發(fā)布時(shí)間：2017-04-29 01:04

  本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白gp96 3’UTR作為ceRNA通過miR-642a調(diào)控DOHH表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：熱休克蛋白gp96 (glycoprotein 96),也稱作GRP94, HSP90b1, TRA-1, ERp99,作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中最主要的蛋白之一,是細(xì)胞質(zhì)熱休克蛋白HSP90的同源蛋白。熱休克蛋白gp96主要功能為作為分子伴侶幫助新生蛋白的折疊和變性蛋白的降解。我們和他人的研究均發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白gp96在肝癌、乳腺癌、骨髓瘤等多種腫瘤高表達(dá),同時(shí)已經(jīng)查明熱休克蛋白gp96可以與Wnt共受體LRP6、胰島素樣生長(zhǎng)因子、整合素、HER2、uPAR等相互作用,它對(duì)于維持這些腫瘤蛋白的穩(wěn)定性和功能發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,然而熱休克蛋白gp96在調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。MicroRNAs (miRNAs)是一類長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸而且進(jìn)化上非常保守的非編碼小RNA。通常情況下,miRNA會(huì)與靶mRNA的3'-UTR不完全配對(duì)結(jié)合從而導(dǎo)致靶基因的翻譯抑制或降解。它參與了發(fā)育、感染、免疫反應(yīng)和腫瘤轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)過程。近來的研究發(fā)現(xiàn)一些具有相同miRNA應(yīng)答元件(miRNA response element, MRE)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA、假基因編碼RNA、環(huán)形RNA(circular RNA,circRNA)以及部分mRNA.甚至病毒mRNA可作為“海綿”吸附、隔離與其相互作用的miRNA,從而抑制：miRNA的功能,進(jìn)而導(dǎo)致miRNA其它靶基因的表達(dá)上調(diào),實(shí)現(xiàn)對(duì)niRNA靶RNA的豐度或翻譯活性的調(diào)控,從而影響細(xì)胞的功能。本文首先通過生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)熱休克蛋白gp96 3'UTR上miRNA潛在作用靶點(diǎn),通過比較分析我們選擇niR-642a進(jìn)一步研究。利用雙熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)和免疫印跡分析,我們發(fā)現(xiàn)miR-642a可以特異性靶向熱休克蛋白gp96 3'UTR。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,在前列腺癌細(xì)胞中miR-642a可以調(diào)控DOHH的表達(dá)細(xì)胞增殖。為了查明熱休克蛋白gp96 3'UTR對(duì)DOHH表達(dá)的影響,我們?cè)谌烁伟〩uh7細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染了野生型和miR-642a結(jié)合位點(diǎn)突變的gp96 3'UTR的螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒,并通過實(shí)時(shí)實(shí)時(shí)定量PCR、RNA干擾和免疫印跡分析miR-642a和DOHH的mRNA及其蛋白水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在人肝癌Huh7細(xì)胞系中過表達(dá)野生型gp96 3'UTR顯著下調(diào)miR-642a的水平并同時(shí)上調(diào)miR-642a靶基因DOHH的表達(dá)。為進(jìn)一步探討熱休克蛋白gp96 3'UTR是否通過miR-642a調(diào)節(jié)DOHH的表達(dá),我們?cè)谌烁伟〩uh7細(xì)胞系轉(zhuǎn)染了人工合成miR-642a的反義抑制劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在干擾gp96表達(dá)的同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-642a抑制劑,gp96則失去對(duì)DOHH的調(diào)節(jié)作用,說明gp96 3'UTR對(duì)DOHH的調(diào)控是依賴于miR-642a。同時(shí)實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)DOHH并不影響gp96的表達(dá)。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白gp96 3'UTR作為ceRNA正向調(diào)控DOHH的表達(dá),這種調(diào)控作用依賴于miR-642a、不依賴于gp96的蛋白表達(dá)。我們實(shí)驗(yàn)室以及其他人的研究均發(fā)現(xiàn),gp96的mRNA和蛋白表達(dá)在乙肝慢性感染顯著中上調(diào),gp96的表達(dá)水平與慢性乙肝疾病進(jìn)展有著十分密切相關(guān),gp96在肝臟腫瘤中的過量表達(dá)與腫瘤的惡性程度和不良預(yù)后呈現(xiàn)顯著相關(guān)性。目前對(duì)gp96在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制全部集中在其作為分子伴侶蛋白的功能,并且我們的研究發(fā)現(xiàn)gp96 mRNA的3’UTR作為ceRNA可上調(diào)腫瘤基因DOHH的表達(dá),這為深入研究gp96如何參與調(diào)節(jié)肝癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供了一種新思路,為全面分析gp96促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制以及靶向治療提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：熱休克蛋白gp96 microRNA 脫氧羥腐氨酸羥化酶 競(jìng)爭(zhēng)性RNA 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q78;R730.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 英文縮寫詞表8-11
• 第一章 引言11-27
• 1 熱休克蛋白gp96的結(jié)構(gòu)與功能11-18
• 1.1 熱休克蛋白簡(jiǎn)介11-12
• 1.2 熱休克蛋白gp96概述12-18
• 2 MicroRNA的研究進(jìn)展18-27
• 2.1 MicroRNA的發(fā)現(xiàn)及簡(jiǎn)介18-19
• 2.2 MicroRNA的生物合成19-21
• 2.3 MicroRNAs分子作用機(jī)制21-22
• 2.4 MicroRNA的靶點(diǎn)預(yù)測(cè)22-24
• 2.5 競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(ceRNA)假說24-27
• 第二章 gp96 3'UTR作為ceRNA通過miR-642a調(diào)控DOHH的表達(dá)27-57
• 1 實(shí)驗(yàn)材料27-31
• 1.1 細(xì)胞系、質(zhì)粒和菌株27
• 1.2 引物和siRNA27-28
• 1.3 試劑與抗體28
• 1.4 主要儀器28-29
• 1.5 溶液配制29-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-47
• 2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建31-35
• 2.2 質(zhì)粒的定點(diǎn)突變35-36
• 2.3 細(xì)胞傳代、凍存、復(fù)蘇和轉(zhuǎn)染36-38
• 2.4 細(xì)胞內(nèi)總RNA的提取38
• 2.5 RNA的反轉(zhuǎn)錄38-40
• 2.6 實(shí)時(shí)定量PCR40-41
• 2.7 Western bolting41-44
• 2.8 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)44-45
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45-47
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-55
• 3.1 熱休克蛋白gp96 pcDNA3.1表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定47-48
• 3.2 熱休克蛋白gp96 3'UTR含有miR-642a的靶點(diǎn)48-50
• 3.3 熱休克蛋白gp96 3'UTR上調(diào)DOHH的表達(dá)50-52
• 3.4 熱休克蛋白gp96通過miR-642a參與調(diào)控DOHH的表達(dá)52-53
• 3.5 DOHH不影響的熱休克蛋白gp96表達(dá)53-55
• 4 討論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-67
• 作者簡(jiǎn)歷和發(fā)表文章67-69
• 致謝69

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 歐陽應(yīng)斌,黃培堂,黃翠芬;人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)mRNA5′端非翻譯區(qū)(UTR)對(duì)其表達(dá)的調(diào)控[J];科學(xué)通報(bào);1995年10期

2 歐陽應(yīng)斌,黃培堂,黃翠芬;人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)mRNA5′端非翻譯區(qū)(UTR)對(duì)其表達(dá)的調(diào)控[J];生物技術(shù)通訊;1994年02期

3 ;[J];;年期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 袁梅;MMP-9基因3'UTR多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死相關(guān)性及miRNA-491介導(dǎo)的多態(tài)調(diào)控機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 盛春海;熱休克蛋白gp96 3’UTR作為ceRNA通過miR-642a調(diào)控DOHH表達(dá)的研究[D];安徽大學(xué);2016年

2 高飛;豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒5’UTR順式調(diào)控因子的解析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

3 王永強(qiáng);雞傳染性法氏囊病病毒VP3及3’-UTR對(duì)病毒復(fù)制的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

4 楊盼盼;B7-H2基因3’-UTR內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性與胃癌發(fā)生相關(guān)性的研究[D];蘇州大學(xué);2014年

5 石柳;LINE-15'非編碼序列（5'-UTR）在HepG2細(xì)胞中的功能研究[D];北京交通大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白gp96 3’UTR作為ceRNA通過miR-642a調(diào)控DOHH表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：333883