本文關(guān)鍵詞：人偏肺病毒多表位抗原的構(gòu)建與表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建含人偏肺病毒(h MPV)B細(xì)胞和T細(xì)胞表位的多表位抗原,并在原核系統(tǒng)表達(dá),評(píng)價(jià)其免疫原性和免疫反應(yīng)性。方法以人偏肺病毒NL/1/00不同蛋白為模板,采用在線生物信息學(xué)軟件Bepipred、ABCpred、Bcepred、LEPS及LBTOPE預(yù)測(cè)B細(xì)胞表位,以Net MHCpan及Net MHC預(yù)測(cè)CTL細(xì)胞表位,以Net MHCⅡ預(yù)測(cè)Th細(xì)胞表位。綜合各軟件預(yù)測(cè)結(jié)果,確定候選B細(xì)胞及T細(xì)胞表位,各表位間加入間隔序列"GPGPG"和"KK",串聯(lián)為多表位抗原基因mea,與p ET32a(+)連接后轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)宿主菌,經(jīng)含氨芐的LB平板培養(yǎng)基篩選、鑒定獲得重組p ET32a(+)-mea,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)獲得多表位抗原(MEA),以鎳層析柱純化,以Western blot鑒定表達(dá)蛋白,以MEA免疫小鼠,以ELISA法檢測(cè)產(chǎn)生抗體效價(jià),以間接免疫熒光法(IFA)檢測(cè)抗體特異性。結(jié)果共預(yù)測(cè)篩選人偏肺病毒B細(xì)胞表位6個(gè),CTL表位4個(gè),Th細(xì)胞表位2個(gè),串聯(lián)為多表位抗原基因mea,經(jīng)與p ET32a(+)重組后,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)宿主菌,經(jīng)IPTG 30℃誘導(dǎo)5 h,上清及沉淀均有目的蛋白表達(dá)。上清經(jīng)鎳層析柱純化后獲得重組多表位抗原MEA,濃度為1 mg/ml。Western blot檢測(cè)顯示,表達(dá)的MEA可與抗His抗體結(jié)合。經(jīng)MEA免疫的BALB/c小鼠的抗血清經(jīng)ELISA檢測(cè),抗體效價(jià)達(dá)105以上;經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè),抗血清能與感染vero-E6細(xì)胞的h MPV結(jié)合。結(jié)論成功構(gòu)建了h MPV多表位抗原基因,并在原核系統(tǒng)成功表達(dá),獲得多表位抗原MEA。該抗原具有很好的免疫原性和免疫反應(yīng)性,并可與h MPV病毒發(fā)生結(jié)合,具有病毒特異性。
【作者單位】： 天津市疾病預(yù)防控制中心病原生物檢測(cè)所;天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 人偏肺病毒 B細(xì)胞表位 T細(xì)胞表位 多表位抗原
【基金】：中國博士后科學(xué)基金(2013M541186) 天津市自然科學(xué)基金(15JCYBJC24700) 天津市衛(wèi)生計(jì)生委科技基金(2013KY20)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 急性呼吸道感染(acute respiratory tract infections,ARTIs)是人類發(fā)病和死亡的重要原因之一,也是引起世界范圍內(nèi)5歲以下兒童死亡的首要原因[1]。人偏肺病毒(human metapneumovirus,h MPV)是荷蘭學(xué)者于2001年從呼吸道感染的嬰幼兒鼻咽吸取物標(biāo)本中分離到的一種新病毒,屬于副，

本文編號(hào)：936541