本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白H原核表達、多克隆抗體制備及免疫保護作用

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【摘要】：目的為銅綠假單胞菌外膜蛋白H(OprH)工業(yè)發(fā)酵與疫苗開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。方法采用分子克隆技術(shù)構(gòu)建OprH蛋白的表達菌株,通過正交試驗設(shè)計篩選OprH菌株的最佳培養(yǎng)條件與表達條件。利用切膠純化獲得OprH蛋白并免疫小鼠,制備OprH蛋白多克隆抗體,采用ELISA法檢測抗體滴度,蛋白質(zhì)印跡法檢測抗血清特異性;對小鼠免疫OprH蛋白,攻毒銅綠假單胞菌,檢測蛋白的免疫保護作用。結(jié)果 OprH重組載體雙酶切、DNA測序鑒定結(jié)果,以及蛋白表達、純化條帶大小與預(yù)測一致。OprH菌株最佳培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速230r/min,葡萄糖濃度0%,裝液量50mL;最佳誘導(dǎo)表達條件為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷終濃度0.3mmol/L,誘導(dǎo)時菌液D600值0.8,溫度32℃,誘導(dǎo)時間3h。ELISA法獲得OprH抗血清滴度達1∶1 600,蛋白質(zhì)印跡法證實抗血清具有很好的特異性。OprH免疫小鼠激活的特異性免疫對小鼠銅綠假單胞菌感染的保護率達到46.15%,與對照相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建OprH表達載體,純化獲得OprH蛋白,制備OprH蛋白多克隆抗體,實驗結(jié)果表明OprH蛋白對小鼠銅綠假單胞菌感染具有免疫保護作用,并獲得OprH蛋白菌株的最佳培養(yǎng)條件與表達條件。
【作者單位】： 陜西理工學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 銅綠假單胞菌 外膜蛋白H 正交試驗 多克隆抗體
【基金】：陜西省教育廳科學(xué)研究計劃(2013JK0723)~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa),又稱綠膿桿菌,是一種條件致病菌,在正常人的皮膚、呼吸道和腸道等均有此菌存在,是醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌之一。當(dāng)機體抵抗力下降、重大疾病創(chuàng)傷、免疫缺陷以及燒傷后極易誘發(fā)感染,嚴(yán)重時可導(dǎo)致威脅生命的感染性休克[1]。目前,該菌感染

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本文編號：934935