本文關(guān)鍵詞：人食管鱗癌癌前病變基因及相關(guān)蛋白表達(dá)變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：食管癌是由食管的鱗狀上皮或腺狀上皮異常增生發(fā)展而來。食管癌的發(fā)生由多因素、多基因共同參與經(jīng)過多個(gè)階段(輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生以及浸潤(rùn)癌)慢慢演化而來。在病理上食管癌主要分為食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)和食管腺癌,而我國(guó)食管鱗癌患者的發(fā)病率和死亡率居世界首位。目前隨著分子生物學(xué)發(fā)展,食管鱗癌發(fā)生的分子機(jī)制備受關(guān)注。在本文第一部分的研究中,我們應(yīng)用表達(dá)譜芯片技術(shù)對(duì)10例ESCC組織、7例癌前病變組織及29例切緣及遠(yuǎn)端正常組織的基因表達(dá)譜進(jìn)行分析,得到ESCC及癌前病變組織中差異性表達(dá)基因333個(gè),從中篩選出候選基因9個(gè),并對(duì)其中的極光激酶基因(Aurora kinases A, Aurora-A)進(jìn)行研究。Aurora-A是一個(gè)潛在的癌基因,通過編碼一種在進(jìn)化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,來參與調(diào)控細(xì)胞的有絲分裂過程和維持染色體組的完整性。我室于2004年首次發(fā)現(xiàn)了Aurora-A與ESCC相關(guān),并做了大量地研究工作,但Aurora-A在ESCC癌前病變階段的表達(dá)情況和作用方式尚未明確。首先,我們應(yīng)用Real-time PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了上述表達(dá)譜芯片結(jié)果,Aurora-A基因在6例癌前病變組織和3例ESCC組織中的表達(dá)程度高于其自身遠(yuǎn)端正常組織,高表達(dá)的比率分別為75.0%(6/8)和60.0%(3/5)。與人食管上皮永生化細(xì)胞株相比,Aurora-A在ESCC細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯升高。說明Aurora-A在ESCC及其癌前病變中存在高表達(dá)現(xiàn)象。然后,我們應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組織化學(xué)法(S-P法)檢測(cè)Aurora-A在9例重度不典型增生組織和122例ESCC組織以及它們的癌旁癌前病變組織中的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Aurora-A在正常食管粘膜上皮組織、輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生以及ESCC組織中的陽性率分別為17.2%、27.6%、50.0%、77.9%和84.3%,其表達(dá)率隨病變嚴(yán)重程度而逐漸增加。Aurora-A蛋白表達(dá)水平與ESCC癌前病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(r=0.548,P0.001)。最后,通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)外源性過表達(dá)Aurora-A對(duì)人食管上皮永生化細(xì)胞的增殖能力以及遷移能力均有促進(jìn)作用。所以我們的研究表明,Aurora-A在ESCC及其癌前病變中存在高表達(dá),可能參與食管癌的發(fā)生與發(fā)展,并且可能為ESCC的早期診斷及治療提供新的方向。本文第二部分研究ESCC及其癌前病變組織中Ninein樣蛋白(ninein like protein,Nlp)的表達(dá)情況。Nlp是我室通過酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)篩選出來的能夠自行定位克隆的中心體蛋白,在多種腫瘤中存在表達(dá),多項(xiàng)前期研究結(jié)果提示Nlp是一個(gè)潛在的癌基因。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)法聯(lián)合組織微陣列,檢測(cè)Nlp在10例重度不典型增生組織和133例ESCC組織以及它們的癌旁癌前病變組織中的表達(dá)情況,Nlp在正常食管粘膜上皮組織、輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生及ESCC組織中的陽性率分別為11.0%、27.8%、50.0%、80.0%和94.1%,其表達(dá)率隨病變嚴(yán)重程度而逐漸增加。Nlp蛋白表達(dá)水平與ESCC癌前病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(r=0.526,P0.001)。說明Nlp基因可能參與ESCC及其癌前病變的發(fā)生與發(fā)展。另外,體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)外源性過表達(dá)Nlp會(huì)促進(jìn)人食管上皮永生化細(xì)胞的遷移能力。所以,第二部分研究明確表明Nlp在ESCC及其癌前病變中存在高表達(dá),并且可能在ESCC癌前病變發(fā)生和發(fā)展中起一定的作用。
【關(guān)鍵詞】：表達(dá)譜芯片 食管癌 癌前病變 Aurora-A Nlp
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞7-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一部分12-65
• 前言13-16
• 材料與方法16-41
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料16-24
• 1.1 組織樣本16
• 1.2 菌種、質(zhì)粒及細(xì)胞株16-17
• 1.3 主要試劑17-19
• 1.4 主要儀器設(shè)備19-21
• 1.5 實(shí)時(shí)定量PCR引物序列21
• 1.6 重要試劑的配制21-24
• 2. 研究方法24-41
• 2.1 細(xì)胞處理24-25
• 2.2 總RNA和總蛋白的提取25-27
• 2.3 RNA和蛋白濃度測(cè)定27-28
• 2.4 利用基因芯片檢測(cè)mRNA表達(dá)譜28-33
• 2.5 PCR33-34
• 2.6 Western Blotting34-35
• 2.7 感受態(tài)細(xì)胞的制備35-36
• 2.8 轉(zhuǎn)化36
• 2.9 質(zhì)粒提取及鑒定36-38
• 2.10 質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染38-39
• 2.11 Transwell實(shí)驗(yàn)39
• 2.12 免疫組織化學(xué)39-40
• 2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析40-41
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-59
• 1. ESCC組織中差異性表達(dá)的基因41-44
• 1.1 利用表達(dá)譜芯片檢測(cè)ESCC組織樣本中總mRNA表達(dá)譜42-43
• 1.2 ESCC組織mRNA表達(dá)的總體特征43
• 1.3 ESCC組織中差異性表達(dá)基因的功能分析43-44
• 2. 重度不典型增生組織中差異性表達(dá)的基因44-48
• 2.1 重度不典型增生組織mRNA表達(dá)的總體特征46-47
• 2.2 在正常組織、切緣組織及病變組織中逐漸高表達(dá)的基因47
• 2.3 在正常組織、切緣組織及病變組織中逐漸降低表達(dá)的基因47-48
• 3. 在ESCC及重度不典型增生組織中均出現(xiàn)差異性表達(dá)的基因48-49
• 4. 差異性表達(dá)的候選基因49-53
• 4.1 候選基因在臨床組織中mRNA水平的表達(dá)情況49-51
• 4.2 候選基因在各細(xì)胞株中的表達(dá)情況51-53
• 5. 候選基因Aurora-A53-59
• 5.1 候選基因Aurora-A在ESCC及其癌前病變組織中的表達(dá)特征54-57
• 5.2 過表達(dá)Aurora-A基因,人食管上皮永生化細(xì)胞體外增殖和遷移能力均上升57-59
• 討論59-63
• 展望63-64
• 小結(jié)64-65
• 第二部分65-82
• 前言66-68
• 材料與方法68-73
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料68-69
• 1.1 組織樣本68
• 1.2 菌種、質(zhì)粒及細(xì)胞株68
• 1.3 主要試劑68
• 1.4 主要儀器設(shè)備68-69
• 1.5 引物的合成與設(shè)計(jì)69
• 1.6 重要試劑的配制69
• 2. 研究方法69-73
• 2.1 對(duì)細(xì)胞的處理69
• 2.2 細(xì)胞總RNA和總蛋白的提取69-70
• 2.3 RNA和蛋白的濃度測(cè)定70
• 2.4 P C R70
• 2.5 Western Blotting70
• 2.6 Transwell實(shí)驗(yàn)70-71
• 2.7 免疫組織化學(xué)71-72
• 2.8 數(shù)據(jù)的獲取及分析72-73
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果73-78
• 1. Nlp基因在ESCC及其癌前病變組織中的表達(dá)特征73-75
• 1.1 Nlp的表達(dá)水平與食管上皮鱗狀細(xì)胞的病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)73-74
• 1.2 Nlp的表達(dá)水平與其他主要臨床特征無明顯相關(guān)性74-75
• 2. Nlp基因和Aurora-A基因的表達(dá)水平呈線性正相關(guān)75-76
• 3. Nlp基因mRNA在臨床組織中的表達(dá)情況76-77
• 4. 過表達(dá)Nlp基因,人食管上皮永生化細(xì)胞遷移能力顯著上升、體外增殖能力也存在上升現(xiàn)象77-78
• 討論78-81
• 小結(jié)81-82
• 參考文獻(xiàn)82-87
• 文獻(xiàn)綜述87-93
• 參考文獻(xiàn)90-93
• 致謝93-94
• 碩士在讀期間發(fā)表與待發(fā)表論文94-95
• 基金資助95-96

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：473645