本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：1)探討二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞增殖、克隆形成、凋亡、細(xì)胞周期的影響；2)探討二甲雙胍抑制HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞增殖的作用機(jī)制；3)探討二甲雙胍與靶向藥物曲妥珠單抗聯(lián)合的協(xié)調(diào)作用。方法：1)Western blot、qRT-PCR檢測(cè)常見(jiàn)胃癌細(xì)胞系中HER2蛋白表達(dá)水平；2)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中：加入不同濃度的二甲雙胍(10 mmol/L、20 mmol/L、30 mmol/L、40 mmol/L、50 mmol/L)分別干預(yù)24h、48 h、72 h,用等量DMEM培養(yǎng)基處理作為對(duì)照組,CCK-8檢測(cè)二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19增殖的影響；結(jié)晶紫染色法檢測(cè)二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19的克隆形成能力的影響；流式細(xì)胞儀檢測(cè)二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87.OE19的凋亡、周期阻滯情況；Western blot檢測(cè)二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19的HER2蛋白表達(dá)水平及PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響；3)CCK-8檢測(cè)曲妥珠單抗聯(lián)合二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19增殖的影響。結(jié)果：(一)二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的影響：1)Western blot、qRT-PCR檢測(cè)NCI-N87、OE19、AGS、MGC-803、BGC-823、MKN-45以及SGC-7901等七種常見(jiàn)的胃癌細(xì)胞株中HER2蛋白表達(dá)水平,HER2蛋白在NCI-N87、OE19細(xì)胞中呈高表達(dá),在MGC-803、MKN-45細(xì)胞中呈弱表達(dá),在AGS、BGC-823、SGC-7901細(xì)胞中不表達(dá)。2)CCK-8檢測(cè)10、20、30、40、50 mmol/L的二甲雙胍干預(yù)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N8724 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別為1.391±0.070、1.289±0.044、1.199±0.017、0.978±0.052、0.952±0.041,干預(yù)48 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是1.779±0.069、1.593±0.236、1.385±0.158、1.142±0.082、0.789±0.055,干預(yù)72 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是2.511±0.118、1.882±0.090、1.528±0.067、0.898±0.041、0.499±0.019,與空白組對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；CCK-8檢測(cè)相同濃度梯度的二甲雙胍干預(yù)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞OE1924 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別為1.824±0.027、1.738±0.010、1.443±0.025、1.237±0.041、0.932±0.011,干預(yù)48 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是2.359±0.041、2.010±0.033、1.462±0.029、1.]03±0.018、0.723±0.021,干預(yù)72 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是3.704±0.083、3.033±0.037、1.658±0.027、0.860±0.032、0.316±0.009,24 h時(shí)間點(diǎn)中10、20 mmol/L二甲雙胍處理組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余同時(shí)間點(diǎn)各藥物濃度組胃癌細(xì)胞的增殖下降率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)3)結(jié)晶紫染色法檢測(cè)10、20、30、40、50 mmol/L的二甲雙胍干預(yù)NCI-N87克隆形成能力,其中10、20、30 mmol/L組克隆形成率分別為72.500%±3.546%、25.000%±7.071%、6.500%±2.121%,與空白組相對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),40、50mmo1/L組未見(jiàn)明顯細(xì)胞克隆形成：結(jié)晶紫染色法檢測(cè)相同濃度梯度的二甲雙胍干預(yù)OE19克隆形成能力,其中10、20 mmol/L組克隆形成率分別為57.500%±10.607%、17.500%±3.536%,與空白組相對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),30、40、50 mmol/L組未見(jiàn)明顯細(xì)胞克隆形成。4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)10、20、30、40、50 mmol/L的二甲雙胍干預(yù)NCI-N8748 h后細(xì)胞凋亡率分別為5.450%±0.574%、9.250%±1.630%、9.850%±0.759%、17.900%±4.028%、20.400%±1.512%,與空白組對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)相同濃度梯度的二甲雙胍干預(yù)OE1948 h后細(xì)胞凋亡率分別為3.800%±0.572%、7.450%±1.303%、8.350%±1.439%、17.475%±5.773%、22.825%±4.971%,其20、30、40、50 mmol/L組與空白組相對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)]0、20、30、40、50 mmol/L的二甲雙胍干預(yù)NCI-N8748 h后G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)依次為67.833%±0.702%、72.667%±1.060%、73.633%±0.850%、77.267%±0.306%、81.867%±0.416%,其20、30、40、50 mmol/L組與空白組相對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)相同濃度梯度的二甲雙胍干預(yù)OE19 48 h后G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)依次為66.800%±0.458%、68.800%±0.400%、70.067%±1.102%、76.567%±0.709%、79.600%±0.900%,其20、30、40、50 mmol/L組與空白組相對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(二)二甲雙胍抑制HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞增殖的作用機(jī)制：Western blot檢測(cè)二甲雙胍能夠抑制HER2蛋白表達(dá),下調(diào)其下游P13K的表達(dá)水平降低Akt、mTOR的磷酸化,進(jìn)而抑制下游4E-BP1及p70S6K的活化。(三)二甲雙胍與靶向藥物曲妥珠單抗聯(lián)合的協(xié)調(diào)作用：1) CCK-8檢測(cè)單純使用靶向藥物曲妥珠單抗(100ug/ml)在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19的增殖均無(wú)抑制作用。2)CCK-8檢測(cè)10、20、30、40、50 mmol/L的二甲雙胍聯(lián)合曲妥珠單抗干預(yù)NCI-N8724 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別為1.314±0.047、1.156±0.069、1.052±0.011、1.002±0.020、0.900±0.012,干預(yù)48 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是1.728±0.115、1.427±0.036、1.243±0.033、1.076±0.018、0.761±0.022,干預(yù)72 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是2.457±0.110、2.176±0.074、1.367±±0.070、0.974±±0.034、0.602±0.033,與同濃度、單藥的二甲雙胍組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；CCK-8檢測(cè)相同濃度梯度的二甲雙胍聯(lián)合曲妥珠單抗干預(yù)OE1924 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別為1.596±0.050、1.740±0.086、1.307±0.023、1.086±0.035、0.866±0.025,干預(yù)48 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是1.999±±0.047、1.872±0.044、1.435±0.085、1.073±0.019、0.527±0.055,干預(yù)72 h后細(xì)胞相對(duì)增殖率分別是2.748±0.120、2.260±0.027、1.497±±0.058、0.796±0.025、0.291±0.038,與空白組、單藥曲妥珠單抗組、同濃度單藥二甲雙胍組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：1)二甲雙胍能夠抑制HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的增殖及克隆形成能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期,使細(xì)胞停滯于G1期；2)二甲雙胍可以下調(diào)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的HER2蛋白表達(dá)水平,并抑制PI3K/Akt/mT0R信號(hào)通路的活性；3)靶向藥物曲妥珠單抗單用對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19體外沒(méi)有殺傷作用,聯(lián)合二甲雙胍后有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,二者存在協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：二甲雙胍 HER2 胃癌 曲妥珠單抗
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-15
• 研究材料和方法15-24
• 1 研究材料15-16
• 1.1 細(xì)胞系15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 主要儀器設(shè)備16
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2 細(xì)胞增殖抑制率(CCK-8)17
• 2.3 細(xì)胞克隆形成能力17
• 2.4 流式細(xì)胞儀的凋亡率檢測(cè)17-18
• 2.5 流式細(xì)胞儀的細(xì)胞周期檢測(cè)18
• 2.6 熒光定量PCR18-21
• 2.7 蛋白提取和Western blot分析21-23
• 3 統(tǒng)計(jì)方法23-24
• 結(jié)果24-32
• 1 HER2在人胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況24-25
• 1.1 HER2蛋白在人胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況24
• 1.2 HER2基因mRNA在人胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況24-25
• 2 二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞增殖的影響25-26
• 3 二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞克隆形成的影響26
• 4 二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞凋亡的影響26-27
• 5 二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞周期的影響27-28
• 6 二甲雙胍對(duì)HER2相關(guān)通路蛋白表達(dá)的影響28-30
• 7 二甲雙胍聯(lián)合曲妥珠單抗抑制HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞增殖的影響30-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 附錄40-41
• 致謝41-42
• 文獻(xiàn)綜述42-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 作者簡(jiǎn)歷47

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡洙哲;p12-LOX對(duì)胃癌細(xì)胞MKN-28的增殖和遷移的影響[D];延邊大學(xué);2015年

2 李龍;Her-2高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響[D];長(zhǎng)江大學(xué);2015年

3 李亞;新加良附方抑制人胃癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 陳璐;螺旋流道慣性遷移力芯片分選模擬血液中胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];東南大學(xué);2015年

5 黃辭;MS-275對(duì)MKN-45細(xì)胞作用機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

6 李正凱;miR-200c對(duì)胃癌細(xì)胞的影響及其在耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

7 陳康;IL-6通過(guò)AKT信號(hào)通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和增殖[D];蘭州大學(xué);2016年

8 孫月;雙酚A對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)及侵襲影響的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

9 趙英海;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的自噬和凋亡在重組新城疫病毒rL-RVG引起人胃癌細(xì)胞死亡中的作用[D];江蘇大學(xué);2016年

10 胡小霞;URI促進(jìn)胃癌細(xì)胞阿霉素耐藥性和細(xì)胞遷移[D];江蘇大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：446897