本文關(guān)鍵詞：攜帶hHCN4基因重組腺病毒載體體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的 構(gòu)建攜帶人超級化環(huán)化核苷酸門控陽離子通道4基因(hHCN4基因)的重組腺病毒載體（Ad-hHCN4-IRES/eGFP）在體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，目的檢測含hHCN4基因的BMSCs中是否有mRNA和蛋白水平的表達(dá)，以求證實(shí)hHCN4基因在BMSCs中能夠表達(dá)，為進(jìn)步證實(shí)攜帶hHCN4基因的BMSCs具有起搏功能提供依據(jù)，為構(gòu)建基因和細(xì)胞相結(jié)合的生物起搏治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法 1.分離純化和培養(yǎng)傳代大鼠BMSCs及鑒定：分離純化采用密度梯度離心法，培養(yǎng)傳代采用貼壁培養(yǎng)法，用倒置顯微鏡觀察活細(xì)胞形態(tài)學(xué)的動(dòng)態(tài)變化，免疫細(xì)胞熒光法鑒定其表面抗原； 2.在體外將已經(jīng)構(gòu)建成功的攜帶hHCN4基因的重組腺病毒載體Ad-hHCN4-IRES/eGFP(目的基因組)轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs； 3.在熒光顯微鏡下，觀察轉(zhuǎn)染目的基因后的BMSCs中綠色熒光蛋白的表達(dá)情況； 4.用RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染后BMSCs中mRNA的表達(dá)情況； 5.用Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因組表達(dá)目的基因蛋白。 結(jié)果 1.BMSCs成功分離純化及貼壁傳代：倒置顯微鏡可見經(jīng)原代培養(yǎng)貼壁的BMSCs大多數(shù)為呈克隆樣生長的成纖維樣的梭形細(xì)胞；經(jīng)傳代后生長狀態(tài)良好。免疫細(xì)胞熒光法見BMSCs表面抗原CD90、CD44呈陽性表達(dá)，陽性率分別為96.74%和94.36%。 2．成功將目的基因組轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs，獲得了表達(dá)hHCN4基因的BMSCs。 3.轉(zhuǎn)染24h后的BMSCs中可見表達(dá)綠色熒光蛋白，且綠色熒光蛋白的表達(dá)及分布不存在明顯差異，轉(zhuǎn)染效率約為20-30％。 4.用RT-PCR法檢測到轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因組有hHCN4mRNA的表達(dá)； 5．用Western blot法檢測到轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因組有hHCN4基因蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)論 1．BMSCs可以通過密度梯度離心法及貼壁培養(yǎng)法被成功分離純化及傳代。 2.采用熒光顯微鏡觀察及RT-PCR法、Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后的BMSCs，證實(shí)將攜帶hHCN4基因的重組腺病毒載體Ad-hHCN4-IRES/eGFP在體外可以成功轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs，并能夠表達(dá)hHCN4mRNA和蛋白。
【關(guān)鍵詞】：人超級化激活環(huán)化核苷酸門控通道4基因(hHCN4) 腺病毒載體 基因轉(zhuǎn)染 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) 生物起搏
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-9
• 英文縮略語表9-10
• 前言10-11
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法11-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-26
• 結(jié)論26-27
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 附錄31-45
• 綜述31-42
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 在學(xué)期間科研成績42-43
• 致謝43-44
• 個(gè)人簡歷44-45

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李毅;周華富;;HCN4與生物心臟起搏的基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀[J];長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年06期

2 王澤文;宋治遠(yuǎn);姚青;;HCN4基因修飾大鼠MSCs體外誘導(dǎo)獲得的心臟起搏樣細(xì)胞動(dòng)作電位檢測[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年22期

3 蔡軍,林國生,江洪,王騰,曾彬,羅浩,郭軍,李俊,汪蕾;人HCN4基因重組腺病毒載體的構(gòu)建和鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年20期

4 李振宇;慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2002年05期

5 孫克寧;朱化彬;林峰;王棟;郝海生;杜衛(wèi)華;趙學(xué)明;;慢病毒載體的構(gòu)建及其應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年08期

6 徐兆龍;劉仁光;;心臟生物起搏的研究進(jìn)展[J];國際心血管病雜志;2007年02期

7 王德利;腺病毒載體的研究進(jìn)展[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);2004年04期

8 周浩粵;邱漢嬰;盧炯斌;李學(xué)東;;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向心肌樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化:縫隙連接蛋白43的表達(dá)變化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年19期

9 王學(xué)東,李妍,賈三慶,胡大一;心房重構(gòu)——未來心房顫動(dòng)防治的新靶點(diǎn)[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2005年01期

10 鄧松柏;佘強(qiáng);;竇房結(jié)自動(dòng)除極相關(guān)離子通道的研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2008年05期

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本文編號：937635