目的:肺癌是威脅人類健康的主要癌癥之一,近年來(lái)發(fā)病率不斷升高,這主要由于缺少早期篩查手段,以及有效治療手段。白細(xì)胞介素7主要調(diào)節(jié)B細(xì)胞和T細(xì)胞成熟,此外它在腫瘤細(xì)胞中還發(fā)揮雙重作用。IL-7在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮促腫瘤細(xì)胞增值抗凋亡及促淋巴管生成作用,而在其他腫瘤中扮演抗腫瘤的角色。自噬會(huì)影響腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)代謝,與凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化存在相互作用,還影響腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療藥物的敏感性。因此,本文旨在探索IL-7對(duì)非小細(xì)胞肺癌自噬調(diào)控的機(jī)制。研究方法:1、用蛋白印跡(WB)的方法檢測(cè)各組蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。按照細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī)范方法培養(yǎng)A549細(xì)胞,用IL-7 24ng/ml處理A549細(xì)胞8小時(shí),12小時(shí),并與對(duì)照組做對(duì)比,采用核漿分離的蛋白抽提方法提取p53蛋白,用普通蛋白質(zhì)抽提方法提取總蛋白和磷酸化蛋白,用WB的方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組蛋白變化差異,用SPSS軟件分析差異有否統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用Anti-IL-7R抗體100ng/ml與IL-7 24ng/ml處理細(xì)胞12小時(shí),觀察阻斷細(xì)胞的IL-7受體能否阻斷IL-7產(chǎn)生的效應(yīng)。接下來(lái)使用p53抑制劑PFT-α和AMPK抑制劑Compound C刺...

【文章頁(yè)數(shù)】：37 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1.A549細(xì)胞接受IL-7處理8小時(shí)，12小時(shí)以及接受IL-7+A-IL-7R處理后的p53核漿分離A.IL-7作用細(xì)胞12小時(shí)后，觀察到與對(duì)照組相比細(xì)胞核p53含量沒(méi)有明顯變化，而細(xì)胞漿p53

6中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3結(jié)果3.1IL-7介導(dǎo)P53蛋白從細(xì)胞核向細(xì)胞漿轉(zhuǎn)移用IL-7對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，培養(yǎng)0小時(shí)，8小時(shí)，12小時(shí)后按照試劑盒的說(shuō)明書對(duì)細(xì)胞核與細(xì)胞漿蛋白分別抽提。我們觀察到在未處理的情況下，A549細(xì)胞的p53蛋白在細(xì)胞核含量較高，細(xì)胞漿中有少量p5....

圖3.2IL-7處理細(xì)胞12小時(shí)后對(duì)總蛋白的影響

7中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文核漿轉(zhuǎn)移效應(yīng)，右側(cè)柱狀圖分析了蛋白條帶結(jié)果。C.IL-7作用細(xì)胞8小時(shí)和12小時(shí)都可以觀察到p53mRNA水平增加。*代表P<0.05，**代表P<0.01。3.2IL-7影響AMPK和mTOR的磷酸化蛋白表達(dá)對(duì)A549細(xì)胞采用IL-7以及A-IL-7R....

圖3.3使用CompoundC證明AMPK是mTOR的上游圖A.CompoundC會(huì)導(dǎo)致A549細(xì)胞的p-AMPK/AMPK降低，p-mTOR/mTOR升高，這一效應(yīng)與IL-7

8中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖3.3使用CompoundC證明AMPK是mTOR的上游圖A.CompoundC會(huì)導(dǎo)致A549細(xì)胞的p-AMPK/AMPK降低，p-mTOR/mTOR升高，這一效應(yīng)與IL-7相似，右側(cè)的柱狀圖表達(dá)了這一結(jié)果。圖B.CompoundC不引起p53細(xì)胞核與....

圖3.4使用PFT-α證明p53是AMPK,mTOR的上游分子圖A.使用PFT-α抑制p53后，觀察到細(xì)胞p53的核蛋白與漿蛋白都減少，右側(cè)的柱狀圖表達(dá)了這一結(jié)果

9中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖3.4使用PFT-α證明p53是AMPK,mTOR的上游分子圖A.使用PFT-α抑制p53后，觀察到細(xì)胞p53的核蛋白與漿蛋白都減少，右側(cè)的柱狀圖表達(dá)了這一結(jié)果。B.使用PFT-α使總蛋白的p-AMPK/AMPK增加，p-mTOR/mTOR減少，右側(cè)的....

本文編號(hào)：4028834