本文關(guān)鍵詞：hAMSCs對(duì)小鼠創(chuàng)面HA及膠原表達(dá)的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:初步探討人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)小鼠創(chuàng)面局部移植對(duì)ECM中HA及膠原表達(dá)的影響,完善h AMSCs促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)制研究,為進(jìn)一步將h AMSCs轉(zhuǎn)化到臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)研究。方法:提取h AMSCs,取其生長(zhǎng)良好的第3-5代細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面分子標(biāo)記及成脂和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化鑒定h AMSCs。以96只C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,分為正常組(正常小鼠)、對(duì)照組(DMEM培養(yǎng)基)及實(shí)驗(yàn)組(h AMSCs移植)三組,每組32只動(dòng)物,對(duì)照組小鼠背部脊柱兩側(cè)建立全層皮膚缺損模型(每只2處,共64處),采用DMEM培養(yǎng)基100u L于64處創(chuàng)面周圍皮下環(huán)形注射,實(shí)驗(yàn)組小鼠背部脊柱兩側(cè)建立全層皮膚缺損模型后同法創(chuàng)面周圍皮下環(huán)形注射h AMSCs(1×106個(gè)/m L)100u L,正常組小鼠不制作皮膚創(chuàng)面作為正常對(duì)照。在建模后1天、3天、7天、14天分別切取各組創(chuàng)面模型皮膚標(biāo)本。記錄對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面愈合過程的大體外觀,并通過細(xì)胞示蹤實(shí)驗(yàn)觀察h AMSCs移植后存活狀態(tài),Masson染色觀察膠原積累情況,免疫組織化學(xué)染色后觀察創(chuàng)面皮膚組織高分子量HA陽性表達(dá)情況,q PCR技術(shù)測(cè)定創(chuàng)面皮膚組織中高分子量HA、I、III的基因表達(dá)情況。結(jié)果:人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”形,FCM結(jié)果顯示:第4代h AMSCs均高表達(dá)CD90、CD105、CD73,其陽性率分別96.6%、95.1%、98.1%,低表達(dá)或不表達(dá)CD34、CD11b、CD19、CD45、HLA-DR,其陰性率為0.3%,細(xì)胞成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)21d時(shí)行油紅O染色,可見脂滴處呈紅色;成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)21d行茜素紅S染色,可見紅色鈣化結(jié)節(jié)。實(shí)驗(yàn)組小鼠背部創(chuàng)面3、7、14d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)愈合率分別是33.93±2.71、75.17±3.69、98.1±1.66明顯優(yōu)于對(duì)照組27.29±3.41、62.37±5.24、95.46±2.56(P0.05),并且瘢痕愈合較其他組都小而柔軟;通過細(xì)胞示蹤證明局部移植的h AMSCs在建模14d后依舊存活。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組高分子量HA表達(dá)量,高分子量HA分別在1、3、7、14d表達(dá)為40.321±2.348、49.463±1.976、45.463±2.498、40.463±2.341,其表達(dá)量呈先遞增后降低趨勢(shì),至3d達(dá)到最大表達(dá)量,隨之呈降低變化,對(duì)照組中高分子量HA分別在1、3、7、14d表達(dá)為37.463±2.243、43.463±2.082、36.463±1.932、30.463±2.987,其表達(dá)量與實(shí)驗(yàn)組變化規(guī)律相同,正常組的高分子量HA表達(dá)量均在27.463±2.671范圍內(nèi),每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)均小于實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組,而且實(shí)驗(yàn)組每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)均大于對(duì)照組(P0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。q PCR結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組高分子量HAm RNA表達(dá)在1、3、7、14d分別為0.587±0.046、0.854±0.176、0.679±0.033、0.524±0.066,對(duì)照組0.277±0.033、0.376±0.034、0.261±0.046、0.234±0.024,正常組為0.176±0.076,實(shí)驗(yàn)組III型膠原m RNA表達(dá)在1、3、7、14d分別為0.215±0.014、0.218±0.026、0.225±0.006、0.216±0.048,對(duì)照組0.173±0.009、0.201±0.0035、0.198±0.013、0.199±0.014,正常組為0.151±0.012,實(shí)驗(yàn)組I型膠原m RNA表達(dá)在1、3、7、14d分別為0.251±0.028、0.316±0.045、0.322±0.011、0.298±0.021,對(duì)照組0.505±0.007、0.547±0.079、0.682±0.195、0.719±0.133,正常組為0.146±0.003,其表達(dá)規(guī)律及形式均與免疫組化結(jié)果相對(duì)應(yīng)(P0.05),并且I/III型膠原比值在1、3、7、14d實(shí)驗(yàn)組為1.171±0.046、1.469±0.176、1.434±0.033、1.430±0.066,對(duì)照組為2.926±0.333、2.800±0.034、3.481±0.046、3.602±0.024,正常組為0.971±0.076,對(duì)照組的比值大于實(shí)驗(yàn)組和正常組,實(shí)驗(yàn)組大于正常組(P0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Masson染色切片膠原染呈藍(lán)色,正常組為正常皮膚組織,膠原排列呈網(wǎng)狀,膠原間間隙較大;1d、3d實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組膠原排列緊密,膠原相對(duì)變粗,膠原間隙相對(duì)變小,染色較深;對(duì)照組膠原纖細(xì),排列紊亂,膠原間隙增大,染色較淡;7d、14d實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組膠原排列呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),膠原間間隙增大,膠原相對(duì)變細(xì),對(duì)照組膠原纖維排列紊亂,呈旋渦狀,膠原明顯粗大,膠原間隙排列緊密。結(jié)論:1.h AMSCs可以調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)成分,上調(diào)高分子量HA、III型膠原蛋白,下調(diào)I型膠原蛋白,降低I/III型膠原蛋白比例。2.h AMSCs局部注射對(duì)小鼠背部皮膚缺損具有促進(jìn)愈合的生物學(xué)效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：hAMSCs 細(xì)胞外基質(zhì) 膠原蛋白 透明質(zhì)酸 創(chuàng)面愈合
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R641
【目錄】：

• 中英縮略詞對(duì)照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-20
• 結(jié)果20-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述38-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46-47
• 作者簡(jiǎn)介47

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本文編號(hào)：401823