目的:多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是一種惡性漿細(xì)胞疾病,目前仍不可治愈。免疫治療因其靶向性及低毒性在MM的治療領(lǐng)域得到了越來越多的關(guān)注和研究。來那度胺（Lenalidomide）是廣泛應(yīng)用的免疫調(diào)節(jié)劑。埃羅妥珠單抗（Elotuzumab,Elo）是繼CD38單克隆抗體Daratumumab之后,第二個被批準(zhǔn)用于治療MM的單克隆抗體藥物,與來那度胺和地塞米松聯(lián)合（E-Rd方案）治療復(fù)發(fā)/難治性MM。埃羅妥珠單抗靶點為信號淋巴細(xì)胞激活分子家族成員7（SLAMF7,也稱為CS1）。雖然E-Rd方案獲得很好的療效,但仍有部分患者出現(xiàn)耐藥。單克隆抗體類藥物耐藥是目前免疫治療的研究熱點。關(guān)于埃羅妥珠單抗耐藥的相關(guān)研究少見。本研究擬通過體內(nèi)及體外研究,探索免疫治療耐藥發(fā)生的機制,尋求新的免疫治療靶點及逆轉(zhuǎn)耐藥。研究方法:1、模擬人體耐藥發(fā)生過程,應(yīng)用小劑量藥物誘導(dǎo)的方法構(gòu)建埃羅妥珠單耐藥（U266/EloR,UE）及來那度胺與埃羅妥珠雙耐藥（U266/R10R/EloR,URE）的骨髓瘤耐藥細(xì)胞系;2、基因表達譜芯片檢測U266野生型（UW）和已經(jīng)構(gòu)建的U266來那度胺單耐... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

266敏感及耐藥細(xì)胞株對埃羅妥珠單抗的藥物敏感性A.來那度胺敏感（U266/WT，UW）及埃羅妥珠耐藥（U266/EloR，UE）細(xì)胞株在與外周血單個核細(xì)胞（PBMC）共培養(yǎng)條件下對埃羅妥珠單抗（Elo）的藥物敏感性

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文113.2基因表達譜芯片分析顯示CCL20在耐藥株中表達下降為進一步探索埃羅妥珠單抗耐藥的可能機制，我們利用基因表達譜芯片來檢測四種細(xì)胞：來那度胺敏感（U266/WT,WT）株、來那度胺單耐藥（U266/R10R,UR）株、埃羅妥珠單耐藥（U266/EolR,UE）株、來那度胺與埃羅妥珠雙耐藥（U266/R10R/EloR,URE）株基因表達的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CCL20在耐藥細(xì)胞系表達明顯下調(diào)（紅色箭頭指示）。圖2.部分敏感及耐藥細(xì)胞的基因表達差異熱圖3.3PCR方法檢測驗證CCL20在耐藥細(xì)胞株及復(fù)發(fā)難治MM患者中表達下降RT-qPCR檢測CCL20的mRNA在四種細(xì)胞系以及MM患者骨髓漿細(xì)胞中的表達，結(jié)果證實：（1）在細(xì)胞系中：與來那度胺敏感株（U266/WT,UW）相比，來那度胺單耐藥（U266/R10R,UR）株、埃羅妥珠單耐藥（U266/EloR,UE）株、來那度胺與埃羅妥珠雙耐藥（U266/R10R/EloR,URE）株CCL20的表達均有不同程度下降，三組均具有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05），其中來那度胺與埃羅妥珠雙耐藥（U266/R10R/EloR,URE）株中CCL20mRNA的表達下降最明顯（p<0.001）（圖3A）這與基因芯片結(jié)果一致；（2）在MM患者中：收集27例初診MM（NDMM）患者骨髓液標(biāo)本以及5例復(fù)發(fā)難治MM(RRMM)的骨髓液標(biāo)本，提取并分離骨髓

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文12CD138+漿細(xì)胞，進行PCR檢測，結(jié)果顯示：與初治MM相比，復(fù)發(fā)難治MM患者CCL20的mRNA表達水平下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）（圖3B）。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。圖3.RT-qPCR驗證CCL20基因的相對表達A.CCL20在四種骨髓瘤細(xì)胞系中的相對表達B.CCL20在初治MM患者與復(fù)發(fā)難治MM患者中的相對表達3.4生物信息學(xué)分析CCL20在復(fù)發(fā)難治MM中表達下降進一步我們利用公共數(shù)據(jù)庫進行驗證，采用R語言下載GEO數(shù)據(jù)庫中GSE16791、GSE31504和GSE51317的基因表達譜芯片數(shù)據(jù)進行作圖和統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示：與初治MM患者相比，復(fù)發(fā)難治MM患者骨髓漿細(xì)胞CCL20表達下降，這與我們PCR實驗結(jié)果是一致的（圖4）。AB


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