本文關(guān)鍵詞：家兔皮膚結(jié)核模型對結(jié)核亞單位疫苗EAMM和MH保護(hù)效應(yīng)的評價研究

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【摘要】：目的：利用家兔皮膚結(jié)核液化模型評價結(jié)核亞單位疫苗EAMM (ESAT6-Ag85B-MPT64190-198-Mtb8.4)和MH (Mtb10.4-HspX)的保護(hù)效果,為這兩種疫苗的應(yīng)用奠定基礎(chǔ),同時為結(jié)核疫苗保護(hù)效果的評價提供一種更加方便、直觀的方法。 方法：將家兔隨機(jī)分為五組,即EAMM組、MH組、聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組、BCG組及生理鹽水對照組,每組三只。各組分別以一定劑量與時間免疫(皮下注射)健康家兔。EAMM組、MH組、聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組每隔三周對家兔進(jìn)行免疫,共免疫三次。BCG組僅在亞單位疫苗免疫第一次時對家兔進(jìn)行免疫,生理鹽水對照組免疫時則注射等量生理鹽水。末次免疫六周后,用ELISA檢測各組家兔血清中抗原特異性抗體水平,之后對家兔腹背部皮內(nèi)注射牛分枝桿菌減毒株BCG (5x106CFU),形成家兔皮膚結(jié)核感染病灶。動態(tài)觀察即每日觀察家兔皮膚結(jié)核感染病灶處結(jié)節(jié)的出現(xiàn)及其病理發(fā)展過程,記錄結(jié)節(jié)發(fā)展各時期的形態(tài)及結(jié)節(jié)到達(dá)肉芽腫、破潰、液化高峰以及愈合的時間,每日測量結(jié)節(jié)的大�。灰夯叻迤跁r收集各組家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)中的液化物質(zhì),并對其中的結(jié)核菌載量進(jìn)行計數(shù)；結(jié)核結(jié)節(jié)愈合期時,對結(jié)核結(jié)節(jié)及其周圍的組織進(jìn)行病理切片觀察(HE染色)。 結(jié)果： 1.結(jié)核亞單位疫苗誘導(dǎo)家兔血清中產(chǎn)生高水平的抗原特異性抗體： 生理鹽水對照組抗原特異性抗體水平為陰性。EAMM組的抗ESAT6,抗Ag85B抗原特異性抗體水平和MH組的抗HspX抗原特異性抗體水平均高于BCG組(P0.01)。聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組的抗ESAT6,抗Ag85B,抗HspX抗原特異性抗體水平也明顯高于BCG組(P0.01)。 2.結(jié)核亞單位疫苗和卡介苗BCG加速了家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)的發(fā)展進(jìn)程： BCG組和聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)的液化進(jìn)程較一致并且相比于其它各組較快,在BCG攻毒后第8天即開始液化,破潰最早,在BCG攻毒后第11天結(jié)節(jié)發(fā)生破潰,到達(dá)液化高峰的時間為第13天。液化高峰時BCG組的結(jié)節(jié)體積達(dá)到679.67±62.31mm3,在所有實(shí)驗(yàn)組中最大,明顯大于對照組結(jié)節(jié)體積544.78±64.89mm3(P0.05)。液化時聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組結(jié)節(jié)體積在各組中最小,液化高峰時僅達(dá)到380.15±53.85mm3,顯著小于對照組結(jié)節(jié)體積544.78±64.89mm3(P0.05)。BCG組和聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組結(jié)節(jié)最先開始愈合,液化高峰期過后,在BCG攻毒后的第29天這兩組結(jié)節(jié)開始愈合。 EAMM和MH組家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)的液化進(jìn)程相比于BCG組和聯(lián)合疫苗組較慢,然而相比于生理鹽水對照組則較快,在BCG攻毒后第13天發(fā)生破潰,第15天達(dá)到液化高峰。生理鹽水組在攻毒后第15天發(fā)生破潰,第17天達(dá)到液化高峰。液化高峰時EAMM組的結(jié)節(jié)體積為504.35±65.46mm3, MH組的結(jié)節(jié)體積為544.05±63.60mm3,顯著小于BCG組結(jié)節(jié)體積679.67±62.31mm3(P0.05),大于聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組結(jié)節(jié)體積380.15±53.85mm3(P0.05)。 3.結(jié)核亞單位疫苗降低家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)液化高峰期時液化物質(zhì)中的結(jié)核菌載量： 聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組液化物質(zhì)中的結(jié)核菌載量為各組中最低,對液化高峰時膿液中結(jié)核菌進(jìn)行培養(yǎng)計數(shù),聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組結(jié)核菌載量是1.38×106CFU/g,明顯低于生理鹽水對照組液化物質(zhì)中結(jié)核菌載量(5.34x106CFU/g)(P0.05), BCG組結(jié)核菌載量(3.20×106CFU/g)僅低于對照組結(jié)核菌載量(5.34×106CFU/g)(P0.05). EAMM組液化高峰時結(jié)核菌載量(2.04×106CFU/g)和MH組液化高峰時結(jié)核菌載量(2.13×1O6CFU/g)則介于BCG組和聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)組結(jié)核菌載量之間。 4.各組家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)病理切片檢查結(jié)果(HE染色)顯示病變均是由BCG引起： 對各組家兔愈合時期的結(jié)核結(jié)節(jié)及其周圍組織進(jìn)行病理切片染色觀察,均可見不同程度的炎細(xì)胞浸潤,上皮樣細(xì)胞增生,淋巴細(xì)胞滲出,部分視野可見朗漢斯巨細(xì)胞,壞死區(qū)域及部分未吸收的液化組織。 結(jié)論： 結(jié)核亞單位疫苗EAMM和MH在家兔皮膚結(jié)核模型上顯示出了良好的保護(hù)效果：用EAMM和MH免疫家兔后,可提高家兔血清中抗原特異性抗體水平；加快結(jié)核結(jié)節(jié)發(fā)生,發(fā)展的進(jìn)程；降低結(jié)核結(jié)節(jié)液化高峰期時膿液中的結(jié)核菌載量。對家兔抗結(jié)核的保護(hù)效果以聯(lián)合疫苗(EAMM+MH)最為顯著。同時,家兔皮膚結(jié)核模型病理特點(diǎn)與人類結(jié)核接近,并且方便,直觀,因此可利用它來評價結(jié)核疫苗的保護(hù)效果。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核病 亞單位疫苗 卡介苗 家兔模型 液化
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 縮略詞說明3-4
• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 第一章 前言11-18
• 1.1 結(jié)核病現(xiàn)狀11-12
• 1.2 肺結(jié)核結(jié)核病灶病理特點(diǎn)及液化機(jī)制12-13
• 1.3 卡介苗BCG及其局限性13-14
• 1.4 新型結(jié)核疫苗14-16
• 1.5 疫苗評價動物模型的選擇16-18
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-30
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.2 主要儀器設(shè)備19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法19-30
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-38
• 3.1 結(jié)核亞單位疫苗誘導(dǎo)家兔血清中產(chǎn)生高水平的抗原特異性抗體30-31
• 3.2 結(jié)核亞單位疫苗和卡介苗加速了家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)的發(fā)展進(jìn)程31-34
• 3.3 結(jié)核亞單位疫苗降低家兔皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)液化物質(zhì)中結(jié)核菌載量34-37
• 3.4 皮膚結(jié)核結(jié)節(jié)病理切片檢查(HE染色)顯示病變由BCG引起37-38
• 第四章 討論38-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果及參與課題48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王明珠;史大中;楊愛軍;焦志剛;祝秉東;張穎;;分枝桿菌所致家兔皮膚液化病理模型研究[J];微生物與感染;2008年04期

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本文編號：989880