本文關(guān)鍵詞：HPV18 E5蛋白穩(wěn)定表達(dá)株的篩選及對細(xì)胞增殖和周期的影響

  更多相關(guān)文章： 人乳頭瘤病毒型 E蛋白 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期

【摘要】：本研究篩選能穩(wěn)定表達(dá)HPV18E5蛋白的細(xì)胞株,并檢測HPV18E5蛋白對細(xì)胞增殖及周期的影響。通過PCR方法擴增得到HPV18E5基因,經(jīng)酶切和連接構(gòu)建含His標(biāo)簽的pSecTag-HPV18E5真核表達(dá)質(zhì)粒。運用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Balb/c3T3細(xì)胞,并用含有博來霉素的培養(yǎng)基篩選陽性細(xì)胞株。利用Western blot和免疫酶法鑒定HPV18E5在細(xì)胞中的表達(dá)。運用CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)檢測HPV18E5對細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示pSecTag-HPV18E5真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Balb/c3T3細(xì)胞后,經(jīng)400μg/mL博來霉素篩選21d,得到穩(wěn)定表達(dá)HPV18E5蛋白的細(xì)胞株;與對照組相比,HPV18E5穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的細(xì)胞增殖能力明顯增強,細(xì)胞周期中S期的比值明顯增加。研究表明HPV18E5對細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期有影響。本結(jié)果為進(jìn)一步深入研究HPV18E5蛋白的生物學(xué)特性及致癌作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院環(huán)境與病毒腫瘤學(xué)北京市重點實驗室;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 人乳頭瘤病毒型 E蛋白 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(21277001) 北京市教育委員會科技計劃重點項目(KZ201110005003) 傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室自主研究重點課題(2011SKLID103) 北京工業(yè)大學(xué)基礎(chǔ)基金(015000514314004)
【分類號】：R373
【正文快照】： 人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一種能引起皮膚和黏膜鱗狀上皮增生的DNA腫瘤病毒[1]。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)的人乳頭瘤病毒多達(dá)170種[2-3]。高危型HPV,特別是HPV16、18型感染與人類多種癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。研究表明,90%宮頸癌的發(fā)生與HPV16、18型的感染有關(guān)[5-6

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：950558