本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌c-di-AMP合成酶的表達(dá)和純化以及小鼠多抗血清的制備

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核病 結(jié)核分枝桿菌 c-di-AMP 原核表達(dá) 抗體

【摘要】：目的表達(dá)和純化結(jié)核分枝桿菌c-di-AMP合成酶,并制備多克隆抗體,為研究c-di-AMP在MTB生理過程中的作用奠定基礎(chǔ)。方法從MTB基因組中PCR擴(kuò)增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,構(gòu)建原核表達(dá)載體,序列鑒定后,IPTG誘導(dǎo)目的基因表達(dá),采用Western-blot鑒定目的蛋白,并用離子親和層析法純化重組蛋白;用純化蛋白經(jīng)背部皮下免疫小鼠,收集小鼠血清,用免疫學(xué)方法測(cè)定抗體滴度及其特異性。結(jié)果 PCR成功擴(kuò)增Rv3586基因,限制性酶切分析和序列測(cè)定結(jié)果表明成功構(gòu)建原核表達(dá)載體;表達(dá)的重組c-di-AMP合成酶蛋白分子質(zhì)量大小約43ku,該蛋白可被抗His標(biāo)簽抗體和感染小鼠血清識(shí)別。用純化蛋白免疫小鼠,初次免疫后抗體滴度可達(dá)1，

本文編號(hào)：987501