本文關鍵詞：Ezrin與p65或Smad2的相互作用及其對乳腺癌細胞侵襲和增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景乳腺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一,且以每年0.8%的趨勢上升。大部分乳腺癌以50～54歲的女性為高發(fā)人群,僅1%左右的乳腺癌發(fā)生于男性。乳腺癌的轉(zhuǎn)移和復發(fā)是導致乳腺癌病人死亡的主要原因。乳腺癌轉(zhuǎn)移的過程高度復雜,涉及多個信號通路,受到多種因子的調(diào)節(jié)。雖然目前已有大量的與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關的文獻報道,但是乳腺癌轉(zhuǎn)移機制仍然不明確,缺乏系統(tǒng)性及全面性的研究,尤其是在乳腺癌轉(zhuǎn)移中起關鍵作用的蛋白及蛋白-蛋白之間的相互作用,目前沒有系統(tǒng)性的統(tǒng)計與報道。蛋白與蛋白之間的相互作用構(gòu)成復雜的細胞內(nèi)外信號網(wǎng)絡,同時精確調(diào)控著人體的各種生理過程。蛋白之間的互相作用,尤其與信號通路相關蛋白之間的作用可影響生物學功能。Wei Wang等綜述了30多種與Nuclear factor kappa-light-chain-enhancef of activated B cells (NF-κB)信號通路蛋白具有相互作用的蛋白。EZH2與p65/RelA相互作用能誘導ER-乳腺癌細胞中NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,但在ER+乳腺癌細胞中作用相反；Estrogen Receptor與p65可以互相抑制彼此的活性；Notch-I與IKKa作用可以抑制NF-κB的激活；β-TRCP與IκB-α作用,可通過蛋白酶系統(tǒng)誘導Iκ-α的重組,從而促進其酶體的降解,激活NF-κB通路；HSP 27與IKKα/β的相互作用,能抑制NF-κB的活性。因此,從與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關的蛋白及蛋白-蛋白之間的相互作用(protein-protein interactions, PPIs)入手,深入研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的機制,是研究乳腺癌轉(zhuǎn)移及對乳腺癌進行治療和預防的重要手段。Ezrin全長586個氨基酸,其ERM結(jié)構(gòu)域N端由296個氨基酸組成FERM結(jié)構(gòu)域,C端由107個氨基酸組成C-ERMAD,這兩個結(jié)構(gòu)域使得Ezrin在休眠與激活兩種狀態(tài)下轉(zhuǎn)換。Ezrin通過改變細胞微絨毛的結(jié)構(gòu),從而改變細胞的形態(tài),調(diào)節(jié)細胞與細胞之間的粘附作用以及各項生理活動,從而影響細胞的侵襲、遷移能力。例如,表皮生長因子(epidermal growth factor, EGF)是轉(zhuǎn)移中具有重要作用的細胞因子,活化的Ezrin在對EGF的應答中有著不可或缺的地位。Ezrin與乳腺癌轉(zhuǎn)移密切相關,同時能影響乳腺癌的預后,在乳腺原位癌細胞系MCF10A及轉(zhuǎn)移型細胞系MDA-MB-231中,沉默Ezrin均能降低其侵襲能力。Mak等人發(fā)現(xiàn),Src/Ezrin的相互作用能夠調(diào)節(jié)乳腺原位癌的轉(zhuǎn)移和侵襲,而Wan等人發(fā)現(xiàn),β4 integrin/Ezrin的相互作用能夠調(diào)節(jié)骨肉瘤的肺轉(zhuǎn)移。因此,Ezrin及其相互作用蛋白的互作在乳腺癌轉(zhuǎn)移和侵襲機制的研究中非常重要,這也往往涉及不同信號通路的激活和互作。研究發(fā)現(xiàn),Ezrin與其它蛋白的相互作用能影響不同的惡性腫瘤的進程。Harrison等人在前列腺癌細胞中發(fā)現(xiàn),Ezrin與CD44存在相互作用,且通過染色體易位,Ezrin/CD44參與調(diào)節(jié)前列腺癌細胞和上皮細胞的互作,影響前列腺癌細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。Brownd等人在口腔癌細胞中發(fā)現(xiàn),Ezrin與Dsg3蛋白的互相作用可增加口腔癌細胞系的轉(zhuǎn)移潛能。有關Ezrin與NF-κB信號通路的研究不多。NF-κB是一個細胞核轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族,其信號通路的激活被認為是應激反應中的一個重要環(huán)節(jié),調(diào)節(jié)著許多與凋亡,病毒復制,腫瘤生長,炎癥反應,以及自身免疫疾病相關的關鍵基因的表達。據(jù)報道,NF-κB信號通路在炎性乳腺癌(Inflammatory breast cancer, IBC)中被激活,且呈持續(xù)高表達。另一個具有持續(xù)激活的NF-κB信號通路的乳腺癌亞型是三陰性乳腺癌(Triple negative breast cancer, TNBC)。目前臨床上對于NF-κB與乳腺癌的研究顯示,NF-κB的活化通常與乳腺癌腫瘤的大小,乳腺癌肺轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn)移,以及HER2蛋白表達有關。NF-κB包括五個亞單位,Rel(cRel),p65(RelA,NF-κB3),RelB,p50(NF-κB1)和p52 (NF-κB2)。最常見的NF-κB二聚體由p65和p50組成。NF-κB p65不僅廣泛存在于各種細胞中,并且其已被證實與具有調(diào)控多種有關免疫和炎癥反應的基因的轉(zhuǎn)錄表達有關。非惡性腫瘤細胞MCF-10A中,過表達的p65亞基能夠促進上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT).另外,NF-κB-p65與腫瘤的生長、增殖、侵襲和遷移也有著密切的關系,同時調(diào)節(jié)著腫瘤細胞的凋亡和免疫活性。因此,Ezrin蛋白與NF-κB信號通路蛋白互相作用能否影響乳腺癌遷移和侵襲,值得關注。另一方面,目前也缺乏Ezrin與Smad蛋白家族的相互作用的研究。Smad蛋白家族是轉(zhuǎn)化生長因子β (transforming growth factor-β, TGF-β)超家族的重要細胞因子,其介導不同的TGF-β家族成員由細胞質(zhì)傳導入細胞核,與TGF-β共同擔負起調(diào)節(jié)細胞生長、分化、凋亡等的生理過程。Smad2屬于受體調(diào)控Smad蛋白(receptor regulated Smads, R-Smads),參與哺乳動物信號傳導通路的調(diào)節(jié)。Petersen等人在對乳腺癌腫瘤骨轉(zhuǎn)移的研究中發(fā)現(xiàn),沉默Smad2能夠促進MDA-MB-231細胞的侵襲。Chen等人發(fā)現(xiàn)磷酸化的Smad2可作為不同腫瘤進程的非小細胞肺癌患者預后不良及生存不良的標志。Liao等人研究發(fā)現(xiàn),SIAH2蛋白可以與Smad2相互作用,調(diào)節(jié)Smad2的降解和泛素化。然而,目前尚未有研究證明Ezrin是否與Smad2存在相互作用,且該互作對乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移和侵襲功能是否存在影響,都是未知數(shù)。因此,Ezrin與Smad2之間相互作用的研究及其對癌細胞轉(zhuǎn)移的影響,值得關注。目前,研究目標蛋白相互作用網(wǎng)絡的方法有很多,包括免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP),串聯(lián)親和層析(Tandem affinity purification, TAP),酵母雙雜交(Yeast 2 hybrid, Y2H), pulldown,2D電泳(Two-dimensional electrophoresis),免疫熒光(Immunofluorescence, IF)共定位等。通過免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的方法得到的樣品,經(jīng)過電泳分析,對目的條帶進行切膠回收,然后行液質(zhì)聯(lián)用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, LCMS)分析,可以篩選出相互作用的蛋白。本研究中,我們采取IP聯(lián)用LCMS,在乳腺癌細胞MDA-MB-231中得到基于與Ezrin相互作用的蛋白網(wǎng)絡,發(fā)現(xiàn)Ezrin與p65和Smad2之間存在相互作用。隨后,我們用Co-IP和IF法驗證了Ezrin與p65和Smad2之間的相互作用,并初步研究了其相互作用對于乳腺癌細胞的侵襲和增殖的影響。研究目的1.研究乳腺癌細胞中基于與Ezrin相互作用的蛋白譜,選擇其中的p65和Smad2進行與Ezrin相互作用的鑒定；2.初步研究Ezrin與p65或Smad2之間的相互作用對于乳腺癌細胞侵襲和增殖能力的影響。研究方法1.乳腺癌細胞的培養(yǎng)常規(guī)復蘇高侵襲性的乳腺癌細胞株MDA-MB-231及低侵襲性的乳腺癌細胞株MCF-7。MDA-MB-231培養(yǎng)于含有10%血清(fetal bovine serum, FBS)、100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和2mmol/L谷氨酰胺(Glutamine, Gln)的L-15培養(yǎng)基中,于37℃、不含CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；MCF-7培養(yǎng)于含有10% FBS,100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和2mmol/L Gln的DMEM培養(yǎng)基中,于37℃,5%CO2,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞匯合度達到90%,用0.25%胰蛋白酶(胰酶,含0.02% EDTA)消化,進行傳代及擴大培養(yǎng)。2.免疫沉淀(IP)及液質(zhì)聯(lián)用(LCMS)第一次IP聯(lián)用LCMS檢測：提取MDA-MB-231全細胞裂解液,通過IP實驗,沉淀與Ezrin相互作用的蛋白,取部分行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecylsulphate- polyacrylamide gel electrophresis, SDS-PAGE)和考馬斯亮藍(coomassie brilliant blue, CBB)染色,觀察Ezrin與相互作用蛋白的富集情況,確定IP實驗有效；剩下的樣品送至深圳華大基因公司行LCMS檢測,分析數(shù)據(jù)并挑選興趣蛋白。第二次IP聯(lián)用LCMS檢測：提取MDA-MB-231全細胞裂解液,以IgG作為對照,通過IP實驗,沉淀與Ezrin相互作用的蛋白,行SDS-PAGE和銀氨染色,觀察Ezrin與相互作用蛋白的富集情況,確定IP實驗有效；回收蛋白膠條,連同IgG對照,一起送至深圳華大基因進行LCMS檢測,確定蛋白相互作用。3.免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印跡(Western Blot, WB)及免疫熒光(IF)3.1細胞漿和細胞核蛋白提取及免疫共沉淀(Co-IP)提取及分離MDA-MB-231和MCF-7細胞胞漿和胞核蛋白,分別用抗Ezrin、 p65或Smad2抗體行Co-IP,檢測Ezrin/p65, Ezrin/Smad2在胞漿和胞核中的相互作用。3.2免疫印跡(WB)WB檢測MDA-MB-231和MCF-7細胞中,Ezrin/p65, Ezrin/Smad2蛋白表達水平和PPIs。3.3免疫熒光(IF)對MDA-MB-231和MCF-7細胞中Ezrin/p65, Ezrin/Smad2蛋白進行IF染色,通過激光共聚焦檢測并確定Ezrin/p65, Ezrin/Smad2蛋白的表達及共定位。4.3×Flag-Ezrin-6xHis質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)染4.13×Flag-Ezrin-6xHis質(zhì)粒構(gòu)建pcDNA3.1用于構(gòu)建含有Flag和His標簽及Ezrin蛋白全長編碼序列的質(zhì)粒3×Flag-Ezrin-6xHis,將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入DH5α進行擴增并提取。4.2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、免疫共沉淀(Co-IP)及免疫熒光(IF)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染設置組：①共轉(zhuǎn)染3×Flag-Ezrin-6×His和GFP-RelA (GFP-p65)質(zhì)粒；②共轉(zhuǎn)染3×Flag-Ezrin-6×His和Smad2-HA質(zhì)粒。CoIP:提取及分離MDA-MB-231和MCF-7細胞胞漿和胞核蛋白,分別行Co-IP驗證Ezrin/p65, Ezrin/Smad2在胞漿和胞核中的PPIs。IF：對MDA-MB-231和MCF-7細胞中Ezrin和p65, Ezrin和Smad2蛋白進行IF染色,通過激光共聚焦檢測并確定Ezrin/p65, Ezrin/Smad2蛋白的表達及共定位。5.Transwell檢測乳腺癌細胞侵襲能力5.1沉默和過表達目的蛋白組別設置為了驗證Ezrin/p65相互作用對乳腺癌細胞侵襲的影響,設置組別分別為：①空載組；②沉默Ezrin:③沉默p65；④過表達p65；⑤沉默Ezrin過表達p65。為了驗證Ezrin/Smad2相互作用對乳腺癌細胞侵襲的影響,設置組別分別為：①空載組；②沉默Ezrin:③沉默Smad2:④過表達Smad2:⑤沉默Ezrin過表達Smad2.5.2 Transwell檢測乳腺癌細胞侵襲能力將按照上述組別設置處理過的乳腺癌細胞轉(zhuǎn)入已經(jīng)鋪有Matrigel的Transwell小室,培養(yǎng)18h后,擦去小室上層中的細胞及Matrigel,對穿過小室的細胞進行結(jié)晶紫染色,顯微鏡下觀察,行細胞計數(shù)并分析實驗結(jié)果。6.Cell Counting Kit-8(CCK-8)檢測乳腺癌細胞增殖能力6.1沉默和過表達目的蛋白組別及轉(zhuǎn)染時間設置為了驗證Ezrin/p65相互作用對乳腺癌細胞增殖的影響,設置組別分別為：①空載組；②沉默Ezrin:③沉默p65；④沉默Ezrin和p65；⑤沉默Ezrin過表達p65；⑥沉默p65過表達Ezrin.為了驗證Ezrin/Smad2相互作用對乳腺癌細胞增殖的影響,設置組別分別為：①空載組；②沉默Ezrin:③沉默Smad2:④沉默Ezrin和Smad2:⑤沉默Ezrin過表達Smad2:⑥沉默Smad2過表達Ezrin.在乳腺癌細胞MDA.MB.231和MCF-7,針對每種細胞各同時轉(zhuǎn)染5塊96孔板,轉(zhuǎn)染時間設置為24h,48h,72h,96h和120h。6.2 CCK-8聯(lián)用酶標儀檢測細胞增殖在按照上述組別設置處理過的乳腺癌細胞中,按照設置的轉(zhuǎn)染時間點加入CCK-8檢測液,20min后使用酶標儀設定吸光度450nm,檢測乳腺癌細胞的吸光度(Optical density,OD)值并分析結(jié)果。研究結(jié)果1.乳腺癌細胞MDA.MB.231中基于Ezrin相互作用的蛋白網(wǎng)絡初次IP聯(lián)用CBB染色驗證了富集的Ezrin蛋白,通過聯(lián)用LCMS法共檢測得到1889種與Ezrin存在相互作用的蛋白,其中包括p65和Smad2蛋白。二次IP聯(lián)用銀染,對比IgG對照,通過LCMS法驗證了Ezrin及其相互作用蛋白p65和Smad2。2. Ezrin/p65相互作用在乳腺癌細胞中的鑒定結(jié)果2.1內(nèi)源性Ezrin/p65相互作用鑒定結(jié)果Co-IP及WB結(jié)果顯示,在MDA-MB-231和MCF-7細胞中,Ezrin/p65相互作用主要存在于胞漿,而在胞核中未檢測出。iF結(jié)果顯示,Ezrin與p65主要共定位于胞漿,極少數(shù)共定位于胞核。上述兩個結(jié)果互相印證。2.2外源性Ezrin/p65相互作用鑒定結(jié)果共轉(zhuǎn)染3×Flag-Ezrin-6×His和GFP-RelA, Co-IP和WB結(jié)果顯示,在MDA-MB-231和MCF-7細胞中,Ezrin/p65相互作用主要存在于胞漿,而在胞核中未檢測出。IF結(jié)果顯示,Ezrin與p65主要共定位于胞漿,極少數(shù)共定位于胞核。上述兩個結(jié)果互相印證。3. Ezrin/Smad2相互作用在乳腺癌細胞中的鑒定結(jié)果3.1內(nèi)源性Ezrin/Smad2相互作用鑒定結(jié)果Co-IP及WB結(jié)果顯示,在MDA-MB-231細胞的胞漿和胞核中,Ezrin/Smad2均存在明顯PPI；在MCF-7細胞中,Ezrin/Smad2相互作用主要存在于胞漿,而在胞核中未檢測出。IF結(jié)果顯示,在MDA-MB-231細胞中,Ezrin與Smad2明顯共定位于胞漿和胞核；在MCF-7細胞中,Ezrin與Smad2明顯共定位于胞漿,而在胞核中未能檢測出。上述兩個結(jié)果互相印證。3.2外源性Ezrin/Smad2相互作用鑒定結(jié)果共轉(zhuǎn)染3×Flag-Ezrin-6×His和Smad2-HA, Co-IP和WB結(jié)果顯示,在MDA-MB-231細胞的胞漿和胞核中,Ezrin/Smad2均存在明顯的pPI；在MCF-7細胞中,Ezrin/Smad2相互作用主要存在于胞漿,而在胞核中未檢測出。IF結(jié)果顯示,在MDA-MB-231細胞中,Ezrin與Smad2明顯共定位于胞漿和胞核；在MCF-7細胞中,Ezrin與Smad2明顯共定位于胞漿,而在胞核中未能檢測出。上述兩個結(jié)果互相印證。4. Ezrin/p65, Ezrin/Smad2相互作用促進乳腺癌細胞的侵襲在MDA-MB-231和MCF-7細胞中,①單獨沉默Ezrin、 p65或Smad2,鏡下穿過transwell小室的細胞計數(shù)與空載組相比減少,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；②過表達p65或Smad2與空載組相比,鏡下細胞計數(shù)增多,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；③沉默Ezrin但過表達p65或Smad2組,其細胞計數(shù)均比單獨沉默Ezrin組增多,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；④沉默Ezrin但過表達p65或Smad2組,其細胞計數(shù)比僅過表達p65或Smad2組低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)果表明,沉默Ezrin能夠抑制過表達p65或Smad2對乳腺癌細胞侵襲的促進作用,提示p65或Smad2對乳腺癌細胞侵襲的促進作用依賴于Ezrin的表達,且Ezrin/p65, Ezrin/Smad2相互作用能夠促進乳腺癌細胞的侵襲。5. Ezrin/p65, Ezrin/Smad2相互作用對乳腺癌細胞增殖沒有影響5.1 Ezrin/p65, Ezrin/Smad2相互作用對MDA-MB-231細胞增殖沒有影響針對Ezrin/p65相互作用對MDA-MB-231細胞增殖的影響,析因分析結(jié)果顯示,天數(shù)與組別之間存在交互作用(F=8.29,P=0.00)。調(diào)整R2=0.93。經(jīng)成對比較,第一天(轉(zhuǎn)染24h)各組之間無統(tǒng)計學差異(F=0.03,P=0.99)；第二天到第五天(轉(zhuǎn)染48-120h),各組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；經(jīng)過兩兩比較,各實驗組與空載組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而實驗組之間的差異無統(tǒng)計學意義。針對Ezrin/Smad2相互作用對MDA-MB-231細胞增殖的影響,析因分析結(jié)果顯示,天數(shù)與組別之間存在交互作用(F=7.24,P=0.00)。調(diào)整R2=0.92。經(jīng)成對比較,第一天(轉(zhuǎn)染24h)各組之間無統(tǒng)計學差異(F=0.03,P=0.92)；第二天到第五天(轉(zhuǎn)染48-120h),各組之間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；經(jīng)過兩兩比較,各實驗組與空載組之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義。5.2 Ezrin/p65,Ezrin/Smad2相互作用對MCF-7細胞增殖沒有影響針對Ezrin/p65相互作用對MCF-7細胞增殖的影響,析因分析結(jié)果顯示,天數(shù)與組別之間存在交互作用(F=5.80,P=0.00)。調(diào)整R2=0.96。經(jīng)過成對比較,第1天(轉(zhuǎn)染24h,F=0.12,P=0.98)及第2天(轉(zhuǎn)染48h,F=1.09,P=0.38)各組之間無統(tǒng)計學差異；第3天到第5天(轉(zhuǎn)染72-120h),各組之間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。經(jīng)過兩兩比較,各實驗組與空載組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義。針對Ezrin/Smad2相互作用對MCF-7細胞增殖的影響,析因分析結(jié)果顯示,天數(shù)與組別之間存在交互作用(F=11.84,P=0.00)。調(diào)整R2=0.98。經(jīng)過成對比較,第1天(轉(zhuǎn)染24h,F=0.94,P=0.46)及第2天(轉(zhuǎn)染48h,F=1.97,P=0.10)各組之間無統(tǒng)計學差異；第3天到第5天(轉(zhuǎn)染72-120h),各組之間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。經(jīng)過兩兩比較,各實驗組與空載之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而實驗組之間差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論1.在乳腺癌細胞MDA-MB-231全細胞裂解液中,共發(fā)現(xiàn)1889種與Ezrin相結(jié)合的蛋白,其中包括p65和Smad2蛋白。2.在MDA-MB-231和MCF-7細胞系中, Ezrin與p65蛋白之間均存在相互作用,主要存在且共定位于細胞漿。3.在MDA-MB-231和MCF-7細胞系中,Ezrin與Smad2蛋白之間均存在相互作用,但在MDA-MB-231細胞中,該相互作用存在且共定位于細胞漿與細胞核,而在MCF-7細胞中,該相互作用主要存在且共定位于細胞漿,而在細胞核中未檢測出明顯的相互作用或共定位。4. Ezrin與p65, Ezrin與Smad2蛋白之間的相互作用能夠促進乳腺癌轉(zhuǎn)移。5. Ezrin與p65, Ezrin與Smad2蛋白之間的相互作用對MDA-MB-231和MCF-7細胞的增殖沒有影響。
【關鍵詞】：Ezrin p65 Smad2 相互作用 乳腺癌細胞 侵襲
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-25
• 第一章 前言25-30
• 第二章 材料與方法30-51
• 1 材料30-36
• 2 實驗方法36-51
• 2.1 試劑及溶液的配制36-41
• 2.2 細胞的凍存、復蘇及傳代培養(yǎng)41
• 2.3 IP,考染及LCMS檢測與Ezrin相互作用的蛋白41-43
• 2.4 IP,銀染及LCMS檢測與Ezrin相互作用的蛋白43
• 2.5 WB檢測蛋白表達43-44
• 2.6 提取胞漿及胞核蛋白,Co-IP檢測PPIs44
• 2.7 IF檢測蛋白共定位44-45
• 2.8 3×Flag-Ezrin-6×His質(zhì)粒構(gòu)建45-47
• 2.9 DH5α感受態(tài)制備及熱激轉(zhuǎn)化3×Flag-Ezrin-6×His47-48
• 2.10 質(zhì)粒提取,轉(zhuǎn)染及Co-IP,IF檢測PPIs及蛋白共定位48-49
• 2.11 Transwell檢測乳腺癌細胞的侵襲能力49-50
• 2.12 CCK-8檢測乳腺癌細胞的增殖能力50
• 2.13 統(tǒng)計學方法50-51
• 第三章 實驗結(jié)果51-86
• 1. 考馬斯亮藍染色顯示IP富集Ezrin及其結(jié)合蛋白51-52
• 2. 銀氨染色顯示IP富集Ezrin及其結(jié)合蛋白52-53
• 3. 與Ezrin相互作用的蛋白53-56
• 4. Ezrin/p65相互作用及共定位56-64
• 5. Ezrin/Smad2相互作用及共定位64-72
• 6. Ezrin/p65,Ezrin/Smad2相互作用促進乳腺癌細胞侵襲72-79
• 6.1 Ezrin/p65,Ezrin/Smad2相互作用促進MDA-MB-231細胞侵襲72-76
• 6.2 Ezrin/p65,Ezrin/Smad2促進MCF-7細胞侵襲76-79
• 7. Ezrin/p65,Ezrin/Smad2相互作用對乳腺癌細胞增殖能力沒有影響79-86
• 7.1 Ezrin/p65相互作用對MDA-MB-231細胞增殖能力沒有影響79-81
• 7.2 Ezrin/Smad2相互作用對MDA-MB-231細胞增殖能力沒有影響81-82
• 7.3 Ezrin/p65相互作用對MCF-7細胞增殖沒有影響82-84
• 7.4 Ezrin/Smad2相互作用對MCF-7細胞增殖沒有影響84-86
• 第四章 討論86-91
• 全文主要結(jié)論91-92
• 參考文獻92-97
• 縮略詞表97-99
• 成果99-100
• 致謝100-101

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7 王紅建;史成章;;Ezrin的生物學功能及其與腫瘤的關系[J];腫瘤基礎與臨床;2007年04期

8 張肖肖;辛彥;;Ezrin蛋白與腫瘤轉(zhuǎn)移關系的研究進展[J];中國腫瘤臨床;2007年23期

9 趙清石;江新梅;胡靜;鞠浩;袁軍輝;;Ezrin蛋白在肌病患者骨骼肌中的表達及意義[J];臨床神經(jīng)病學雜志;2008年01期

10 鄒科見;周海蘭;;Ezrin與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2008年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;MicroRNA-183 regulates Ezrin expression in lung cancer cell[A];浙江省醫(yī)學會呼吸系病分會成立三十周年慶典活動暨2008年呼吸病學學術年會論文匯編[C];2008年

2 鄭淑慧;黃靜和;向秋玲;周科文;付曉東;王庭槐;;Ezrin蛋白在雌激素促乳腺癌細胞遷移和侵襲中的作用研究[A];中國生理學會第23屆全國會員代表大會暨生理學學術大會論文摘要文集[C];2010年

3 ;Expression of Ezrin Protein in Renal Cell Carcinoma[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

4 范婕;史威;張林西;李海軍;金春亭;武欣;郭穎;;乳腺癌中Ezrin表達特點及臨床病理意義[A];2009年“臨床診斷和治療新進展研究”暨“全國腫瘤病理診斷交流”研討會論文集[C];2009年

5 彭婷婷;王慧;石亞偉;;Analysis of the Interaction between L-Periaxin and Ezrin[A];中國生物化學與分子生物學會第十一次會員代表大會暨2014年全國學術會議論文集——專題報告一[C];2014年

6 陳宇;華建江;王雷;王巍巍;謝春蕾;孟菁菁;黃大毛;伍斌;唐發(fā)清;;小檗堿通過Ezrin蛋白抑制鼻咽癌細胞遷移和偽足形成[A];藥用植物化學與中藥有效成分分析研討會論文集（上）[C];2008年

7 ;17β-estradiol enhances breast cancer cell motility and invasion via extra-nuclear activation of actin-binding protein ezrin N[A];中國生理學會第十一屆張錫鈞基金全國青年優(yōu)秀生理學學術論文交流及評獎會議綜合摘要[C];2011年

8 曹新旺;繆勇;郭振;姚雪彪;;PKA介導的Ezrin磷酸化在上皮細胞分泌中的功能研究[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術大會論文摘要集[C];2003年

9 ;Expression of ezrin and phosphorylated ezrin (pEzrin) in pancreatic ductal adenocarcinoma[A];山東生物化學與分子生物學會2009年學術會議論文匯編[C];2009年

10 鄭淑慧;付曉東;黃靜和;張亞星;王庭槐;;Ezrin蛋白在雌激素促乳腺癌細胞遷移和侵襲中的作用[A];全國第十二屆心臟學會第十五屆心功能學會和《心臟雜志》編委會聯(lián)合學術會議論文集[C];2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔界男;Ezrin基因在子宮頸癌遷移浸潤中的作用及機制[D];延邊大學;2015年

2 高飛;紫杉醇對肝癌細胞中ezrin表達的調(diào)控及其與肝癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的關系[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

3 馬力;Ezrin在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移過程中的作用研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

4 蘭嵐;Ezrin蛋白在肺癌中表達的臨床意義及其對肺癌細胞生物學行為的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

5 鄧輝;Ezrin的分子可塑性在細胞動力學調(diào)控中的機制研究[D];中國科學技術大學;2010年

6 周琳;Ezrin在肝細胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及吳茱萸堿對人肝癌細胞株HepG2 Ezrin生物學行為的影響[D];中南大學;2013年

7 張巖;膜—細胞骨架聯(lián)接分子ezrin對肝細胞肝癌生長和轉(zhuǎn)移的影響[D];復旦大學;2006年

8 李娜;Ezrin在慢性氣道炎癥黏液分泌中的作用及其分子機制[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

9 張健;Ezrin蛋白在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及黃芩素對其表達的影響[D];中南大學;2014年

10 王峰松;Ezrin-ACAP4蛋白復合物在胞吐動力學調(diào)控中的功能研究[D];中國科學技術大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 耿耘;肺癌1號方對小鼠Lewis肺癌CD44與Ezrin蛋白表達作用的實驗研究[D];云南中醫(yī)學院;2016年

2 葉晶;血小板型十二脂氧合酶抑制劑在胃癌細胞增殖與遷移中的作用研究[D];延邊大學;2016年

3 鄒欣妤;Ki67、CD133、Ezrin及RhoA在SW-13細胞株及腎上腺皮質(zhì)腫瘤的表達及其臨床意義[D];廣西醫(yī)科大學;2011年

4 唐芮;Ezrin與p65或Smad2的相互作用及其對乳腺癌細胞侵襲和增殖的影響[D];南方醫(yī)科大學;2016年

5 陳宇;Ezrin蛋白在皮膚癌組織中的表達及生物學功能[D];中南大學;2009年

6 Paola Urquizo Moscoso（寶拉）;子宮頸癌中Ezrin的表達及其臨床意義[D];浙江大學;2007年

7 張孝欽;Ezrin蛋白在人非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[D];浙江大學;2007年

8 朱彥;Ezrin在宮頸癌中的表達及臨床意義[D];汕頭大學;2009年

9 張瑛;糖化/氧化修飾白蛋白對血管內(nèi)皮細胞ezrin活化的調(diào)控及其機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2010年

10 李巧丹;Ezrin在小鼠附植前胚胎中的表達規(guī)律及功能[D];安徽農(nóng)業(yè)大學;2014年

  本文關鍵詞：Ezrin與p65或Smad2的相互作用及其對乳腺癌細胞侵襲和增殖的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：442315