本文關(guān)鍵詞：慢病毒轉(zhuǎn)GGCX基因?qū)ν霉切躁P(guān)節(jié)炎軟骨細胞的生物學(xué)影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:通過檢測慢病毒介導(dǎo)的γ-谷氨�；然�(Vitamin K dependent gammaglutamyl carboxylase,GGCX)基因轉(zhuǎn)染兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞后對其凋亡的影響,以及對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細胞中MMP13、Ⅱ型膠原和Ⅹ型膠原的影響,探討其對兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞的作用。進而為體外骨性關(guān)節(jié)炎的基因治療提供實驗依據(jù)。研究方法:1、選取12只重量約(2.0±0.2)kg左右的日本雄性大耳兔,運用膝前交叉韌帶切斷的方法構(gòu)建動物模型。對白兔進行6周飼養(yǎng)后處死,對兔膝關(guān)節(jié)的軟骨細胞進行分離以及培養(yǎng),最后運用Alcian Blue染色法以及Ⅱ型膠原纖維染色法對軟骨細胞做鑒定。2、隨機將軟骨細胞分為三個組:空白對照組(不作任何處理)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染不含GGCX慢病毒的空載體)、轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒)。檢測轉(zhuǎn)染成功后分別用q RT-PCR法及Western blot法檢測各組中軟骨細胞中GGCX、MMP13、Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原m RNA及蛋白表達水平。3、運用Annexin V-FITCPI法來檢測各個分組中軟骨細胞的凋亡的情況。4、運用茜素紅染色軟骨細胞進行組織學(xué)檢查。研究結(jié)果:1、兔骨關(guān)節(jié)炎的軟骨細胞在初代中顯現(xiàn)為扁平,多角不規(guī)則,有幾個隆突,胞核為橢圓形,位于胞體中間。Alcian Blue染色軟骨細胞表現(xiàn)天藍色,Ⅱ型膠原纖維染色發(fā)現(xiàn)軟骨細胞和胞外基質(zhì)表現(xiàn)棕色或黃色。2、q RT-PCR檢測結(jié)果示:GGCX在轉(zhuǎn)染組中表達水平明顯升高,MMP13在轉(zhuǎn)染組中的表達水平明顯降低,Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達明顯升高,X型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達水平亦明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),陰性對照組以及空白對照組之間相比較未見顯著差異(P0.05);W-B檢測結(jié)果顯示:GGCX在轉(zhuǎn)染組中表達水平明顯升高,MMP13在轉(zhuǎn)染組中的表達水平明顯降低,Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達水平明顯升高,X型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達水平亦明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),陰性對照組以及空白對照組之間相比較未見明顯的差異(P0.05)。3、運用Annexin V-FITCPI法檢測各個分組凋亡率的結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組總凋亡率為(17.833±2.612)%,與空白對照組總凋亡率(25.467±2.623)%以及陰性對照組總凋亡率(26.167±2.637)%相比明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),陰性對照組以及空白對照組相比較未見明顯差異存在(P0.05)。4、茜素紅染色結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組中軟骨基質(zhì)深染,細胞數(shù)量多,可見少量鈣結(jié)節(jié),空白組和陰性對照組中軟骨基質(zhì)染色均一,大量鈣結(jié)節(jié)形成。結(jié)論:1、采取前叉韌帶切斷大白兔的韌帶能夠成功造出白兔骨關(guān)節(jié)炎的模型,并能夠成功分離培養(yǎng)出兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細胞;2、慢病毒能成功介導(dǎo)GGCX基因轉(zhuǎn)染兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞使其表達顯著增加;3、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒能夠使軟骨細胞Ⅱ型膠原的表達顯著增加;4、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒能夠使軟骨細胞MMP13、X型膠原的表達顯著降低;5、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后能夠使骨性關(guān)節(jié)炎中軟骨細胞的凋亡受到顯著抑制;6、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后能夠使骨性關(guān)節(jié)炎鈣結(jié)節(jié)形成受到顯著抑制。
【關(guān)鍵詞】：關(guān)節(jié)軟骨 骨性關(guān)節(jié)炎 GGCX MMP-13 Ⅱ型膠原 X型膠原 免疫組織化學(xué)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 縮略詞表10-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 材料與方法13-28
• 2.1 材料13-17
• 2.1.1 大耳兔13
• 2.1.2 軟骨細胞13
• 2.1.3 慢病毒來源13
• 2.1.4 主要試劑和實驗設(shè)備13-15
• 2.1.5 主要溶液的配制15-17
• 2.2 實驗方法17-28
• 2.2.1 構(gòu)建模型17
• 2.2.2 細胞分離培養(yǎng)17-19
• 2.2.3 軟骨細胞的鑒定19-20
• 2.2.4 GGCX轉(zhuǎn)染OA細胞20-21
• 2.2.5 qRT-PCR法檢測基因表達21-23
• 2.2.6 Western-Blot法檢測目的蛋白表達23-26
• 2.2.7 AV/PI（Annexin V-FITC & PI）染色分析細胞凋亡26
• 2.2.8 統(tǒng)計學(xué)處理26
• 2.2.9 茜素紅染色軟骨細胞26-28
• 第3章 實驗結(jié)果28-36
• 3.1 構(gòu)建兔OA模型28
• 3.2 細胞形態(tài)學(xué)觀察和鑒定28-31
• 3.2.1 形態(tài)學(xué)觀察28
• 3.2.2 軟骨細胞鑒定28-31
• 3.3 qRT-PCR法檢測GGCX、MMP13、Ⅱ型膠原、X型膠原mRNA表達31-32
• 3.4 Western-Blot檢測蛋白32-34
• 3.5 細胞凋亡檢測34
• 3.6 茜素紅染色結(jié)果34-36
• 第4章 討論36-39
• 第5章 結(jié)論與展望39-40
• 5.1 結(jié)論39
• 5.2 展望39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻41-43
• 綜述 骨性關(guān)節(jié)炎的研究進展43-49
• 參考文獻46-49

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何清義,李起鴻,許建中,楊柳;轉(zhuǎn)化軟骨細胞與正常軟骨細胞的生物特性比較[J];中國臨床康復(fù);2002年10期

2 王小虎;衛(wèi)小春;陳維毅;;軟骨細胞力學(xué)特性的研究進展[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年21期

3 沈雁,唐毅,李斯明,鐘燦燦,梁佩紅;堿性成纖維細胞生長因子與透明質(zhì)酸對培養(yǎng)兔軟骨細胞的作用[J];中華創(chuàng)傷雜志;2000年06期

4 林建華,吳朝陽,許衛(wèi)紅;不同培養(yǎng)時間軟骨細胞的生物學(xué)特性[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2000年02期

5 張文濤,盧世璧,黃英,李楠;軟骨細胞形態(tài)對其縫隙連接的影響[J];中國創(chuàng)傷骨科雜志;2000年04期

6 楊物鵬,許建中;軟骨細胞培養(yǎng)及其調(diào)控[J];中國矯形外科雜志;2000年08期

7 楊彩榮;軟骨細胞培養(yǎng)及其調(diào)控因素研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊;2002年03期

8 張文濤,盧世璧,黃英,李楠;軟骨細胞形態(tài)、表型與胞間通訊研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2002年05期

9 楊運東 ,陳基長;不同施加因素對軟骨細胞的影響[J];中醫(yī)正骨;2002年09期

10 張艷,柴崗,崔磊,劉偉,曹誼林;不同類型人軟骨細胞體外生物學(xué)特性比較[J];中華實驗外科雜志;2003年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張春雷;孫美樂;姚洪菊;;抗氧化劑和透明質(zhì)酸對軟骨細胞的保護作用[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 任宏造;;軟骨細胞的超生結(jié)構(gòu)病理[A];第六次全國電子顯微學(xué)會議論文摘要集[C];1990年

3 張楊;崔麗;郭悅;孫曉雷;李秀蘭;;滑膜細胞微環(huán)境對軟骨細胞生物學(xué)活性的影響[A];第十八屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

4 柏濤;;骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)表達軟骨細胞表型的研究進展[A];玉溪市第三屆二次骨科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

5 周紅輝;萬福生;;人骨髓間充質(zhì)干細胞分化為軟骨細胞的實驗研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

6 王正輝;吳寶俊;許珉;;殼聚糖/明膠復(fù)合不同軟骨細胞體外構(gòu)建組織工程軟骨的實驗研究[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

7 馬劍雄;馬信龍;張華鋒;張園;王志鋼;楊陽;;生物力學(xué)因素在激素性股骨頭壞死中對軟骨細胞的作用[A];2009第十七屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

8 李建華;黃建榮;康奕飛;許繼德;涂永生;;體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細胞分化為軟骨細胞的研究[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

9 石印玉;曹月龍;馮偉;鄭昱新;石瑛;王翔;;補腎、柔肝中藥對軟骨細胞生物功能的影響[A];2004'中華中醫(yī)藥科技成果專輯[C];2004年

10 許道榮;金丹;肖庭輝;余斌;;長時間拉伸應(yīng)變對軟骨細胞生化環(huán)境的影響[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會論文選集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 聶翠蓉;英科學(xué)家從成人骨骼中找到軟骨干細胞[N];科技日報;2008年

2 吳一福;西安交大：用人胎兒軟骨細胞培養(yǎng)成功軟骨組織工程種子細胞[N];中國醫(yī)藥報;2006年

3 中文;人體軟骨舉足輕重[N];廣東科技報;2000年

4 劉霞;英用患者組織細胞成功培育出再生軟骨[N];科技日報;2010年

5 保健時報特約記者 方序;體外“養(yǎng)”一塊軟骨補膝蓋[N];保健時報;2011年

6 記者 張可喜;培養(yǎng)軟骨細胞[N];新華每日電訊;2002年

7 健康時報記者 李海清;軟骨破了打“補丁”[N];健康時報;2009年

8 楊春;藥物增高不可信[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

9 黃楓 謝國平;中醫(yī)藥治療膝骨關(guān)節(jié)炎實驗研究進展[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

10 記者 何屹;英國用干細胞成功培育出軟骨組織[N];科技日報;2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王曉鳳;自噬在軟骨發(fā)育不全與軟骨生成中的作用與機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 王勝楠;杜仲苷對IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細胞分解代謝和凋亡的影響及其作用機制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張元民;MiR-145在原發(fā)性膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中的表達及其意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張龍強;整合素β1促進GIT1表達而影響軟骨細胞增殖凋亡的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 馬中希;周期性張應(yīng)力對大鼠生長板軟骨細胞的增殖和凋亡作用[D];華中科技大學(xué);2015年

6 劉艷;BMP-2在骨性關(guān)節(jié)炎中表達的意義及其誘導(dǎo)凋亡及增殖的研究[D];吉林大學(xué);2016年

7 甄允方;軟骨干細胞來源的微囊泡對骨髓間充質(zhì)干細胞分化、增殖的作用及機理的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

8 鄢博;mTORC1通路調(diào)節(jié)PTHrP來調(diào)控軟骨生長、增殖、分化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

9 張國梁;miRNA-502-5p對骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞損傷的生物學(xué)作用及機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

10 薛恩興;地塞米松激活自噬對軟骨細胞衰老影響的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李亮;骨形成蛋白-7促進多孔鉭—軟骨細胞分泌功能及基因表達的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 簡曉蕾;甲狀旁腺激素(1-34)對豚鼠自發(fā)性O(shè)A模型作用的體內(nèi)體外實驗研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 趙陽;堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對多孔鉭—軟骨細胞復(fù)合物細胞增殖及分化影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 趙宏坤;精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（RGD）多肽修飾多孔鉭材料對軟骨細胞粘附性影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 魏麗杰;降鈣素對IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細胞炎性反應(yīng)的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

6 張嶺;國產(chǎn)多孔鉭對大鼠軟骨細胞生物學(xué)行為及功能變化的體外研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

7 史東;uPA-siRNA重組慢病毒載體感染兔軟骨細胞對其增殖情況初步研究[D];石河子大學(xué);2015年

8 劉登榜;可注射型工程化TGF-β_3重組軟骨細胞靶向治療OA的體外研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

9 陶雨雷;17β-雌二醇對骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞mTOR信號通路影響的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

10 侯威宇;骨髓間充質(zhì)干細胞源性微囊泡作用于軟骨細胞NF-kB信號傳導(dǎo)通路機制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒轉(zhuǎn)GGCX基因?qū)ν霉切躁P(guān)節(jié)炎軟骨細胞的生物學(xué)影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：401594