本文關(guān)鍵詞：糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型的建立及中藥干預(yù)作用

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【摘要】：目的： 1.建立糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型,從體表特征、行為學(xué)、血液學(xué)相關(guān)指標(biāo)等不同維度確立模型評(píng)價(jià)體系,為糖尿病并發(fā)抑郁癥的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。 2.以所建糖尿病并發(fā)抑郁癥模型動(dòng)物為研究對(duì)象,給予中藥復(fù)方左歸降糖解郁方干預(yù),明確其降糖、調(diào)脂和抗抑郁作用,并探明其治療糖尿病并發(fā)抑郁癥的作用機(jī)理,為糖尿病并發(fā)抑郁癥的防治提供新思路和新方法。 方法： 1.糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型的建立。SD大鼠高脂灌胃2w后腹腔注射鏈脲佐菌素(38mg/kg),行為學(xué)隨機(jī)分為2組,糖尿病組和糖尿病+慢性應(yīng)激組；正常大鼠行為學(xué)隨機(jī)分為2組,正常組和慢性應(yīng)激組。慢性應(yīng)激28天后,測(cè)定各組大鼠的體重,進(jìn)行Open-field和Morris水迷宮行為學(xué)評(píng)價(jià),生化法檢測(cè)血糖、糖化血紅蛋白、胰島素水平、血脂含量；ELISA法測(cè)定血漿促腎上腺激素釋放激素(CRH)、促’腎上腺皮質(zhì)激素(ACTHX)、皮質(zhì)酮(CORT)含量,HE染色觀察各組大鼠海馬、下丘腦、垂體和腎上腺的病理改變,免疫組化和Western-blotting方法檢測(cè)各組大鼠海馬糖皮質(zhì)激素受體(GR)和11p羥類固醇脫氫酶1(Hβ-HSD1)蛋白的表達(dá),RT-PCR方法檢測(cè)其mRNA表達(dá)。 2.左歸降糖解郁方的干預(yù)作用。采用方法1確定的糖尿病并發(fā)抑郁癥建模方法復(fù)制動(dòng)物模型,并隨機(jī)分為5組,糖尿病并發(fā)抑郁癥模型組,二甲雙胍(1.8mg/kg)+百憂解(10.8mg/kg)組,左歸降糖解郁方高、中、低劑量組,以正常組為對(duì)照。給藥4周后,各組大鼠按照方法1指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果： 1.與正常組比較,糖尿病模型+慢性應(yīng)激組大鼠體重明顯降低(P0.05); Open-field實(shí)驗(yàn)中活動(dòng)總數(shù)明顯減少(P0.05); Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中逃避潛伏期明顯延長(zhǎng),空間探索時(shí)間明顯縮短(P0.05)；血液生化指標(biāo)中,血糖異常升高,糖化血紅蛋白含量顯著升高,胰島素抵抗明顯,膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇明顯升高,高密度脂蛋白膽固醇明顯降低(P0.05)；血漿CRH、ACTH、CORT明顯升高(P0.05)；HE染色發(fā)現(xiàn),其海馬、下丘腦、垂體、腎上腺存在明顯的病理改變；免疫組化和、(?)estern-blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)海馬11β-HSD1蛋白表達(dá)明顯升高,GR表達(dá)明顯降低(P0.05); RT-PCR檢測(cè)結(jié)果與Western-blotting保持一致。 2.與正常組比較,模型組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)均出現(xiàn)明顯異常(P0.05)。與模型組比較,左歸降糖解郁方高劑量組大鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯增多(P0.05),學(xué)習(xí)記憶能力得到一定程度恢復(fù),血糖趨向穩(wěn)定,胰島素抵抗程度減輕,糖化血紅蛋白、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平顯著降低(P0.05),高密度脂蛋白膽固醇水平顯著升高(P0.05),血漿CRH、 ACTH、CORT水平明顯降低(P0.05), HPA軸亢進(jìn)緩和,海馬、下丘腦、垂體、腎上腺病理改變減少,損傷程度減弱,海馬11β-HSD1蛋白表達(dá)顯著降低,、GR蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05)；而其中劑量和低劑量作用較弱。 結(jié)論： 1.結(jié)合糖尿病并發(fā)抑郁癥的臨床特征,采用Open-field實(shí)驗(yàn),Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),血糖及糖化血紅蛋白,胰島素抵抗三項(xiàng),血脂四項(xiàng)等指標(biāo)可建立一套糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)體系。 2.采用14天高脂灌胃、小劑量鏈脲佐菌素(38mg/kg)注射及28天慢性應(yīng)激的復(fù)合造模方法可成功制備糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型。 3.糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠下丘腦、垂體、腎上腺病理?yè)p傷嚴(yán)重,HPA軸分泌亢進(jìn)加劇,皮質(zhì)酮體內(nèi)含量異常升高導(dǎo)致海馬病理改變,而海馬11p-HSD1表達(dá)上調(diào),GR表達(dá)下調(diào)可能協(xié)同參與皮質(zhì)酮損傷海馬過程,并促進(jìn)了糖尿病并發(fā)抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。 4左歸降糖解郁方可穩(wěn)定模型大鼠體重,改善其抑郁行為,降低血糖,調(diào)節(jié)血脂,緩和胰島素抵抗和HPA軸分泌亢進(jìn),減少海馬等組織的病理?yè)p傷,其治療作用可能與升高海馬GR表達(dá),減少11β-HSD1表達(dá)有關(guān),具有一定的療效,值得進(jìn)一步研究和開發(fā)。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病并發(fā)抑郁癥 動(dòng)物模型 HPA軸紊亂 海馬損傷 11β羥類固醇脫氫酶1 糖皮質(zhì)激素受體 左歸降糖解郁方
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R285.5;R-332;R259
【目錄】：

• 英文縮略詞表7-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 引言15-18
• 第一部分 糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型的建立18-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 1.1 主要試劑18-19
• 1.2 主要溶液與緩沖液19-20
• 1.3 主要儀器20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組20-21
• 2.2 模型的建立方法21
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)性糖尿病動(dòng)物模型的建立21
• 2.2.2 慢性應(yīng)激方法21
• 2.3 指標(biāo)測(cè)定21-31
• 2.3.1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)21-22
• 2.3.2 血糖、血脂指標(biāo)測(cè)定22-23
• 2.3.3 HPA軸內(nèi)分泌相關(guān)指標(biāo)測(cè)定23
• 2.3.4 組織病理學(xué)檢測(cè)23-24
• 2.3.5 免疫組化檢測(cè)24-25
• 2.3.6 海馬11β-HSD1和GR的Western-blotting檢測(cè)25-29
• 2.3.7 海馬11β-HSD1和GR的RT-PCR檢測(cè)29-31
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-42
• 3.1 大鼠一般情況觀察32
• 3.2 體質(zhì)量變化情況32-33
• 3.3 Open-field實(shí)驗(yàn)33-34
• 3.4 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)34
• 3.5 血糖、血脂、胰島素指標(biāo)測(cè)定34-36
• 3.6 HPA軸內(nèi)分泌相關(guān)指標(biāo)測(cè)定36
• 3.7 組織病理檢測(cè)36-39
• 3.7.1 海馬形態(tài)學(xué)變化36-37
• 3.7.2 下丘腦形態(tài)學(xué)變化37
• 3.7.3 垂體形態(tài)學(xué)變化37-38
• 3.7.4 大鼠腎上腺形態(tài)學(xué)變化38
• 3.7.5 GR、11β-HSD1的免疫組化檢測(cè)38-39
• 3.8 海馬11β-HSD1和GR的Western-blotting檢測(cè)39-40
• 3.9 海馬11β-HSD1和GR的RT-PCR檢測(cè)40-42
• 4 討論42-52
• 4.1 DD動(dòng)物建模方法的選擇42-43
• 4.2 DD動(dòng)物模型評(píng)價(jià)指標(biāo)的確立43-46
• 4.2.1 糖尿病樣指標(biāo)評(píng)價(jià)44-45
• 4.2.2 抑郁樣指標(biāo)評(píng)價(jià)45-46
• 4.3 DD大鼠HPA軸功能紊亂致海馬損傷機(jī)制的研究46-49
• 4.4 DD大鼠海馬GR和11β-HSD1表達(dá)的變化49-52
• 第二部分 左歸降糖解郁方對(duì)DD大鼠的干預(yù)作用52-66
• 1 實(shí)驗(yàn)材料52
• 1.1 主要試劑52
• 1.2 主要溶液與緩沖液52
• 1.3 主要儀器52
• 2 實(shí)驗(yàn)方法52-54
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組52-53
• 2.2 糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型的建立53
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)53
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理53-54
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-62
• 3.1 體質(zhì)量變化情況54
• 3.2 Open-field實(shí)驗(yàn)54-55
• 3.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)55-56
• 3.4 血糖、血脂、胰島素指標(biāo)測(cè)定56-57
• 3.5 HPA軸內(nèi)分泌相關(guān)指標(biāo)測(cè)定57
• 3.6 組織病理檢測(cè)57-60
• 3.6.1 海馬形態(tài)學(xué)變化57-58
• 3.6.2 下丘腦形態(tài)學(xué)變化58-59
• 3.6.3 垂體形態(tài)學(xué)變化59
• 3.6.4 大鼠腎上腺形態(tài)學(xué)變化59-60
• 3.7 GR、11β-HSD1的免疫組化檢測(cè)60-61
• 3.8 11β-HSD1和GR的Western-blotting檢測(cè)61-62
• 4 討論62-66
• 4.1 左歸降糖解郁方的組方原則及藥物配伍意義62-64
• 4.2 左歸降糖解郁方對(duì)DD大鼠的保護(hù)作用64-66
• 結(jié)論66-68
• 創(chuàng)新點(diǎn)68-70
• 不足之處及下一步研究方向70-71
• 致謝71-73
• 參考文獻(xiàn)73-79
• 附錄79-95
• 綜述79-95
• 參考文獻(xiàn)90-95
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文95-96
• 攻讀碩士期間參與的課題96-97
• 攻讀碩士期間獲得的獎(jiǎng)勵(lì)97

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：953592