本文關(guān)鍵詞：細(xì)絲蛋白A影響EGFR突變陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌厄洛替尼治療的敏感性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:肺癌長(zhǎng)期以來是全球癌癥相關(guān)死亡的首要原因。肺癌中最常見的亞型是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC),約占80%�？傮w來說,NSCLC治療效果不盡如人意。盡管化療取得了很大進(jìn)步,但即使最有效的以鉑類為基礎(chǔ)的新一代的化療方案也只使中位總生存期(OS)延長(zhǎng)至最多10個(gè)月。通過對(duì)NSCLC發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ)分子事件的深入研究,表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR),一類酪氨酸激酶受體,成為NSCLC治療方案中一個(gè)重要靶標(biāo)。它們可與EGFR或其它HER家族成員結(jié)合形成二聚體,在關(guān)鍵的酪氨酸殘基上發(fā)生自身磷酸化,進(jìn)一步激活一系列下游信號(hào)通路如PI3K/AKT/m TOR,RAS/RAF/MAPK,JAK/STAT,這對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多個(gè)程序包括增殖,存活和凋亡起重要作用。EGFR信號(hào)通路的激活由基因突變或(和)基因擴(kuò)增引起,已證實(shí)它們與NSCLC的發(fā)生,進(jìn)展和不良預(yù)后關(guān)系密切。EGFR激活突變主要位于酪氨酸激酶區(qū)域,以19外顯子堿基對(duì)缺失或21外顯子點(diǎn)突變的形式發(fā)生,這可見于約20%的NSCLC患者。這些突變使EGFR激活,進(jìn)而激活其下游的信號(hào)分子。第一代EGFR酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs),吉非替尼和厄洛替尼,可逆的競(jìng)爭(zhēng)ATP結(jié)合位點(diǎn)從而阻斷EGFR誘導(dǎo)的下游信號(hào)通路的激活,在NSCLC的治療中廣泛應(yīng)用。大量研究表明EGFR突變陽(yáng)性的NSCLC患者應(yīng)用吉非替尼或厄洛替尼對(duì)比卡鉑/紫杉醇可顯著延長(zhǎng)中位無病進(jìn)展生存期(PFS),明顯改善生活質(zhì)量,延緩癥狀惡化。然而,仍有約30%EGFR突變陽(yáng)性的患者對(duì)EGFR-TKIs不敏感。因此,探討影響腫瘤細(xì)胞對(duì)EGFR-TKI敏感性的分子機(jī)制,對(duì)臨床合理選擇治療NSCLC藥物及判斷藥物療效具有重要意義。細(xì)絲蛋白A(FLNa),同時(shí)也稱肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白280(ABP 280),最初被認(rèn)為是一種非肌動(dòng)蛋白細(xì)絲交聯(lián)蛋白。隨后報(bào)導(dǎo)說明了此蛋白在細(xì)胞收縮和伸展中具有重要作用。FLNa作為重要腳手架分子,促進(jìn)蛋白-蛋白之間的相互作用并影響蛋白細(xì)胞定位。研究證實(shí)FLNa凝結(jié)蛋白參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),在多種類型癌組織過表達(dá),由于其與腫瘤發(fā)生相關(guān),FLNa在腫瘤細(xì)胞中的作用已成為研究熱點(diǎn)。Zhu等已經(jīng)證實(shí)降低FLNa的表達(dá)可促進(jìn)肺腺癌PC-9細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。FLNa可抑制PC-9細(xì)胞EGFR及其下游MAPK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激酶的活化,增強(qiáng)吉非替尼對(duì)PC-9細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的抑制作用。厄洛替尼與吉非替尼兩藥有相同的喹唑啉母環(huán),吉非替尼側(cè)鏈不對(duì)稱,而厄洛替尼的側(cè)鏈?zhǔn)晴R像對(duì)稱的,結(jié)構(gòu)上的細(xì)微差異導(dǎo)致兩藥物在血漿內(nèi),腫瘤組織內(nèi)的分布,代謝,體外活性,毒性等方面有所不同。這對(duì)于不同藥物對(duì)各種不同腫瘤的治療選擇上有重要參考意義。兩藥結(jié)構(gòu)的不同是否導(dǎo)致與FLNa相互作用的不同,進(jìn)而影響EGFR突變陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌對(duì)厄洛替尼的敏感性,有待進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究利用EGFR基因19外顯子缺失突變的NSCLC PC-9細(xì)胞株,通過:(1)建立低表達(dá)FLNa的PC-9穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。(2)采用MTS法、劃痕修復(fù)試驗(yàn)(Wound healing assay)及侵襲試驗(yàn)(Transwell法)檢測(cè)厄洛替尼對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株生物學(xué)行為包括增殖、遷移和侵襲的影響;(3)采用Western blot法檢測(cè)厄洛替尼分別對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞EGFR、ERK等信號(hào)分子的磷酸化水平的影響。探討FLNa的表達(dá)量影響EGFR突變陽(yáng)性NSCLC對(duì)厄洛替尼的敏感性及其分子機(jī)制。方法:1 Western bolt方法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中FLNa蛋白水平。2 MTS比色分析法檢測(cè)厄洛替尼對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞增殖能力的影響。3劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)厄洛替尼對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞遷移能力的影響。4侵襲試驗(yàn)檢測(cè)厄洛替尼對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞侵襲能力的影響。5 Western blot檢測(cè)厄洛替尼對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞filamin A,p-EGFR,EGFR,p-ERK,和ERK水平,?-actin作為內(nèi)參。結(jié)果:1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞FLNa蛋白水平采用Western blot檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞FLNa蛋白水平,Image J軟件對(duì)蛋白條帶進(jìn)行掃描,利用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果:PC-9/ctrl細(xì)胞中FLNa的表達(dá)量(0.87±0.01)明顯高于PC-9/FLNa(KD)細(xì)胞(0.25±0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2兩組細(xì)胞對(duì)厄洛替尼的敏感差異2.1兩組細(xì)胞IC50MTS法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞IC50,結(jié)果:不同濃度的厄洛替尼作用下,其對(duì)PC-9/ctrl細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率均高于PC-9/FLNa(KD)細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);厄洛替尼的IC50值,PC-9/FLNa(KD)組細(xì)胞(0.39±0.01)明顯高于PC-9/ctrl組細(xì)胞(0.08±0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。PC-9/FLNa(KD)細(xì)胞對(duì)厄洛替尼的敏感性更低。2.2兩組細(xì)胞遷移能力比較用劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩組細(xì)胞的遷移能力,結(jié)果:無藥物作用時(shí),PC-9/FLNa(KD)組細(xì)胞在6h、12h、18h的遷移率(16.49±0.86%,43.32±0.95%,50.00±0.00%)均明顯高于PC-9/ctrl組(11.58±1.50%,28.68±1.48%,50.00±0.00%),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);0.04μmol/L厄洛替尼作用時(shí),PC-9/FLNa(KD)組細(xì)胞6h、12h、18h的遷移率(12.92±1.44%,30.35±1.07%,49.98±0.02%)明顯高于PC-9/ctrl組細(xì)胞(6.36±0.99%,18.48±1.10%,24.22±0.05%),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.3兩組細(xì)胞侵襲能力比較侵襲試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果:無藥物作用時(shí),PC-9/FLNa(KD)組穿膜的細(xì)胞數(shù)量(125.00±5.72)多于PC-9/ctrl組(63.00±5.46),在0.04μmol/L厄洛替尼作用下的PC-9/FLNa(KD)組穿膜的細(xì)胞數(shù)量(86.00±4.09)明顯多于PC-9/ctrl組(29.00±3.21),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3 EGFR活化水平及其下游信號(hào)分子的表達(dá)水平Western blot檢測(cè)0.01μmol/L厄洛替尼作用于兩組細(xì)胞0h、2h、4h后各蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果:PC-9/FLNa(KD)組p-EGFR的水平(0.37±0.01;0.31±0.01;0.28±0.00)均明顯高于PC-9/ctrl組(0.33±0.01;0.03±0.00;0.11±0.00),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);PC-9/FLNa(KD)組p-ERK的水平(0.98±0.00;0.57±0.00;0.79±0.01)均高于PC-9/ctrl組(0.89±0.01;0.25±0.01;0.45±0.01),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1下調(diào)FLNa的表達(dá)促進(jìn)PC-9細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲;FLNa通過影響PC-9細(xì)胞EGFR的磷酸化水平,調(diào)控MAPK/ERK激酶的活化,進(jìn)而影響PC-9細(xì)胞的生物學(xué)行為。2 FLNa抑制PC-9細(xì)胞EGFR及其下游MAPK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激酶的活化,增強(qiáng)厄洛替尼對(duì)PC-9細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 細(xì)絲蛋白A 表皮生長(zhǎng)因子受體 酪氨酸磷酸化 厄洛替尼
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-29
• 結(jié)果29-31
• 附圖31-37
• 附表37-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 綜述 細(xì)絲蛋白A與腫瘤50-63
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷64

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1 羅俊華;李娟;;厄洛替尼治療老年晚期NSCLC的臨床觀察[J];腫瘤防治研究;2009年03期

2 陳光;鞠春梅;許淼;;厄洛替尼治療老年晚期NSCLC 36例臨床評(píng)價(jià)[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2009年12期

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