本文關(guān)鍵詞：CD151缺失的結(jié)腸癌細(xì)胞中Wnt信號通路的變化對腫瘤血管生成作用的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)直腸癌(Colorectal Cancer,CRC)是目前最常見的惡性腫瘤之一,而且發(fā)病年齡日趨年輕化,可能與人們逐漸西方化的飲食及生活方式有關(guān)。近年來隨著診斷技術(shù)和治療水平的提高,結(jié)直腸癌患者的生存期明顯延長,但晚期結(jié)直腸癌依然是我國癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一。因此如何抑制腫瘤的進(jìn)展成為亟待解決的難題。人們發(fā)現(xiàn)血管生成在腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用,其中CD151-整合素復(fù)合體可以將細(xì)胞外信號內(nèi)傳,激活細(xì)胞內(nèi)途徑,促進(jìn)血管的增生。近年來Wnt信號通路作為與腫瘤密切相關(guān)的信號通路引起人們廣泛關(guān)注,它可以通過對血管內(nèi)皮生長因子的調(diào)控影響腫瘤血管的生成,但CD151是否能通過Wnt信號通路調(diào)節(jié)腫瘤的血管生成,目前尚不明確。目的:本實(shí)驗(yàn)以人結(jié)腸癌細(xì)胞(HT29)為參考對照,檢測敲除CD151基因的HT29細(xì)胞(CD151~--HT29)中β-catenin基因及蛋白的表達(dá)變化,并對比觀察兩種細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長及血管增生的差異,探討CD151基因的表達(dá)通過結(jié)腸癌中Wnt/β-catenin信號通路影響血管增生的機(jī)制。方法:1運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對HT29細(xì)胞及CD151~--HT29細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng),觀察其生長狀態(tài),選取對數(shù)生長期的HT29細(xì)胞及CD151~--HT29細(xì)胞,經(jīng)過CK20檢測后用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及動物造模。2運(yùn)用western blotting技術(shù)分別檢測HT29細(xì)胞和CD151~--HT29細(xì)胞CD151蛋白的表達(dá)情況。3運(yùn)用Real-Time PCR技術(shù)分別檢測HT29細(xì)胞和CD151~--HT29細(xì)胞β-catenin m RNA的表達(dá),探究CD151基因缺失狀態(tài)對β-catenin基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。4運(yùn)用western blotting技術(shù)分別檢測HT29細(xì)胞和CD151~--HT29細(xì)胞β-catenin蛋白的表達(dá),探究CD151能否在蛋白水平影響Wnt信號通路的功能。5將實(shí)驗(yàn)用裸鼠隨機(jī)分為2組,分別定義為HT29細(xì)胞組和CD151~--HT29細(xì)胞組,將細(xì)胞接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下,建立移植瘤動物模型,每日觀察裸鼠的生存狀態(tài)及成瘤時間等情況,每三天測量腫瘤體積繪制生長曲線,21天后將荷瘤裸鼠處死,對比觀察其成瘤情況和移植瘤血管生成的差異。結(jié)果:1 Western blotting技術(shù)分別對實(shí)驗(yàn)用HT29細(xì)胞及CD151~--HT29細(xì)胞進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示HT29細(xì)胞存在CD151蛋白的表達(dá),而CD151~--HT29細(xì)胞CD151蛋白表達(dá)缺失。2 Real-Time PCR技術(shù)分別對HT29細(xì)胞和CD151~--HT29細(xì)胞進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示兩種細(xì)胞中β-catenin m RNA的CT值分別為(14.65±1.23)和(14.05±1.16),說明HT29細(xì)胞β-catenin m RNA轉(zhuǎn)錄水平明顯高于CD151~--HT29細(xì)胞,結(jié)果差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 Western blotting技術(shù)分別對實(shí)驗(yàn)用HT29細(xì)胞及CD151~--HT29細(xì)胞進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示HT29細(xì)胞中β-catenin蛋白的表達(dá)量高于CD151~--HT29細(xì)胞,其蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度值分別為(0.186±0.009)、(0.168±0.010),兩者的表達(dá)量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4移植瘤檢測(1)HT29細(xì)胞組及CD151~--HT29細(xì)胞組瘤重分別為(1.175±0.127)、(1.059±0.142),結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明CD151~--HT29組腫瘤生長受到抑制。(2)HT29細(xì)胞組和CD151~--HT29細(xì)胞組移植瘤組織經(jīng)CD34染色后計算的MVD值如下:HT29細(xì)胞組(42.20±5.36)個,CD151~--HT29細(xì)胞組(32.80±5.89)個,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1 HT29細(xì)胞移植瘤的增殖速度明顯高于敲除CD151基因HT29細(xì)胞組,推測CD151基因表達(dá)的下調(diào)有抑制結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞生長的作用。2敲除CD151基因HT29細(xì)胞移植瘤組織中腫瘤血管的生成明顯減少,推測CD151基因表達(dá)可能參與腫瘤血管生成的調(diào)控。3 CD151基因表達(dá)的下調(diào)同時伴有細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白水平下降,推測敲除CD151基因可能通過調(diào)控Wnt信號通路的功能,抑制腫瘤血管的生成和腫瘤細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 CD151 Wnt信號通路 β-catenin 腫瘤血管生成
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-26
• 附圖26-30
• 附表30-31
• 討論31-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 綜述 Wnt信號通路與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究進(jìn)展36-55
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：CD151缺失的結(jié)腸癌細(xì)胞中Wnt信號通路的變化對腫瘤血管生成作用的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：330127