuō)尤為重要,因?yàn)椴煌ＩL(zhǎng)的癌細(xì)胞需要大量脂肪酸來(lái)組成它們的膜系統(tǒng)。脂肪酸合酶(FAS,fatty acid synthase)是脂肪酸合成過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵酶,幾乎所有癌細(xì)胞都高表達(dá)FAS,而相比之下在絕大多數(shù)正常組織的細(xì)胞中FAS則難以發(fā)現(xiàn),和臨床有著密切聯(lián)系。我們的前期研究表明乳腺癌細(xì)胞中存在著異常的脂肪酸合成---氧化循環(huán)代謝平衡,而且這個(gè)平衡對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)是必須的。本課題以乳腺癌細(xì)胞系為基本模型,研究抑制脂肪酸合酶誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞死亡的分子機(jī)制,從而揭示異常脂肪酸代謝對(duì)于腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程的意義。方法1.利用Western blot技術(shù)檢測(cè)脂肪酸合成關(guān)鍵酶(FAS)在不同乳腺癌細(xì)胞系,不同組癌旁和癌組織中的表達(dá)水平。2.利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法記錄不同細(xì)胞系增殖情況,判斷乳腺癌細(xì)胞系內(nèi)脂肪酸代謝是否與細(xì)胞增殖速度的快慢有關(guān)系。3.脂肪酸代謝關(guān)鍵酶抑制劑(Cerulenin、Orlistat)以及sh RNA處理乳腺癌細(xì)胞抑制脂肪酸的合成,檢測(cè)對(duì)其影響。4.用FAS特異性抑制劑Cerulenin處理,DCFH-DA探針、DHE探針測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平。5.使用抗氧化劑NAC、Trolox、BHA以及過(guò)氧化氫氧化酶抑制劑DPI是否能保護(hù)抑制FAS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。6.細(xì)胞流式檢測(cè)線粒體膜勢(shì)能變化以及細(xì)胞色素C的釋放。7.過(guò)表達(dá)Bcl-2家族基因中的Bcl-2、Bclxl能否保護(hù)抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)的凋亡。結(jié)果1.Western blot技術(shù)檢測(cè)顯示乳腺癌組織,乳腺癌細(xì)胞系中高表達(dá)FAS。2.乳腺癌細(xì)胞中脂肪酸合成酶的表達(dá)和細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)正相關(guān)性。3.使用脂肪酸合成酶抑制劑能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),甚至殺死腫瘤細(xì)胞。4.Knock down FAS抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)化。5.抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)氧化應(yīng)激引起氧化還原代謝紊亂。6.抗氧化劑NAC能保護(hù)抑制脂肪酸合成引起的細(xì)胞凋亡;Trolox、BHA以及DPI不能保護(hù)抑制FAS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。7.抑制脂肪酸合成破壞線粒體膜勢(shì)能,釋放Cytochrome C誘導(dǎo)凋亡。8.Bcl-2家族能維持線粒體膜的穩(wěn)定性從而保護(hù)抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。結(jié)論腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在異常的脂肪酸代謝,脂肪酸合成代謝除了為快速增殖的腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和能量外,還應(yīng)具備其他的生物學(xué)功能。結(jié)果證實(shí),脂肪酸代謝平衡是對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)所必需的。同時(shí)發(fā)現(xiàn)脂肪酸合成抑制劑Cerulenin/Orlistat對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷機(jī)制與氧化還原狀態(tài)失衡密切相關(guān),NADPH/NADP+升高破壞了氧化還原平衡,進(jìn)而影響了線粒體膜勢(shì)能的改變,使其釋放細(xì)胞色素C,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。證明了脂肪酸異常代謝對(duì)于細(xì)胞維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)具有極其重要的意義。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌細(xì)胞 脂肪酸合酶 抑制劑 NADPH 氧化還原
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 材料和方法15-36
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.2 各實(shí)驗(yàn)所需試劑及試劑配制16-22
• 1.3 儀器設(shè)備22-23
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法及步驟23-36
• 1.4.1 質(zhì)粒構(gòu)建23-26
• 1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 1.4.3 慢病毒制備及感染目的細(xì)胞27-28
• 1.4.4 Western Blot28-31
• 1.4.5 TRizol法提取總RNA31-32
• 1.4.6 RT-PCR反應(yīng)步驟32-33
• 1.4.7 DCFH-DA探針測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平33-34
• 1.4.8 線粒體膜勢(shì)能檢測(cè)方法（JC-1）及步驟34
• 1.4.9 二維克隆形成實(shí)驗(yàn)34-35
• 1.4.10 Soft Agrose克隆形成實(shí)驗(yàn)步驟35-36
• 結(jié)果36-50
• 2.1 乳腺癌細(xì)胞中脂肪酸合成酶的表達(dá)與細(xì)胞生長(zhǎng)速度并無(wú)正相關(guān)性36-37
• 2.2 抑制脂肪酸的合成能抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)凋亡37-41
• 2.2.1 抑制劑抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡37-38
• 2.2.2 降表達(dá)FAS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，影響乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)化能力38-41
• 2.3 抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)氧化還原代謝紊亂41-47
• 2.3.1 抑制FAS誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞死亡是氧化還原平衡被破壞41-43
• 2.3.2 控制氧化還原代謝能保護(hù)抑制脂肪酸合成導(dǎo)致的乳腺癌細(xì)胞死亡43-47
• 2.4 抑制脂肪酸合成破壞線粒體膜勢(shì)能，釋放CytochromeC47-50
• 2.4.1 抑制脂肪酸合成破壞線粒體膜勢(shì)能，，釋放CytochromeC誘導(dǎo)凋亡47-48
• 2.4.2 Bcl2家族Bcl-2,Bcl-xl能保護(hù)抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)的凋亡48-50
• 討論50-52
• 結(jié)論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明58-59
• 綜述59-71
• 綜述參考文獻(xiàn)65-71
• 致謝71-72
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷72

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本文編號(hào)：475108