本文關(guān)鍵詞：SELDI-TOF-MS技術(shù)對肝癌裸鼠移植瘤模型體內(nèi)微量蛋白譜分析

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【摘要】：目的：采用Bel-7402人肝癌細(xì)胞懸液接種于3周齡BALB/C裸鼠的左肩背部皮下，構(gòu)建人肝癌裸鼠移植瘤模型，觀察腫瘤大小與生長時(shí)間的相關(guān)性，利用SELDI-TOF-MS技術(shù)對造模成功后不同時(shí)段的裸鼠體內(nèi)差異蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測，分析這些微量蛋白的表達(dá)規(guī)律，旨在尋找新的原發(fā)性肝癌早期診斷標(biāo)志物。方法：將Bel-7402人肝癌細(xì)胞復(fù)蘇，傳代培養(yǎng)3-5次后選擇對數(shù)生長期細(xì)胞配置成濃度為1×107個/ml的癌細(xì)胞懸液，皮下接種于3組實(shí)驗(yàn)組裸鼠左肩背部，劑量為0.1ml/只，對照組裸鼠左肩背部皮下接種相同劑量無血清培養(yǎng)基。密切觀察實(shí)驗(yàn)動物的腫瘤生長情況，每兩周測量并記錄裸鼠腫塊的體積。所有裸鼠均采用摘眼球取血法，對照組和3組實(shí)驗(yàn)組分別在造模成功后20d、40d、60d取血0.5ml/只，然后處死裸鼠，并分離腫瘤組織送病理科進(jìn)行組織切片檢查。裸鼠血液標(biāo)本應(yīng)立即于4℃離心5min，轉(zhuǎn)速為3000rpm，分離樣本血清并分裝編號，凍存于-80℃?zhèn)溆谩?yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測分析裸鼠血清標(biāo)本中的微量蛋白，利用Ciphergen ProteinChip3.0和Ciphergen Biomaker Wizard3.1軟件對得到的蛋白質(zhì)譜圖進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析，篩選出與肝癌相關(guān)的差異表達(dá)蛋白，并在蛋白數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索比對。結(jié)果：裸鼠接種癌細(xì)胞懸液15-20天長出腫塊，成瘤率100%。分析篩選出與肝癌相關(guān)并呈規(guī)律性變化的差異表達(dá)蛋白（P0.01）5個，相對分子質(zhì)量分別為2016Da、3309Da、3442Da、3745Da、2747Da，其中前四種微量蛋白在實(shí)驗(yàn)組裸鼠體內(nèi)表達(dá)逐漸增強(qiáng)，，最后一種微量蛋白在實(shí)驗(yàn)組裸鼠體內(nèi)表達(dá)逐漸減弱。在Swiss-Prot蛋白數(shù)據(jù)庫中對這5組微量蛋白進(jìn)行檢索和鑒定，初步結(jié)果為Protein2A、Potassium channel toxin alpha-KTx20.1、 Serine protease inhibitor2、Neurotoxin P2和LeuA leader peptide。結(jié)論：1.采用Bel-7402人肝癌細(xì)胞懸液皮下接種裸鼠構(gòu)建動物腫瘤模型的方法操作簡便、用時(shí)較短、成瘤率高，為肝癌的科學(xué)研究提供了有效的方法。2.利用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測和篩選肝癌裸鼠移植瘤模型血清中的差異表達(dá)蛋白，可能發(fā)現(xiàn)新的肝癌診斷的血清標(biāo)志物，為肝癌早期診斷研究開辟了新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：SELDI-TOF-MS技術(shù) 原發(fā)性肝癌 蛋白質(zhì)組學(xué) 裸鼠移植瘤模型
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R735.7;R-332
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 技術(shù)路線11-12
• 第一部分 人肝癌裸鼠移植瘤模型構(gòu)建12-18
• 材料與方法12-18
• 第二部分 人肝癌裸鼠移植瘤模型體內(nèi)微量蛋白譜分析18-23
• 材料與方法18-23
• 結(jié)果23-36
• 討論36-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 英漢縮略詞對照表53-55
• 致謝55-56
• 綜述56-64
• 參考文獻(xiàn)61-64

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：980609