背景:結(jié)直腸癌（colorectal cancer,CRC）發(fā)病率和死亡率的持續(xù)升高已經(jīng)嚴重威脅到人類的健康和生命,但促使CRC進展的具體分子機制仍尚未明了。多項研究證實CRC的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移符合腫瘤線性進展模型,提示CRC原發(fā)灶累積一系列基因突變以驅(qū)動腫瘤發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移。有學者通過生物信息數(shù)據(jù)庫對比分析,發(fā)現(xiàn)CRC組織表達了“肝臟特異性”分泌蛋白—血管生成素樣蛋白3（Angiopoietin-like proteins-3,ANGPTL3）。多項研究證實血管生成素樣蛋白與多種惡性腫瘤的進展密切相關,我們據(jù)此推測ANGPTL3可能是CRC發(fā)生發(fā)展中累積突變之一,并參與和促進CRC惡性進展。目的:明確ANGPTL3在CRC組織標本及CRC細胞株的表達變化及其臨床病理相關性;闡明ANGPTL3對CRC細胞株生物學行為的調(diào)控作用;探究ANGPTL3影響CRC生物學行為的具體分子機制,為臨床CRC精準醫(yī)療或靶向治療提供新的理論依據(jù)和分子靶點。方法:利用Oncomine腫瘤生物數(shù)據(jù)庫通過生物信息分析,明確ANGPTL3在CRC及正常腸組織的表達差異;通過qRT-PCR和Western blot檢... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1 結(jié)直腸癌的流行病學
    1.2 結(jié)直腸癌的發(fā)生
    1.3 血管生成素樣蛋白與腫瘤
    1.4 研究目的、意義、內(nèi)容及實驗設計方案
        1.4.1 研究目的和意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
        1.4.3 實驗設計方案
第二章 ANGPTL3 在結(jié)直腸癌的表達及臨床病理相關性分析
    2.1 材料
        2.1.1 結(jié)直腸癌組織樣本
        2.1.2 結(jié)直腸癌細胞株
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 主要儀器設備
    2.2 方法
        2.2.1 細胞復蘇、細胞培養(yǎng)、細胞傳代和凍存
        2.2.2 細胞及組織中RNA的提取
        2.2.3 細胞及組織中RNA的逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 熒光定量PCR反應
        2.2.5 細胞及組織中蛋白的提取
        2.2.6 蛋白印跡
        2.2.7 免疫組化
        2.2.8 統(tǒng)計學分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 ANGPTL3 在結(jié)直腸癌組織的表達上調(diào)
        2.3.2 ANGPTL3 在結(jié)直腸癌細胞株的表達
        2.3.3 ANGPTL3 在結(jié)直腸癌的表達及臨床病理相關性分析
    2.4 討論
第三章 ANGPTL3 對結(jié)直腸癌細胞生物學行為的調(diào)控作用
    3.1 材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 主要試劑及耗材
        3.1.3 主要儀器設備
    3.2 方法
        3.2.1 細胞復蘇、細胞培養(yǎng)、細胞傳代和凍存
        3.2.2 細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.2.3 CCK-8檢測細胞增殖能力
        3.2.4 平板克隆形成實驗
        3.2.5 Transwell細胞遷移實驗
        3.2.6 劃痕實驗
        3.2.7 蛋白印跡
        3.2.8 統(tǒng)計學分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 過表達及干擾效率檢測
        3.3.2 ANGPTL3 促進結(jié)直腸癌細胞體外增殖能力
        3.3.3 ANGPTL3 促進結(jié)直腸癌細胞的體外遷移能力
        3.3.4 ANGPTL3 促進腫瘤相關經(jīng)典信號途徑的活化
    3.4 討論
第四章 ANGPTL3 影響結(jié)直腸癌生物學行為的分子機制
    4.1 材料
        4.1.1 細胞株
        4.1.2 主要試劑及耗材
        4.1.3 主要儀器設備
    4.2 方法
        4.2.1 構(gòu)建穩(wěn)定敲減ANGPTL3的HCT116 細胞系
        4.2.2 轉(zhuǎn)錄本高通量測序
        4.2.3 分子生物學技術驗證候選靶基因
        4.2.4 統(tǒng)計學分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 構(gòu)建穩(wěn)定干擾ANGPTL3 的結(jié)直腸癌細胞株
        4.3.2 基因差異表達分析
        4.3.3 差異基因富集分析
        4.3.4 篩選ANGPTL3 作用靶蛋白
        4.3.5 驗證候選靶基因功能
    4.4 討論
第五章 腫瘤動物模型驗證ANGPTL3 對體內(nèi)成瘤的影響
    5.1 材料
        5.1.1 細胞株
        5.1.2 實驗動物
    5.2 方法
        5.2.1 構(gòu)建細胞系腫瘤動物模型
        5.2.2 統(tǒng)計學分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 ANGPTL3 可能通過MAPK14 促進了結(jié)直腸癌細胞的體內(nèi)成瘤
    5.4 討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的科研成果及參加會議
    1.科研成果
    2.參加會議
    3.獲獎情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]結(jié)直腸癌流行病學趨勢[J]. 李道娟,李倩,賀宇彤.  腫瘤防治研究. 2015(03)
[2]夏威夷美籍日本人與日本本土人群結(jié)腸直腸癌的特征和存活率比較[J]. Sakamoto K.,Machi J.,Prygrocki M.,紀泛撲.  世界核心醫(yī)學期刊文摘(胃腸病學分冊). 2006(08)



本文編號：3690313