發(fā)布時間：2017-05-31 15:00

  本文關(guān)鍵詞：3-溴丙酮酸聯(lián)合順鉑抑制肺癌細胞株A549生長的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景目前肺癌已成為我國乃至全球范圍內(nèi)發(fā)病及死亡率均居首位的惡性腫瘤,并且其發(fā)病率和死亡率呈日益上升的態(tài)勢[1-2],以表皮生長因子選擇性酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)為代表的分子靶向治療的應(yīng)用,盡管取得了引人矚目的療效,但緊接著出現(xiàn)的耐藥使其治療陷入瓶頸[3-4]。近年來研究表明惡性腫瘤細胞中糖酵解明顯增強,且糖酵解在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色[5-6],大量研究顯示通過抑制異常糖酵解可抑制多種腫瘤生長,甚至可殺死腫瘤細胞,3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-Br PA)作為己糖激酶抑制劑這種抑制作用尤為明顯,并有望作為新型抗腫瘤藥物用于臨床。目前關(guān)于3-Br PA對肺癌作用的研究國內(nèi)外極為少見,其對肺癌作用的具體機制也不清楚。本實驗研究擬觀察3-BrPA、順鉑單用及聯(lián)用對肺癌細胞株A549增殖的影響,并初步探討3-Br PA對肺癌A549細胞的增殖抑制作用及其可能機制。目的觀察3-Br PA、順鉑單用及聯(lián)用對肺癌細胞株A549增殖的影響,并初步探討3-BrPA對肺癌A549細胞的增殖抑制作用及其可能機制。方法1應(yīng)用CCK-8(cell counting kit-8)法觀察不同濃度的順鉑、3-Br PA單用及聯(lián)用處理的A549、MRC-5細胞在24h、48h、72小時的增殖情況。2選擇低于IC50(half maximal inhibitory concentration,半抑制濃度)的3-BrPA(40μmol/L)與順鉑(1 mg/L)單獨及聯(lián)合作用于A549細胞,用藥48 h后在倒置相差顯微鏡下觀測各組A549細胞的形態(tài)變化,使用流式細胞儀測定各組A549細胞的凋亡率;流式細胞儀分析不同濃度的3-BrPA處理A549細胞48 h后各組細胞周期分布,并計算細胞增殖指數(shù)。3不同濃度的3-Br PA處理A549細胞48h后,應(yīng)用己糖激酶(hexokinase,HK)檢測試劑盒檢測3-BrPA對各組細胞內(nèi)己糖激酶活性的影響。結(jié)果13-brpa對a549細胞生長的影響:當(dāng)3-brpa濃度高于20μmol/l時,與陰性對照組比較,其對a549細胞具有明顯的抑制作用(p0.01),并且隨著3-brpa濃度的增高、作用時間延長,其增殖抑制作用明顯增強(p0.05)。且與單用3-brpa、順鉑組比較,聯(lián)合用藥組對a549細胞的增殖抑制作用顯著增強(p0.01)。3-brpa對mrc-5細胞增殖的影響:cck-8結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,當(dāng)濃度在0~80μmol/l范圍內(nèi)時,3-brpa對mrc-5細胞無明顯增殖抑制作用(p0.05),而當(dāng)3-brpa的濃度范圍為80-160μmol/l時對mrc-5僅有輕微抑制作用,3-brpa對a549細胞的抑制作用在同時間點以及同濃度均顯著高于其對mrc-5細胞的抑制作用(p0.01)。2倒置相差顯微鏡觀察到用藥處理a549細胞48h后,3-brpa組表現(xiàn)為大多數(shù)細胞呈現(xiàn)凋亡改變,而聯(lián)合用藥組凋亡細胞數(shù)量更多,且凋亡改變更加明顯,部分區(qū)域甚至呈現(xiàn)細胞碎片、空泡化改變等細胞壞死征象;流式細胞儀檢測細胞凋亡結(jié)果顯示,與對照組的a549細胞凋亡率(8.103±2.590)%相比較,順鉑組(20.700±5.172)%、3-brpa組(53.417±5.259)%和3-brpa與順鉑聯(lián)用組(77.953±3.587)%的細胞凋亡率均顯著增高(p0.01),而聯(lián)合用藥組細胞凋亡率較單一用藥組顯著增高(p0.01);流式細胞儀分析不同濃度的3-brpa處理a549細胞48h后的細胞周期結(jié)果提示隨著3-brpa濃度增高,處于g1期的a549細胞明顯增多(p0.01),同時處于s期的a549細胞明顯減少(p0.01),細胞較多的被阻滯于g1期,而s期和g2/m期細胞比例顯著下降,a549細胞的增殖指數(shù)隨3-brpa濃度增高而降低。3不同濃度的3-brpa作用于a549細胞48h后:己糖激酶活性檢測結(jié)果顯示用藥組細胞內(nèi)己糖激酶活性顯著低于陰性對照組,且隨著3-brpa濃度增高,細胞內(nèi)己糖激酶活性逐漸降低。結(jié)論13-brpa具有抑制肺癌a549細胞增殖的作用、并且與順鉑聯(lián)用具有協(xié)同抗肺癌a549細胞的增殖作用,同時低濃度3-brpa對正常細胞mrc-5細胞作用不明顯,僅高濃度時有輕微抑制作用,提示3-brpa具有明顯抑制肺癌a549細胞增殖的作用,但對正常細胞mrc-5的毒性作用卻不明顯,并且與順鉑聯(lián)用具有協(xié)同抗a549細胞增殖的作用。23-brpa具有誘導(dǎo)a549細胞凋亡的作用,同時具有延緩細胞周期進程進而抑制細胞增殖的作用。3 3-Br PA具有降低A549細胞內(nèi)己糖激酶活性的作用,并且隨其濃度增加,己糖激酶活性逐漸下降。以上研究提示,在體外3-Br PA具有抑制A549細胞增殖,促進A549細胞凋亡,延緩細胞周期進程的作用,且與化療藥物有協(xié)同作用,但對正常細胞MRC-5影響卻較小。其機制可能與3-Br PA抑制肺癌細胞內(nèi)己糖激酶活性、阻斷其糖酵解進程,進而使肺癌細胞能量代謝受到影響有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 3-溴丙酮酸 糖酵解 己糖激酶
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 1. 前言11-13
• 2. 實驗材料、試劑、設(shè)備13-15
• 3. 實驗方法15-21
• 4. 結(jié)果21-31
• 5. 討論31-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻36-40
• 文獻綜述 3-溴丙酮酸抗腫瘤研究進展40-47
• 參考文獻44-47
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章47-48
• 致謝48

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃筠;魏莉;熊一向;;艾灸血清對人肺腺癌細胞株A549體外生長的影響[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2010年12期

2 李文艷;朱s，

本文編號：409779