本文關(guān)鍵詞：攜帶hHCN4基因重組腺病毒載體體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的 構(gòu)建攜帶人超級(jí)化環(huán)化核苷酸門(mén)控陽(yáng)離子通道4基因(hHCN4基因)的重組腺病毒載體（Ad-hHCN4-IRES/eGFP）在體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，目的檢測(cè)含hHCN4基因的BMSCs中是否有mRNA和蛋白水平的表達(dá)，以求證實(shí)hHCN4基因在BMSCs中能夠表達(dá)，為進(jìn)步證實(shí)攜帶hHCN4基因的BMSCs具有起搏功能提供依據(jù)，為構(gòu)建基因和細(xì)胞相結(jié)合的生物起搏治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法 1.分離純化和培養(yǎng)傳代大鼠BMSCs及鑒定：分離純化采用密度梯度離心法，培養(yǎng)傳代采用貼壁培養(yǎng)法，用倒置顯微鏡觀察活細(xì)胞形態(tài)學(xué)的動(dòng)態(tài)變化，免疫細(xì)胞熒光法鑒定其表面抗原； 2.在體外將已經(jīng)構(gòu)建成功的攜帶hHCN4基因的重組腺病毒載體Ad-hHCN4-IRES/eGFP(目的基因組)轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs； 3.在熒光顯微鏡下，觀察轉(zhuǎn)染目的基因后的BMSCs中綠色熒光蛋白的表達(dá)情況； 4.用RT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BMSCs中mRNA的表達(dá)情況； 5.用Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因組表達(dá)目的基因蛋白。 結(jié)果 1.BMSCs成功分離純化及貼壁傳代：倒置顯微鏡可見(jiàn)經(jīng)原代培養(yǎng)貼壁的BMSCs大多數(shù)為呈克隆樣生長(zhǎng)的成纖維樣的梭形細(xì)胞；經(jīng)傳代后生長(zhǎng)狀態(tài)良好。免疫細(xì)胞熒光法見(jiàn)BMSCs表面抗原CD90、CD44呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率分別為96.74%和94.36%。 2．成功將目的基因組轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs，獲得了表達(dá)hHCN4基因的BMSCs。 3.轉(zhuǎn)染24h后的BMSCs中可見(jiàn)表達(dá)綠色熒光蛋白，且綠色熒光蛋白的表達(dá)及分布不存在明顯差異，轉(zhuǎn)染效率約為20-30％。 4.用RT-PCR法檢測(cè)到轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因組有hHCN4mRNA的表達(dá)； 5．用Western blot法檢測(cè)到轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因組有hHCN4基因蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)論 1．BMSCs可以通過(guò)密度梯度離心法及貼壁培養(yǎng)法被成功分離純化及傳代。 2.采用熒光顯微鏡觀察及RT-PCR法、Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的BMSCs，證實(shí)將攜帶hHCN4基因的重組腺病毒載體Ad-hHCN4-IRES/eGFP在體外可以成功轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs，并能夠表達(dá)hHCN4mRNA和蛋白。
【關(guān)鍵詞】：人超級(jí)化激活環(huán)化核苷酸門(mén)控通道4基因(hHCN4) 腺病毒載體 基因轉(zhuǎn)染 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) 生物起搏
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-9
• 英文縮略語(yǔ)表9-10
• 前言10-11
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法11-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-26
• 結(jié)論26-27
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 附錄31-45
• 綜述31-42
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 在學(xué)期間科研成績(jī)42-43
• 致謝43-44
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷44-45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：937635