本文關(guān)鍵詞：淫羊藿苷對(duì)EAE模型鼠的治療作用及其對(duì)HPA軸的影響

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【摘要】：背景： 多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘性疾病。其癥狀復(fù)雜，多呈反復(fù)發(fā)作、進(jìn)行性加重、高致殘率等特點(diǎn)。大劑量甲潑尼松龍（methyl prednisolone,MP）等對(duì)緩解癥狀有明顯療效，但目前尚無公認(rèn)有效的可以阻止復(fù)發(fā)進(jìn)展的治療藥物，且大劑量糖皮質(zhì)激素（glucocorticoid,GC）可導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、股骨頭壞死、上消化道出血等嚴(yán)重不良反應(yīng)。國內(nèi)外研究證實(shí)MS多發(fā)于女性，且復(fù)發(fā)進(jìn)展與雌激素水平密切相關(guān)，補(bǔ)充雌激素有益于病情復(fù)發(fā)的控制，且對(duì)GC具有正性調(diào)節(jié)作用，但存在引發(fā)腫瘤、降低免疫力、血栓性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本研究以雌激素作用途徑為切入點(diǎn)，選擇雌激素和確認(rèn)具有雌激素作用的淫羊藿苷（Icraiin,ICA）為治療藥物，通過對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE）模型神經(jīng)損害、病理、細(xì)胞因子、激素水平以及相關(guān)受體蛋白的表達(dá)，探討藥物的療效差異及劑量相關(guān)性，以及療效與下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA）軸的關(guān)系。 目的： 構(gòu)建MS的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型—EAE小鼠模型，，通過雌激素、雌激素受體抑制劑及不同劑量的有雌激素樣作用的ICA對(duì)EAE小鼠的治療，從臨床癥狀評(píng)分、免疫機(jī)制相關(guān)的細(xì)胞因子、組織病理學(xué)改變等方面探討ICA對(duì)EAE的治療作用及量效關(guān)系；從外周血、靶器官、中樞等方面的分子水平、蛋白水平等多層面分析不同劑量ICA對(duì)HPA軸相關(guān)激素表達(dá)水平的影響；通過對(duì)不同劑量ICA作用下內(nèi)源性雌激素水平的檢測，研究ICA雌激素樣作用；并且通過對(duì)ER拮抗劑組與其他組別對(duì)比，研究ICA對(duì)EAE的治療作用，并探討這種治療作用和HPA軸的激活的關(guān)聯(lián)性。為植物雌激素治療MS及新藥的開發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1、將髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白多肽（myelin oligodendrocyteglycoprotein,MOG35-55）稀釋成600ug/ml，然后稀釋液與等量的完全弗氏佐劑（completefreund’s adjuvant,CFA）（滅火結(jié)核分枝桿菌的終濃度為5mg/ml）混合作為抗原，接種于C57BL/6小鼠雙側(cè)側(cè)腹壁及脊柱兩側(cè)皮下（分四點(diǎn)，每部位50ul），免疫后第7d加強(qiáng)免疫1次（等劑量MOG/CFA）。在免疫后第0及48h腹腔內(nèi)注射500ng百日咳毒素，誘導(dǎo)小鼠EAE模型。 2、將EAE發(fā)病小鼠按神經(jīng)損傷癥狀評(píng)分隨機(jī)分成8組，每組至少6只。分別分為A組急性組，在發(fā)病高峰期處死；B為模型對(duì)照組，讓其按自然病程發(fā)展；C為雌激素組，予以己烯雌酚0.2mg/kg.d灌胃；D為ICA大劑量組，予以ICA300mg/kg.d灌胃；E為ICA中劑量組，予以ICA150mg/kg.d灌胃；F為ICA小劑量組，給予50mg/kg.d灌胃；G為ICA加ICI182,780組，給予ICA150mg/kg.d灌胃加ICI182,7801mg/mouse.d皮下注射，M為空白對(duì)照組，給予模型鼠等容量0.5％羧甲基纖維素鈉混懸液灌胃；N為正常對(duì)照組，予等容量0.5％羧甲基纖維素鈉混懸液灌胃。免疫接種后第9天開始陸續(xù)發(fā)病，第14天左右達(dá)到發(fā)病高峰期開始給藥，連續(xù)給藥5天。于免疫前一天開始每天稱重，并于免疫第9天開始觀察小鼠神經(jīng)系統(tǒng)癥狀并評(píng)分，根據(jù)評(píng)分情況進(jìn)行分組，給藥。約14天時(shí)將急性組處死取材，于19天左右將灌胃各組處死，約40天時(shí)將模型對(duì)照組（B組）處死，采集血標(biāo)本及腦、脊髓等組織標(biāo)本。 3、取小鼠脊髓腰膨大進(jìn)行HE染色，用Luxol Fast Blue（LFB）法髓鞘染色；用3’末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法（Terminaldeoxynucleotidylteansferac-mediated Oridine3’-Tri-phosphatebiotinNick End Labeling,TUNEL）觀察脊髓組織的細(xì)胞凋亡情況；對(duì)腦組織進(jìn)行勻漿，提取蛋白，用蛋白印跡法（Western-blot，WB）檢測腦組織中糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor,GR）的表達(dá)情況。 4、采血并以酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）測定血清中白細(xì)胞介質(zhì)-17A（interleukin-17,IL-17A）含量。并用放射免疫法測定血清中皮質(zhì)酮（corticosterone,CORT）的含量。 5、對(duì)藥物治療各組小鼠和模型組、空白對(duì)照組小鼠進(jìn)行臨床癥狀評(píng)分、體重稱量、炎性病灶凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞因子含量、激素含量等進(jìn)行綜合分析，評(píng)估比較不同劑量ICA與雌激素對(duì)EAE的療效，以及ER拮抗劑對(duì)ICA療效的影響。并對(duì)各組小鼠的療效和GR表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果: 1、建立的EAE模型小鼠，所表現(xiàn)出的神經(jīng)功能損害癥狀、HE染色、脊髓腰膨大處的髓鞘染色，均符合典型EAE模型的病理和臨床特征，模型對(duì)照組（B組）有緩解-復(fù)發(fā)現(xiàn)象。 2、雌激素組（C組）、ICA大劑量組（D組）、ICA中劑量組（E組），治療后體重均比治療前增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ICA小劑量組（F組）體重明顯減輕且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01；中劑量ICA+ICI組（G組）治療后體重也有減輕，但P＞0.05;治療后臨床癥狀評(píng)分B、C、D、E各組都有下降，以C組和D組下降最為明顯，ICA小劑量組（F組）評(píng)分均值保持基本不變，D組和F組評(píng)分比較差異明顯，P＜0.01�？瞻讓�(duì)照組（M組）和G組癥狀評(píng)分則升高。 3、脊髓細(xì)胞凋亡圖片觀察到一些現(xiàn)象，神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)目排列順序依次為：模型對(duì)照組（B組）＞ICA小劑量組（F組）＞ICA大劑量組（D組）＞正常對(duì)照組（N組），但因樣本數(shù)目過少，無法統(tǒng)計(jì)。 4、 IL-17A的水平：與正常組相比各模型組都有升高，以A、B、G升高具有顯著差異，P＜0.05；而C、D兩組較A、B、G三組比均明顯降低，且C組比G組降低更為明顯，且P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而E組和G組比，雖有降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-17A濃度和治療前后評(píng)分差值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.8581，P=0.0288）。 5、同樣臨床癥狀緩解明顯的C組和D組，CORT水平卻差異甚大。和正常對(duì)照組比較C組升高，而D組則下降，C組和D組比較，P＜0.0001。D組CORT水平和IL-17A水平呈單向正相關(guān)（r=0.812，P=0.0496）。 6、腦組織中GR蛋白表達(dá)水平：與正常對(duì)照N組比較，A、B、C、D、E、M各組都有升高，以B、C、D、M各組升高更為顯著，P＜0.01；與M組（空白對(duì)照組）相比，除G組降低之外其余平均值都升高，但僅C組升高較明顯，P＜0.05；G組和E組比較有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上各統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均以雙側(cè)P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1、 ICA對(duì)EAE模型鼠的神經(jīng)損害具有改善作用，且呈一定的劑量依賴性。ER拮抗劑可使ICA的治療作用減弱。 2、大劑量ICA對(duì)炎性細(xì)胞因子IL-17A具有降低作用，表明大劑量的ICA具有明顯的抗炎作用。 3、 ICA可增高腦組織GR的表達(dá)，但模型鼠血CORT含量降低，表明其可能具有促進(jìn)HPA軸的功能，提示其在臨床應(yīng)用中一定劑量的ICA與糖皮質(zhì)激素治療可能具有協(xié)同作用。 4、 ICA治療作用可能機(jī)制是與ER結(jié)合，其擬雌激素樣作用直接發(fā)揮抗炎作用；或是通過促進(jìn)HPA軸的功能，從而增強(qiáng)機(jī)體抗炎和免疫抑制功能。
【關(guān)鍵詞】：EAE模型 淫羊藿苷 雌激素 糖皮質(zhì)激素受體 炎性細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R744.51
【目錄】：

• 中英文縮略語對(duì)照6-8
• 中文摘要8-12
• Abstract12-17
• 引言17-19
• 第一部分 EAE 模型建立19-31
• 1 材料與方法19-23
• 1.1 材料19-20
• 1.2 方法20-23
• 2 結(jié)果23-28
• 2.1 EAE 小鼠發(fā)病情況23-24
• 2.2 EAE 小鼠病理學(xué)改變情況24-27
• 2.3 小鼠神經(jīng)功能評(píng)分27-28
• 2.4 小鼠體重變化28
• 3 討論28-31
• 第二部分 雌激素、ICA 治療 EAE 的療效及關(guān)聯(lián)性分析31-54
• 1 材料與方法32-35
• 1.1 材料32-33
• 1.2 方法33-35
• 2 結(jié)果35-46
• 2.1 臨床評(píng)分及體重變化比較35-40
• 2.2 脊髓腰膨大細(xì)胞凋亡數(shù)目趨勢比較40-41
• 2.3 血清中細(xì)胞因子 IL-17A 水平的檢測41-42
• 2.4 放射免疫法檢測各組小鼠血清中 CORT 水平42-43
• 2.5 各組小鼠腦組織中 GR 蛋白表達(dá)的檢測43-45
• 2.6 影響療效的各因素間相關(guān)性的探討45-46
• 3 討論46-54
• 3.1 雌激素對(duì) MS 的治療作用46-48
• 3.2 ICA 對(duì) EAE 模型鼠治療效果的影響48-49
• 3.3 ICA 對(duì) HPA 軸的影響49-52
• 3.4 ICA 對(duì) EAE 免疫相關(guān)細(xì)胞因子的影響52-54
• 全文總結(jié)54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文60-61
• 文獻(xiàn)綜述一61-68
• 參考文獻(xiàn)66-68
• 文獻(xiàn)綜述二68-73
• 參考文獻(xiàn)71-73
• 致謝73-74

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8 王朦夏;淫羊藿苷對(duì)EAE模型鼠的治療作用及其對(duì)HPA軸的影響[D];廣東藥學(xué)院;2013年

9 曹湘博;V_E干預(yù)D-半乳糖亞急性中毒擬衰老模型鼠免疫衰老實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2006年

本文編號(hào)：962260