SUMF2基因過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
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【摘要】:目的構(gòu)建硫酸酯酶修飾因子2(SUMF2)基因過表達(dá)慢病毒載體,以便進(jìn)一步研究SUMF2功能。方法針對人SUMF2 DNA序列設(shè)計(jì)帶酶切位點(diǎn)的引物,PCR法獲得目的基因片段;用AgeⅠ和NheⅠ酶雙酶切SUMF2基因片段及PLJM1-EGFP載體。用T4連接酶對兩種酶切產(chǎn)物進(jìn)行連接、PCR鑒定、測序。將陽性克隆質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒及包膜蛋白質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,并熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)。結(jié)果 PCR和測序證實(shí)成功構(gòu)建了SUMF2的慢病毒表達(dá)載體,病毒效價(jià)為1×108TU/ml。結(jié)論成功構(gòu)建SUMF2-PLJM1-EGFP慢病毒載體,并在293T細(xì)胞中得到表達(dá)。
【作者單位】: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四臨床醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】: 硫酸酯酶修飾因子 慢病毒過表達(dá)載體構(gòu)建
【基金】:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171657)
【分類號】:R373
【正文快照】: 硫酸酯酶修飾因子2(sulfatase-modifying factor2,SUMF2)是于2003年首次報(bào)道的一種硫酸酯酶修飾因子,其編碼基因位于人染色體7q11.1。由于SUMF2缺乏酶的催化活性,因此它的具體生物學(xué)功能至今尚不明確。但最近筆者所在實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),SUMF2可以與IL-13相互作用,并能夠抑制其向
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10 殷濤;王春友;熊炯p,
本文編號:996058
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