目的：LukS-PV是金黃色葡萄球菌分泌的PV-殺白細(xì)胞素(Panton-Valentine leucocidin,PVL)兩個(gè)組分之一,本課題前期研究發(fā)現(xiàn)重組LukS-PV在體外具有抗白血病效應(yīng)。本課題進(jìn)一步研究LukS-PV對(duì)人單核細(xì)胞白血病THP-1的誘導(dǎo)分化作用,并探討其作用機(jī)制,為尋求白血病新的靶向治療藥物奠定基礎(chǔ)。方法：體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,分別采用0,0.50,1.00,1.50μM LukS-PV刺激細(xì)胞24和48 h。(1)倒置顯微鏡、瑞氏-吉薩姆染色鏡檢等方法觀察LukS-PV作用前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面特異性抗原CD11b, CD14;(3)熒光顯微鏡觀察細(xì)胞吞噬功能；(4)Transwell方法檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力；(5)Western blotting檢測(cè)MAPK通路相關(guān)蛋白及其磷酸化表達(dá)；(6) P38, JNK, ERK通路抑制劑干預(yù)處理,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面特異性抗原CDllb, CD14。結(jié)果：(1)經(jīng)LukS-PV刺激的THP-1細(xì)胞由分散、懸浮轉(zhuǎn)變?yōu)轲じ�、貼壁,且呈梭形。細(xì)胞體積增大,胞質(zhì)增多,核質(zhì)比例縮小,細(xì)胞核呈...

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
ABSTRACT
1 前言
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試劑配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 LukS-PV蛋白表達(dá)和純化
        2.2.3 蛋白定量
        2.2.4 細(xì)胞總蛋白的提取
        2.2.5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.6 細(xì)胞表面分化抗原檢測(cè)
        2.2.7 細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)
        2.2.8 Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移
        2.2.9 Western blotting檢測(cè)相關(guān)蛋白
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
3 結(jié)果
    3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 細(xì)胞表面抗原CD11b和CD14的表達(dá)
    3.3 細(xì)胞吞噬功能的檢測(cè)
    3.4 細(xì)胞侵襲和遷移能力的檢測(cè)
    3.5 MAPK通路相關(guān)蛋白及磷酸化表達(dá)
    3.6 轉(zhuǎn)錄因子及磷酸化表達(dá)
    3.7 P38,JNK,ERK通路抑制劑對(duì)LukS-PV誘導(dǎo)的THP-1分化影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3765268