目的:甲狀腺癌(Thyroid Carcinoma,TC)作為最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥,在過去的幾十年里發(fā)病率不斷上升。雖然BRAF^V600E突變及RET/PTC染色質(zhì)重排在TC病例中的作用已比較明確,但是其它遺傳學(xué)事件還知之甚少,因此,尋找新的分子靶標(biāo)指導(dǎo)早期診斷和進(jìn)行靶向治療具有非常重要的意義。TBX3基因,作為T-box轉(zhuǎn)錄因子家族的重要成員,在胚胎發(fā)育及癌癥發(fā)生中具有重要功能,被報(bào)道在多種癌癥中過量表達(dá),通常扮演癌基因的角色,參與腫瘤發(fā)生的多種生物學(xué)行為。主要通過抑制p53的激活子p14^ARF或CDK激酶抑制劑p21^WAF1/CIP1,以p53依賴及非依賴的方式促進(jìn)癌癥發(fā)生,TBX3在甲狀腺乳頭狀癌中的功能尚未見報(bào)道。本課題的主要目的是研究TBX3如何影響甲狀腺乳頭狀癌(PTC)的發(fā)生、發(fā)展,探討TBX3在PTC中異常表達(dá)存在的可能分子機(jī)制。方法:第一部分:研究TBX3在甲狀腺乳頭狀癌臨床標(biāo)本中的表達(dá)情況及分析TBX3表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。該部分主要從三個(gè)方面進(jìn)行研究。首先,收集98例甲狀腺乳頭狀癌病人組織,...

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、TBX3在PTC臨床標(biāo)本中的表達(dá)
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 甲狀腺乳頭狀癌病理切片、RNA和蛋白
        1.1.2 乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞系
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 主要溶液、緩沖液和培養(yǎng)基
        1.1.5 主要儀器和設(shè)備
        1.1.6 實(shí)驗(yàn)方法及流程
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TBX3的表達(dá)
        1.2.2 PTC組織中mRNA和蛋白水平TBX3的表達(dá)情況
        1.2.3 PTC細(xì)胞系中檢測(cè)TBX3的表達(dá)情況
        1.2.4 TBX3表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、TBX3蛋白促進(jìn)PTC細(xì)胞增殖
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 細(xì)胞、菌種和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要溶液、緩沖液與培養(yǎng)基
        2.1.4 主要儀器、設(shè)備
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法及流程
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 應(yīng)用siRNA瞬時(shí)敲低TBX3檢測(cè)細(xì)胞增殖變化
        2.2.2 應(yīng)用shRNA穩(wěn)定敲低TBX3檢測(cè)細(xì)胞增殖變化
        2.2.3 慢病毒穩(wěn)定過表達(dá)TBX3檢測(cè)細(xì)胞增殖變化
        2.2.4 應(yīng)用RNA-seq尋找下游靶基因
        2.2.5 研究p57KIP2水平變化對(duì)于TBX3促PTC發(fā)生功能的影響
        2.2.6 TBX3促進(jìn)PTC發(fā)生發(fā)展的在體作用
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、TBX3蛋白調(diào)控p57KIP2表達(dá)的具體分子機(jī)制研究
    3.1 對(duì)象和方法
        3.1.1 細(xì)胞、菌種和質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要溶液、緩沖液和培養(yǎng)基
        3.1.4 主要儀器和設(shè)備
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)方法及流程
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 蟲熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 蟲熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TBX3蛋白調(diào)控CDKN1C的轉(zhuǎn)錄活性
        3.2.3 內(nèi)源性TBX3蛋白與PRC2復(fù)合物及HDAC1/2的胞內(nèi)結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 ChIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TBX3與CDKN1C啟動(dòng)子結(jié)合能力
        3.2.5 DNApulldown實(shí)驗(yàn)證明TBX3與p57KIP2啟動(dòng)子處的結(jié)合程度
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 轉(zhuǎn)錄因子TBX3的結(jié)構(gòu)及功能研究
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3974208