PKGⅡ?qū)ξ赴┘毎鸈GF/EGFR介導(dǎo)的蛋白質(zhì)表達和蛋白質(zhì)磷酸化的調(diào)控作用
發(fā)布時間：2021-11-29 03:50
Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶（Type Ⅱ cGMP dependent protein kinase,PKG Ⅱ）是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,能夠通過使蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化對相關(guān)的細胞活動發(fā)揮調(diào)控作用。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),PKG Ⅱ能夠通過使EGFR發(fā)生磷酸化,抑制EGFR自身以及其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活,進而影響腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲等生物學(xué)活動,是一種潛在的新型EGFR抑制劑。EGFR是與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)的受體酪氨酸激酶,它的過表達、激活或突變能夠促進腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。包括EGF在內(nèi)的配體與EGFR結(jié)合,可使其酪氨酸激酶活性增加,導(dǎo)致下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的過度活化,使得細胞的多種生物學(xué)活動發(fā)生改變。而在這些改變中,不可避免地要涉及蛋白質(zhì)表達和蛋白質(zhì)磷酸化的改變。我們的前期工作已經(jīng)對PKG Ⅱ抑制EGF/EGFR介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和生物學(xué)活動變化進行了系統(tǒng)的研究和闡述。為進一步了解PKG Ⅱ?qū)GFR的抑制作用,本研究采用蛋白印跡法和雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜分析等方法,觀察了PKG Ⅱ?qū)GFR激活導(dǎo)致的蛋白表達改變和蛋白磷酸化水平改變的抑制/逆轉(zhuǎn)作用。在蛋白質(zhì)表達方面,我們首先研究了PKG...
【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】：102 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
PKGII結(jié)構(gòu)
EGF/EGFR 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)表達和蛋白質(zhì)磷酸化的調(diào)控作用8圖1.2 細胞核EGFR的傳遞及功能相關(guān)作用通路Fig. 1.2 Nuclear EGFR transloction and function(引自Brand TM, et al. Radiother Oncol. 2013 Sep)在上世紀(jì) 80 年代，Wakshul 等人發(fā)現(xiàn) EGF 和 EGFR 的細胞膜復(fù)合物盡管在瞬時反應(yīng)時能夠激活下游的信號通路，但是并不能夠誘導(dǎo) DNA 的合成[61]，對EGFR 可能的核轉(zhuǎn)位提出了猜測，后續(xù)的研究在多種細胞系以及組織中發(fā)現(xiàn)了EGFR 的細胞核定位[62-65]。2001 年，Lin 等發(fā)現(xiàn)了細胞核 EGFR 與組織的高度增殖活性相關(guān)，同時，EGFR的羧基末端包含的強反式激活結(jié)構(gòu)域，能夠融合到 GAL4 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域上[66]。此外
江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文2.3.2 文獻檢索結(jié)果的驗證為進一步明確 PKG II 對 EGF 刺激造成的蛋白表達改變的影響，我們選取了c-MYC、MMP1 和 NOS1 三個蛋白作為研究對象。在本實驗中，我們用先 Ad-PKGII 感染 HGC-27 和 AGS 胃癌細胞，感染 24h 后換無血清培養(yǎng)液饑餓細胞 12h，加入終濃度為 250μM 的 8-pCPT-cGMP 作用使其激活，1h 后加入終濃度為 100ng/mL 的 EGF 刺激細胞，共同作用 24h 后，提取總蛋白。使用 Western blotting檢測其蛋白表達的變化。結(jié)果表明，感染 Ad-PKG II 可使 PKG II 表達增加，與LacZ 組相比 HGC-27 和 AGS 細胞的 c-MYC、金屬基質(zhì)蛋白酶 1（matrixmetalloproteinase1，MMP1）和一氧化氮合成酶 1（nitric oxide synthase 1，NOS1）表達水平明顯升高（p<0.05）；PKG II 和 8-pCPT-cGMP 共同作用后能夠顯著抑制EGF 對胃癌細胞 c-MYC、MMP1 和 NOS1 表達水平升高（p<0.05），結(jié)果見圖 2.1。
【參考文獻】：
博士論文
[1]PKGⅡ?qū)PA誘導(dǎo)的胃癌細胞迀移及RhoA和Rac1激活的影響[D]. 王瑛.江蘇大學(xué) 2015
[2]PKGⅡ?qū)ξ赴┘毎蒃GF/EGFR啟動的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和相關(guān)的生物學(xué)活動的影響[D]. 蔣璐.江蘇大學(xué) 2013
碩士論文
[1]自交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠對胃癌和肝癌細胞轉(zhuǎn)移和增殖抑制作用的研究[D]. 龐吉.江蘇大學(xué) 2016
本文編號：3525783
【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】：102 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
PKGII結(jié)構(gòu)
EGF/EGFR 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)表達和蛋白質(zhì)磷酸化的調(diào)控作用8圖1.2 細胞核EGFR的傳遞及功能相關(guān)作用通路Fig. 1.2 Nuclear EGFR transloction and function(引自Brand TM, et al. Radiother Oncol. 2013 Sep)在上世紀(jì) 80 年代，Wakshul 等人發(fā)現(xiàn) EGF 和 EGFR 的細胞膜復(fù)合物盡管在瞬時反應(yīng)時能夠激活下游的信號通路，但是并不能夠誘導(dǎo) DNA 的合成[61]，對EGFR 可能的核轉(zhuǎn)位提出了猜測，后續(xù)的研究在多種細胞系以及組織中發(fā)現(xiàn)了EGFR 的細胞核定位[62-65]。2001 年，Lin 等發(fā)現(xiàn)了細胞核 EGFR 與組織的高度增殖活性相關(guān)，同時，EGFR的羧基末端包含的強反式激活結(jié)構(gòu)域，能夠融合到 GAL4 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域上[66]。此外
江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文2.3.2 文獻檢索結(jié)果的驗證為進一步明確 PKG II 對 EGF 刺激造成的蛋白表達改變的影響，我們選取了c-MYC、MMP1 和 NOS1 三個蛋白作為研究對象。在本實驗中，我們用先 Ad-PKGII 感染 HGC-27 和 AGS 胃癌細胞，感染 24h 后換無血清培養(yǎng)液饑餓細胞 12h，加入終濃度為 250μM 的 8-pCPT-cGMP 作用使其激活，1h 后加入終濃度為 100ng/mL 的 EGF 刺激細胞，共同作用 24h 后，提取總蛋白。使用 Western blotting檢測其蛋白表達的變化。結(jié)果表明，感染 Ad-PKG II 可使 PKG II 表達增加，與LacZ 組相比 HGC-27 和 AGS 細胞的 c-MYC、金屬基質(zhì)蛋白酶 1（matrixmetalloproteinase1，MMP1）和一氧化氮合成酶 1（nitric oxide synthase 1，NOS1）表達水平明顯升高（p<0.05）；PKG II 和 8-pCPT-cGMP 共同作用后能夠顯著抑制EGF 對胃癌細胞 c-MYC、MMP1 和 NOS1 表達水平升高（p<0.05），結(jié)果見圖 2.1。
【參考文獻】：
博士論文
[1]PKGⅡ?qū)PA誘導(dǎo)的胃癌細胞迀移及RhoA和Rac1激活的影響[D]. 王瑛.江蘇大學(xué) 2015
[2]PKGⅡ?qū)ξ赴┘毎蒃GF/EGFR啟動的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和相關(guān)的生物學(xué)活動的影響[D]. 蔣璐.江蘇大學(xué) 2013
碩士論文
[1]自交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠對胃癌和肝癌細胞轉(zhuǎn)移和增殖抑制作用的研究[D]. 龐吉.江蘇大學(xué) 2016
本文編號：3525783
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