本文關(guān)鍵詞：Sulfiredoxin-1對雙氧水誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究

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【摘要】：背景：氧化應(yīng)激能夠?qū)е麦w內(nèi)多種細(xì)胞及蛋白質(zhì)過氧化，并對帕金森病、阿爾茨海默病以及缺血性腦病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。Sulfiredoxin-1(Srxn1)為一種內(nèi)源性抗氧化蛋白，具有神經(jīng)保護(hù)作用。然而，Srxn1在氧化應(yīng)激中的作用機(jī)制還未被深入研究。 目的：探討Srxn1對雙氧水誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的抗氧化保護(hù)作用及其潛在機(jī)制。 方法：（1）用不同濃度（60uM,100uM,140uM,180uM,200uM,240uM）的H_2O_2作用于PC12細(xì)胞24h，通過MTT和LDH測定從中篩選出最適H_2O_2濃度。再用該濃度作用于PC12細(xì)胞不同時間（3h,6h,12h,24h,48h），通過MTT和LDH測定從中篩選出最適H_2O_2時間。（2）構(gòu)建三條Srxn1干擾質(zhì)粒載體（PLVT574，PLVT575，PLVT576）及一條陰性載體（PLVT4），通過脂質(zhì)體（Lipofectamine2000）瞬時轉(zhuǎn)染給PC12細(xì)胞，在倒置顯微鏡和熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及轉(zhuǎn)染效率，用RT-PCR和Western Blot測定干擾效率。（3）用MTT及LDH試劑盒測定細(xì)胞活性及細(xì)胞損傷程度，用超氧化物歧化酶（SOD）、微量還原型谷胱甘肽測定試劑盒分析細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)。RT-PCR和Western國家自然科學(xué)基金資助（No.81070917和81271460）Blot進(jìn)一步測定Srxn1的表達(dá)與2-Cys Prdxs活性之間的關(guān)系。 結(jié)果：（1）MTT和LDH測定顯示，180uM H_2O_2作用于PC12細(xì)胞24h為最適氧化應(yīng)激模型。（2）RT-PCR和Western Blot分析顯示，與對照組相比，，PLVT574、PLVT576和PLVT4的干擾效率不明顯，PLVT575的干擾效率顯著（P0.01）。（3）MTT和LDH結(jié)果顯示，干擾Srxn1能夠?qū)е录?xì)胞活性的降低及細(xì)胞損傷程度的增加。超氧化物歧化酶（SOD）和微量還原型谷胱甘肽測定試劑盒分析顯示，SOD和GSH在干擾Srxn1的PC12細(xì)胞中表達(dá)降低。RT-PCR和Western Blot分析顯示，Srxn1的減少與2-Cys Prdxs的活性降低有關(guān)，且2-Cys Prdxs的水平在H_2O_2處理的PC12細(xì)胞中升高。 結(jié)論：這些結(jié)果表明Srxn1能夠保護(hù)PC12細(xì)胞免受H_2O_2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，且這種保護(hù)作用與Prdxs的活性有關(guān)。Srxn1能夠發(fā)揮抗氧化損傷的保護(hù)作用，因此Srxn1有望成為神經(jīng)系統(tǒng)中氧化應(yīng)激干預(yù)的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：氧化應(yīng)激 sulfiredoxin-1 2-Cys Prdxs 神經(jīng)保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分：PC12 細(xì)胞氧化應(yīng)激模型的建立13-20
• 1 實驗材料13-14
• 2 實驗方法14-16
• 3 結(jié)果16-19
• 4 討論19-20
• 第二部分：Srxn1 干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及干擾效率測定20-30
• 1 實驗材料20-22
• 2 試驗方法22-26
• 3 結(jié)果26-28
• 4 討論28-30
• 第三部分：Srxn1 的抗氧化作用及其潛在機(jī)制研究30-39
• 1 實驗材料30-31
• 2 試驗方法31-32
• 3 結(jié)果32-38
• 4 討論38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 文獻(xiàn)綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文52-53

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蘇正元;舒利民;Jong Hun Lee;Franciso Fuentes;王虎;吳天元;余四旺;Ah-Ng Tony Kong;;食用植物成分和中藥用于癌癥化學(xué)預(yù)防:Nrf2,表觀基因組學(xué),癌癥干細(xì)胞(英文)[J];化學(xué)進(jìn)展;2013年09期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 吳星燁;RNA干擾結(jié)腸癌細(xì)胞HIF1-α基因的蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

2 母昌考;中華絨螯蟹（Eriocheir Sinensis）Peroxiredoxin 6和Thioredoxin 1基因的克隆及表達(dá)[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2009年

3 沈琰;成年大鼠去多巴胺能神經(jīng)元支配的紋狀體和胚胎小鼠腹側(cè)中腦發(fā)育的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年

4 唐莉;DBDCT致肝毒性的蛋白質(zhì)組學(xué)及Trxl介導(dǎo)的氧化應(yīng)激機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 齊曉龍;共軛亞油酸對產(chǎn)蛋雞抗氧化機(jī)能的影響[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

6 繆葉;粘液表皮樣癌耐藥機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 曹杉;Delta阿片受體在缺氧再復(fù)氧損傷模型中發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用通過觸發(fā)轉(zhuǎn)錄因子Nrf2核轉(zhuǎn)移[D];中南大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 岳海英;Peroxiredoxin Ⅱ在肝癌組織中的表達(dá)及功能分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

2 楊競;白藜蘆醇抗糖尿病心肌病心肌纖維化作用及機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

3 孫萬良;EGCG對大鼠放射性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

4 辛越;稠李屬三種果實花色苷抗氧化活性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2013年

本文編號：987009