本文關(guān)鍵詞：樹(shù)突狀細(xì)胞在人芽囊原蟲(chóng)感染免疫調(diào)節(jié)中的作用

  更多相關(guān)文章： 人芽囊原蟲(chóng) DC表面分子 IL-12 IL-23

【摘要】：目的：研究人芽囊原蟲(chóng)(Blastocystis hominis,B.h)可溶性抗原在體外刺激小鼠DC細(xì)胞(Dendritic cells)對(duì)其表面分子CD40和CD80表達(dá)的影響,體內(nèi)觀察DC細(xì)胞活化所分泌白細(xì)胞介素12(Interleukin12,IL-12)及白細(xì)胞介素23(Interleukin23,IL-23)在感染人芽囊原蟲(chóng)后小鼠外周血中水平的動(dòng)態(tài)變化,從而探討DC活化表達(dá)及所分泌細(xì)胞因子在人芽囊原蟲(chóng)感染免疫應(yīng)答中的作用及臨床意義,為闡明人芽囊原蟲(chóng)免疫應(yīng)答規(guī)律及致病機(jī)制提供一定參考依據(jù)。 方法：IMDM培養(yǎng)基培養(yǎng)人芽囊原蟲(chóng),采用淋巴細(xì)胞分離液純化蟲(chóng)株并以超聲波細(xì)胞破碎儀破碎提取其可溶性抗原。1.體外實(shí)驗(yàn)：DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠DC2.4細(xì)胞,設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組(LPS處理),陰性對(duì)照組(PBS處理),實(shí)驗(yàn)組設(shè)置低濃度抗原(0.5mg/ml)組、高濃度抗原(1.0mg/ml)組、低濃度抗原(0.5mg/ml)合并LPS刺激組、高濃度抗原(1.Omg/ml)合并LPS刺激組,觀察各組細(xì)胞形態(tài),于刺激24h及48h后收集各組細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞表面分子CD40及CD80的表達(dá)。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：對(duì)150只BABL/C小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組,設(shè)置實(shí)驗(yàn)組、免疫抑制組和對(duì)照組,每組50只,實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)灌胃感染人芽囊原蟲(chóng),107個(gè)／鼠,免疫抑制組及對(duì)照組小鼠則灌服等量純培養(yǎng)液,三組小鼠分別于感染后第2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14d天眼珠取血,并用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)外周血中IL-12及IL-23的動(dòng)態(tài)表達(dá)。 結(jié)果：流式檢測(cè)結(jié)果顯示,B.h可溶性抗原體外刺激DC2.4細(xì)胞表面分子CD40、CD80均有表達(dá)；CD40的表達(dá)隨抗原負(fù)荷濃度的增加及刺激時(shí)間延長(zhǎng)而增高(P0.05),刺激24h及48h后,CD40在陽(yáng)性對(duì)照組表達(dá)量分別為60.9±3.6%、61.8±1.9%,在低濃度抗原刺激組表達(dá)量分別為31.7±3.7%、50.2±4.7%,在高濃度抗原刺激組表達(dá)量分別為44.2.±3.3%、50.4±2.7%,在低濃度抗原合并LPS刺激組表達(dá)量分別為62.±3.1%、61.2±2.6%,在高濃度抗原合并LPS刺激組表達(dá)量分別為64.6±4.9%、64.9±3.2,在陰性對(duì)照組表達(dá)量為0.4±1.9%、0.8±3.3%。而CD80的表達(dá)在不同負(fù)荷抗原濃度及刺激時(shí)間組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),刺激24h及48h后,CD80在陽(yáng)性對(duì)照組表達(dá)量分別為49.5±2.6%、51.2±3.7%,在低濃度抗原刺激組表達(dá)量分別為21.1±2.8%、22.2±1.9%,在高濃度抗原刺激組表達(dá)量分別為21.8±3.3%、22.6±2.7%,在低濃度抗原合并LPS刺激組表達(dá)量分別為51.4±4.3%、51.7±3.7%,在高濃度抗原合并LPS刺激組表達(dá)量分別為54.0±4.3%、50.5±1.9,在陰性對(duì)照組表達(dá)量為1.6±1.7%、1.3±2.1%。 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)感染人芽囊原蟲(chóng)小鼠血清中IL-12結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中的表達(dá)水平在早期感染過(guò)程中呈升高趨勢(shì),并于第8d升至峰值(26.34±1.61pg/m1),隨后降低,表達(dá)趨勢(shì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.952,P=0.0480.05),而免疫抑制組與對(duì)照組小鼠血清中IL-12水平在不同時(shí)間感染點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中實(shí)驗(yàn)組小鼠與免疫抑制組及對(duì)照組比較,IL-12在感染后第5、6、7d均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余感染時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。IL-23含量在免疫抑制和對(duì)照組小鼠血清中不同時(shí)間點(diǎn)均穩(wěn)定水平表達(dá),不同時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而在實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中表達(dá)含量隨感染時(shí)間推移逐漸升高,并與第5d升至峰值水平(36.54±2.09pg/m1),隨后逐漸下降至第8d趨于正常水平表達(dá),表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.379,P=0.0370.05)；與免疫抑制組及對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組小鼠血清IL-23含量在感染第5d、6d顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),感染其余時(shí)間點(diǎn)上表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：1.人芽囊原蟲(chóng)可刺激DC活化表達(dá)協(xié)同刺激分子CD80, CD40、CD80的表達(dá)可參與介導(dǎo)感染人芽囊原蟲(chóng)免疫應(yīng)答類型； 2.在人芽囊原蟲(chóng)感染早期過(guò)程中,DC分化成DC1亞群并通過(guò)分泌細(xì)胞因子IL-12. IL-23來(lái)抵抗感染,介導(dǎo)人芽囊原蟲(chóng)感染早期Th1優(yōu)勢(shì)免疫應(yīng)答,隨后DC分化成DC2亞群,向Th2免疫方向偏移。同時(shí)IL-23可能通過(guò)協(xié)同IL-12作用參與人芽囊原蟲(chóng)感染的免疫反應(yīng),且能進(jìn)一步促進(jìn)Th17細(xì)胞介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：人芽囊原蟲(chóng) DC表面分子 IL-12 IL-23
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R382
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-31
• 討論31-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 結(jié)論42-43
• 附錄43-47
• 綜述47-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文58-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：975541