發(fā)布時(shí)間：2017-05-31 15:00

  本文關(guān)鍵詞：3-溴丙酮酸聯(lián)合順鉑抑制肺癌細(xì)胞株A549生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景目前肺癌已成為我國(guó)乃至全球范圍內(nèi)發(fā)病及死亡率均居首位的惡性腫瘤,并且其發(fā)病率和死亡率呈日益上升的態(tài)勢(shì)[1-2],以表皮生長(zhǎng)因子選擇性酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)為代表的分子靶向治療的應(yīng)用,盡管取得了引人矚目的療效,但緊接著出現(xiàn)的耐藥使其治療陷入瓶頸[3-4]。近年來(lái)研究表明惡性腫瘤細(xì)胞中糖酵解明顯增強(qiáng),且糖酵解在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色[5-6],大量研究顯示通過(guò)抑制異常糖酵解可抑制多種腫瘤生長(zhǎng),甚至可殺死腫瘤細(xì)胞,3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-Br PA)作為己糖激酶抑制劑這種抑制作用尤為明顯,并有望作為新型抗腫瘤藥物用于臨床。目前關(guān)于3-Br PA對(duì)肺癌作用的研究國(guó)內(nèi)外極為少見(jiàn),其對(duì)肺癌作用的具體機(jī)制也不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究擬觀(guān)察3-BrPA、順鉑單用及聯(lián)用對(duì)肺癌細(xì)胞株A549增殖的影響,并初步探討3-Br PA對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用及其可能機(jī)制。目的觀(guān)察3-Br PA、順鉑單用及聯(lián)用對(duì)肺癌細(xì)胞株A549增殖的影響,并初步探討3-BrPA對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用及其可能機(jī)制。方法1應(yīng)用CCK-8(cell counting kit-8)法觀(guān)察不同濃度的順鉑、3-Br PA單用及聯(lián)用處理的A549、MRC-5細(xì)胞在24h、48h、72小時(shí)的增殖情況。2選擇低于IC50(half maximal inhibitory concentration,半抑制濃度)的3-BrPA(40μmol/L)與順鉑(1 mg/L)單獨(dú)及聯(lián)合作用于A549細(xì)胞,用藥48 h后在倒置相差顯微鏡下觀(guān)測(cè)各組A549細(xì)胞的形態(tài)變化,使用流式細(xì)胞儀測(cè)定各組A549細(xì)胞的凋亡率;流式細(xì)胞儀分析不同濃度的3-BrPA處理A549細(xì)胞48 h后各組細(xì)胞周期分布,并計(jì)算細(xì)胞增殖指數(shù)。3不同濃度的3-Br PA處理A549細(xì)胞48h后,應(yīng)用己糖激酶(hexokinase,HK)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)3-BrPA對(duì)各組細(xì)胞內(nèi)己糖激酶活性的影響。結(jié)果13-brpa對(duì)a549細(xì)胞生長(zhǎng)的影響:當(dāng)3-brpa濃度高于20μmol/l時(shí),與陰性對(duì)照組比較,其對(duì)a549細(xì)胞具有明顯的抑制作用(p0.01),并且隨著3-brpa濃度的增高、作用時(shí)間延長(zhǎng),其增殖抑制作用明顯增強(qiáng)(p0.05)。且與單用3-brpa、順鉑組比較,聯(lián)合用藥組對(duì)a549細(xì)胞的增殖抑制作用顯著增強(qiáng)(p0.01)。3-brpa對(duì)mrc-5細(xì)胞增殖的影響:cck-8結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組比較,當(dāng)濃度在0~80μmol/l范圍內(nèi)時(shí),3-brpa對(duì)mrc-5細(xì)胞無(wú)明顯增殖抑制作用(p0.05),而當(dāng)3-brpa的濃度范圍為80-160μmol/l時(shí)對(duì)mrc-5僅有輕微抑制作用,3-brpa對(duì)a549細(xì)胞的抑制作用在同時(shí)間點(diǎn)以及同濃度均顯著高于其對(duì)mrc-5細(xì)胞的抑制作用(p0.01)。2倒置相差顯微鏡觀(guān)察到用藥處理a549細(xì)胞48h后,3-brpa組表現(xiàn)為大多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡改變,而聯(lián)合用藥組凋亡細(xì)胞數(shù)量更多,且凋亡改變更加明顯,部分區(qū)域甚至呈現(xiàn)細(xì)胞碎片、空泡化改變等細(xì)胞壞死征象;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,與對(duì)照組的a549細(xì)胞凋亡率(8.103±2.590)%相比較,順鉑組(20.700±5.172)%、3-brpa組(53.417±5.259)%和3-brpa與順鉑聯(lián)用組(77.953±3.587)%的細(xì)胞凋亡率均顯著增高(p0.01),而聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率較單一用藥組顯著增高(p0.01);流式細(xì)胞儀分析不同濃度的3-brpa處理a549細(xì)胞48h后的細(xì)胞周期結(jié)果提示隨著3-brpa濃度增高,處于g1期的a549細(xì)胞明顯增多(p0.01),同時(shí)處于s期的a549細(xì)胞明顯減少(p0.01),細(xì)胞較多的被阻滯于g1期,而s期和g2/m期細(xì)胞比例顯著下降,a549細(xì)胞的增殖指數(shù)隨3-brpa濃度增高而降低。3不同濃度的3-brpa作用于a549細(xì)胞48h后:己糖激酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示用藥組細(xì)胞內(nèi)己糖激酶活性顯著低于陰性對(duì)照組,且隨著3-brpa濃度增高,細(xì)胞內(nèi)己糖激酶活性逐漸降低。結(jié)論13-brpa具有抑制肺癌a549細(xì)胞增殖的作用、并且與順鉑聯(lián)用具有協(xié)同抗肺癌a549細(xì)胞的增殖作用,同時(shí)低濃度3-brpa對(duì)正常細(xì)胞mrc-5細(xì)胞作用不明顯,僅高濃度時(shí)有輕微抑制作用,提示3-brpa具有明顯抑制肺癌a549細(xì)胞增殖的作用,但對(duì)正常細(xì)胞mrc-5的毒性作用卻不明顯,并且與順鉑聯(lián)用具有協(xié)同抗a549細(xì)胞增殖的作用。23-brpa具有誘導(dǎo)a549細(xì)胞凋亡的作用,同時(shí)具有延緩細(xì)胞周期進(jìn)程進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖的作用。3 3-Br PA具有降低A549細(xì)胞內(nèi)己糖激酶活性的作用,并且隨其濃度增加,己糖激酶活性逐漸下降。以上研究提示,在體外3-Br PA具有抑制A549細(xì)胞增殖,促進(jìn)A549細(xì)胞凋亡,延緩細(xì)胞周期進(jìn)程的作用,且與化療藥物有協(xié)同作用,但對(duì)正常細(xì)胞MRC-5影響卻較小。其機(jī)制可能與3-Br PA抑制肺癌細(xì)胞內(nèi)己糖激酶活性、阻斷其糖酵解進(jìn)程,進(jìn)而使肺癌細(xì)胞能量代謝受到影響有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 3-溴丙酮酸 糖酵解 己糖激酶
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 英漢縮略詞對(duì)照表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 1. 前言11-13
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料、試劑、設(shè)備13-15
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法15-21
• 4. 結(jié)果21-31
• 5. 討論31-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 文獻(xiàn)綜述 3-溴丙酮酸抗腫瘤研究進(jìn)展40-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章47-48
• 致謝48

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃筠;魏莉;熊一向;;艾灸血清對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549體外生長(zhǎng)的影響[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2010年12期

2 李文艷;朱s，

本文編號(hào)：409779