本文關(guān)鍵詞：攜Apoptin和PEG3啟動(dòng)子雙特異性重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定

  更多相關(guān)文章： 重組腺病毒 Apoptin 進(jìn)行性增量基因 特異性 抗腫瘤

【摘要】：目的利用凋亡素基因(Apoptin)和進(jìn)行性增量基因3(progression-elevated genes 3,PEG3)構(gòu)建具有特異性殺傷和特異性復(fù)制功能的雙特異性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,為研究Ad-Apoptin-PEG3p-E1a的抗腫瘤作用奠定基礎(chǔ)。方法從pMT-E1a和pIRES-neo獲得目的基因E1a和PolyA并連接入pKS-PEG3p,用XhoⅠ和SpeⅠ雙酶切后連接入pAd-Apoptin,獲得穿梭載體pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a。用pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a和腺病毒骨架質(zhì)粒(pAd5)共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,獲得重組腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,利用RT-PCR、Western blot和電鏡對(duì)重組病毒進(jìn)行鑒定,采用MTS檢測(cè)病毒對(duì)A549細(xì)胞的抑制效果及其對(duì)L02細(xì)胞的影響;通過繪制一步生長(zhǎng)曲線,檢測(cè)重組毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制情況。結(jié)果構(gòu)建的重組病毒基因組中含有Apoptin目的基因,電鏡下具有正常形態(tài)。MTS檢測(cè)重組腺病毒對(duì)A549細(xì)胞的抑制作用具有時(shí)效和量效關(guān)系(P0.05),抑制作用在100MOI、96h時(shí)達(dá)峰值為(79.84±1.0)%,對(duì)正常細(xì)胞L02無(wú)顯著影響,該雙特異性重組腺病毒能夠在A549腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,在L02細(xì)胞內(nèi)幾乎無(wú)復(fù)制能力。結(jié)論成功包裝重組腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,且該病毒具有腫瘤特異性殺傷和腫瘤特異性復(fù)制功能。
【作者單位】： 延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 重組腺病毒 Apoptin 進(jìn)行性增量基因 特異性 抗腫瘤
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 腺病毒(adenovirus,Adv)是一種無(wú)囊膜的雙鏈DNA病毒,基因組大小約為36kb[1]。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)的人腺病毒有100多種血清型,其中用于人類腫瘤基因治療的多為人5型腺病毒�；蛑委熞蚩赡孓D(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞表型或誘導(dǎo)細(xì)胞自我毀滅而備受關(guān)注,病毒療法為其中的主要領(lǐng)域[2-3]。RAPAd.Ⅰ腺

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 章應(yīng)慧,屈伸,Mathieu H.M.Noteborn;凋亡素:一種誘導(dǎo)腫瘤特異性細(xì)胞凋亡的病毒蛋白[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳蘭英,趙楨,王曉濤,屈二軍,陳建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宮頸癌中高表達(dá)和癌變關(guān)系的研究[J];癌變.畸變.突變;2005年04期

2 程烽;盛燕;施靜藝;陳漪;徐潮;劉智;梁軍;潘春明;朱忠勇;宋懷東;;重疊延伸PCR法構(gòu)建UGRP1基因啟動(dòng)子的點(diǎn)突變表達(dá)載體[J];癌變.畸變.突變;2007年01期

3 溫居一;張積仁;李鵬;張軍;王斌;;NADH對(duì)二乙基亞硝胺所致L02人肝細(xì)胞株p53基因突變和c-erbB2基因表達(dá)的影響[J];癌變.畸變.突變;2009年05期

4 金藝?guó)P;李鐵臣;王瑩;劉東華;孫珍貴;;ERCC1和XPD單核苷酸多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌鉑類化療敏感性的關(guān)系[J];癌變·畸變·突變;2010年05期

5 連京華,秦卓明,黃波;雞傳染性支氣管炎研究進(jìn)展[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2000年01期

6 錢鳳芹,劉長(zhǎng)梅,任紅梅,李愛芹,莊文忠;雞新城疫病毒山東分離株F蛋白基因的克隆與鑒定[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2001年03期

7 王繼英;武英;郭建鳳;呼紅梅;張印;;萊蕪黑豬保種群促卵泡素β亞基和雌激素受體基因、基因型變化情況[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年01期

8 東野傳現(xiàn);史玉穎;黃中利;劉玉山;亓麗紅;傅劍;;“禽喘康顆粒沖劑”對(duì)雞人工感染新城疫病毒臨床效果的研究[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年02期

9 李子劍;李云龍;陳蘇;艾武;宋敏訓(xùn);李玉峰;;鴨腸炎病毒US2基因的序列測(cè)定與分析[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年03期

10 陳靜;胡曉輝;苗華榮;張建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技術(shù)體系的優(yōu)化[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱林;江昌俊;葉愛華;李葉云;余梅;鄧威威;;茶樹ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建[A];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)理論與實(shí)踐——安徽現(xiàn)代農(nóng)業(yè)博士科技論壇論文集[C];2007年

2 莊金秋;梅建國(guó);沈志強(qiáng);;赤羽病病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

3 莊金秋;梅建國(guó);沈志強(qiáng);;犬瘟熱病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

4 蔣再學(xué);陳征兵;林文;余邵華;竺薇;張曉明;羅滿林;;仔豬偽狂犬PCR鑒定及病毒分離[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

5 陳宗艷;朱英奇;李傳峰;李露;付玉志;王超;劉光清;;新發(fā)鴨源呼腸孤病毒(TH11株)的分離與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

6 王珊;劉冰;李德朋;孫遠(yuǎn);馬勇;田秀麗;宋宇;王承宇;張乃生;;馬蹄香治療犬細(xì)小病毒性腸炎的療效觀察[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜內(nèi)科學(xué)分會(huì)第七屆代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2011年

7 程晶;蔭碩焱;蓋新娜;郭鑫;楊漢春;;2006—2008年我國(guó)部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)PRV血清流行病學(xué)調(diào)查[A];微生物與人類健康科技論壇論文匯編[C];2009年

8 趙東升;蓋新娜;孫棟;郭鑫;楊漢春;;豬腦心肌炎滅活疫苗的制備及小鼠免疫研究[A];微生物與人類健康科技論壇論文匯編[C];2009年

9 徐波;張莉;李啟云;王景會(huì);姜媛媛;楊貞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大腸桿菌中的表達(dá)[A];中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)年會(huì)論文集2008（下冊(cè)）[C];2008年

10 劉冬光;廖娟紅;于清龍;陳穎鈺;陳煥春;郭愛珍;;融合蛋白R(shí)v3872/CFP-10/ESAT-6的制備及在牛結(jié)核診斷中的初步應(yīng)用[A];中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)年會(huì)論文集2009（上冊(cè)）[C];2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙冬敏;B亞群禽白血病病毒分離株的生物學(xué)特性[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 趙鵬;豬繁殖與呼吸綜合征病毒在抗體選擇壓下的變異[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 劉棟;畜禽補(bǔ)體C3d基因克隆及序列分析和重組雞C3d免疫佐劑效果研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 張青嬋;A亞群禽白血病病毒不同分離株的基因組和生物學(xué)特性比較[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 徐榮燕;嗜熱真菌糖苷酶的基因克隆、表達(dá)與分子改造[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 殷慧群;豬誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的建立[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 楊瑞梅;單鏈抗體介導(dǎo)狂犬病毒shRNA靶向制劑的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 宋翠平;H5N1禽流感和鵝Ⅰ型副粘病毒分離株的生物學(xué)特性及感染性的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

9 郭新軍;擬黑多刺蟻肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2與肌鈣蛋白Ⅰ亞基基因的克隆及其在發(fā)育中的表達(dá)研究[D];陜西師范大學(xué);2010年

10 生書晶;何首烏芪合酶基因（FmSTS）的克隆、鑒定及轉(zhuǎn)化擬南芥研究[D];華南理工大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高紅梅;ETEC對(duì)斷奶腹瀉仔豬胃腸道緊密連接蛋白ZO-1的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 許媛媛;鴨瘟的動(dòng)態(tài)病理學(xué)研究和鴨CD4的克隆[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 王樹云;斑點(diǎn)叉尾洶病毒ORF6和ORF10基因的原核表達(dá)及其功能的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 汪艷杰;水稻polycomb基因家族甲基化狀態(tài)初步檢測(cè)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 王偉;惡臭假單胞菌表面展示細(xì)菌漆酶及對(duì)染料的脫色性能[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 李爽;鴨源禽呼腸孤病毒感染雛鴨的免疫病理學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 黃輝;哈維弧菌表面抗原的克隆和真核表達(dá)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 段龍川;產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌重組沙門氏菌基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 龔瑞;粘附素ClfA和Cna對(duì)金黃色葡萄球菌乳腺炎的免疫保護(hù)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 徐珊珊;重組桿狀病毒介導(dǎo)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 田俊,王宇哲,申志發(fā),宗義強(qiáng),屈伸;雞貧血病毒vp3基因體內(nèi)抑瘤效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 嚴(yán)敏;孫茂盛;謝天宏;王文舉;岳磊;李鴻鈞;;表達(dá)甲型H1N1流感病毒血凝素重組腺病毒的構(gòu)建及免疫學(xué)評(píng)價(jià)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2012年04期

2 ;表達(dá)人γ-干擾素的重組腺病毒的制備檢測(cè)[J];藥物生物技術(shù);1999年02期

3 王光明,楊陽(yáng),李愛玲,郝潔,高翔,謝蜀生;CTLA4Ig-IRES-OX40Ig重組腺病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2005年05期

4 徐人爾,應(yīng)蓓蓓,王義斌,趙壽元,李昌本;表達(dá)人白細(xì)胞介素-2的重組腺病毒的制備[J];高技術(shù)通訊;1997年01期

5 萬(wàn)小平;李小榮;譚輝;何峰;裴海平;申z，

本文編號(hào)：936177