發(fā)布時(shí)間：2024-05-21 05:19

　　目的:研究沉默ECEL1對(duì)人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表達(dá)的影響。方法:(1)利用ECEL1基因RNA干擾慢病毒感染人肝癌細(xì)胞(BEL-7404),與此同時(shí)設(shè)立對(duì)照組,在熒光顯微鏡下來(lái)觀察肝癌細(xì)胞的慢病毒感染效率;(2)使用qPCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)沉默ECEL1后人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)ECEL1,DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1 mRNA的表達(dá)水平。(3)使用WB技術(shù)檢測(cè)沉默ECEL1后人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)慢病毒感染人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)72h后,熒光顯微鏡下顯示肝癌細(xì)胞狀態(tài)良好,感染效率達(dá)到80%以上;qPCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示ECEL1基因的沉默率高達(dá)84.1%,shECEL1組ECEL1基因的mRNA表達(dá)受到顯著抑制(p<0.05)。(2)qPCR技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞相關(guān)基因mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示:沉默ECEL1后,DUSP1、THBS1、PTEN mRNA表達(dá)上調(diào),EGR1 mRNA表達(dá)下調(diào)。(3)WB技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞相關(guān)基因蛋白質(zhì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1慢病毒感染72h后熒光鏡檢圖

14BCD圖3.1慢病毒感染72h后熒光鏡檢圖A感染慢病毒PSCSI-GFP的人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)(×100)B感染慢病毒PSCSI-GFP的人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)(×200)C感染慢病毒CON053的人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)(×100)D感染慢病毒CON....

圖3.2ECEL1mRNA的表達(dá)

15物無(wú)非特異性引物二聚體并且特異性良好，也未出現(xiàn)擴(kuò)增污染。綜上，表明沉默ECEL1基因的人肝癌細(xì)胞已成功構(gòu)建，可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。表3.2沉默ECEL1基因后mRNA表達(dá)豐度（X±S）及沉默率細(xì)胞分組Average（2-ΔΔCt）STDEV沉默率PshECEL10.1590.015....

圖3.3ECEL1擴(kuò)增曲線

15物無(wú)非特異性引物二聚體并且特異性良好，也未出現(xiàn)擴(kuò)增污染。綜上，表明沉默ECEL1基因的人肝癌細(xì)胞已成功構(gòu)建，可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。表3.2沉默ECEL1基因后mRNA表達(dá)豐度（X±S）及沉默率細(xì)胞分組Average（2-ΔΔCt）STDEV沉默率PshECEL10.1590.015....

圖3.5DUSP1mRNA的表達(dá)

組的1.000±0.026（p<0.05）（表3.3，圖3.5-3.7）。該擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線沒(méi)有主峰的異常增寬，呈單峰圖形，并且沒(méi)有出現(xiàn)雜峰，表明擴(kuò)增產(chǎn)物無(wú)非特異性引物二聚體并且特異性良好，也未出現(xiàn)擴(kuò)增污染。綜上結(jié)果，表明沉默ECEL1基因后，與shCtrl組相比，....

本文編號(hào)：3979662